![](/user_photo/_userpic.png)
- •Аминокислоты, белки, ферменты
- •Задание 2. Определение аминных групп методом формольного титрования
- •Задание 3. Качественные реакции на белки
- •Задание 4. Фракционирование белков сульфатом аммония
- •Задание 5. Определение автолитической активности пшеничной муки
- •Задание 6. Определение активности каталазы муки
- •Задание 7. Качественная реакция на α-амилазу муки
- •Задание 8. Определение активности липаз
- •Липиды Задание 9. Качественные реакции на жиры и масла
- •Углеводы Задание 10. Выделение крахмала
- •Задание 11. Качественные реакции на сахара.
- •Витамины Задание 12. Качественные реакции на жирорастворимые витамины.
- •Витамин а
- •Витамин д
- •Задание 13. Качественная реакция на витамин с.
- •Задание 14. Колориметрическое определение витамина в2.
- •Нуклеиновые кислоты Задание 15. Получение нуклеопротеидов
- •Задание 16. Качественные реакции на вещества, входящие в состав нуклеопротеидов
- •Промежуточные продукты обмена веществ Задание 17. Обнаружение этилового спирта
- •Задание 18. Качественная реакция на альдегиды
- •Рекомендуемая литература
- •Оглавление
Министерство сельского хозяйства РФ
ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет
им. К. Д. Глинки
Технологический факультет
Кафедра биохимии и микробиологии
Методические указания
для проведения лабораторно-практических занятий
по курсу «Биохимия пищевых производств» для
студентов V курса технологического факультета
Воронеж 2006
Составители: доценты О.Б. Мараева, Е.Ю. Ухина, А.Л. Лукин, асс. А.В. Стуруа
Рецензент – доцент Тертычная Т.Н.
Методические указания одобрены и рекомендованы к изданию решением кафедры биохимии и микробиологии (протокол № 2 от 9.11.05 г.) и методической комиссии технологического факультета ВГАУ (протокол № 1 от 11.10.05г.)
Аминокислоты, белки, ферменты
Задание 1. Качественная реакция на серусодержащие аминокислоты
В состав молекулы большинства белков входят серосодержащие аминокислоты – цистин, цистеин, метионин. При нагревании со щелочью от этих аминокислот отщепляется сера в виде сероводорода, который можно обнаружить с помощью следующей реакции:
С
Н2SH
СН2OH
C
HNH2
+ 2NaOH CHNH2
+ Na2S
+ H2O
COOH COOH
Na2S
+ (CH3COO)2Pb
CH3COONa
+ PbS
Реактивы и оборудование: штатив с пробирками, уксуснокислый свинец 0,5 % р-р, едкий натрий 20 % р-р, белок куриного яйца неразбавленный.
Ход работы. В пробирку берут 1-2 мл уксуснокислого свинца и по каплям добавляют в раствор едкого натрия до растворения образовавшегося осадка гидрата окиси свинца. Приливают несколько (4-5) капель белка и смесь постепенно нагревают. Наблюдается постепенное потемнение раствора.
Задание 2. Определение аминных групп методом формольного титрования
Аминным азотом называют азот свободных аминных групп, содержащихся в аминокислотах, полипептидах, белках. Знание количества аминного азота имеет большое значение для изучения состьава и строения белковой молекулы и продуктов ее гидролиза. По приросту аминного азота можно следить за скоростью гидролиза белка и изучать действие протеолитических ферментов. Определение аминогрупп также необходимо при изучении обмена белков и аминокислот в организме.
Аминокислоты являются амфотерными электролитами, т.е. обладают кислыми и основными свойствами. Поэтому непосредственное титрометрическое определение аминных или карбоксильных групп в молекуле аминокислот практически невозможно. Метод основан на способности формальдегида связывать свободные аминогруппы с образованием метиленовых производных аминокислот (Шиффовы основания), после чего карбоксильные группы можно оттитровать раствором щелочи.
C
H2NH2
O CH2
– N = C H2
+
H – C
COOH H COOH
C H2 – N = C H2 + NaOH CH2 – N = C H2
COOH COONa
По количеству аминных групп, нейтрализованных щелочью, вычисляют количество свободных аминогрупп, находящихся в растворе аминокислот. Большинство аминокислот содержит эквивалентное количество аминных и карбоксильных групп в молекуле.
Оборудование и реактивы: конические колбы, пипетки на 5 и 2 мл, бюретка на 10 мл. Глицин 0,25 % р-р, фенолфталеин 0,1 % р-р, едкий натрий 0,1 н , формольная смесь: к 6 мл 20 % р-ра формальдегида добавляют 1 каплю фенолфталеина и прибавляют из бюретки каплями 0,1 н р-р NaОН до покраснения раствора.
Ход работы. В коническую колбу отмеряют 3 мл 0,25 % р-ра глицина, добавляют 1 каплю фенолфталеина и 0,1 н р-р NaОН до покраснения жидкости. Затем в нейтрализованный раствор глицина отмеряют 2 мл формольной смеси (красная окраска раствора исчезает). В бюретку наливают 0,1 н NaОН и титруют до появления красной окраски. Отмечают количество 0,1 н р-ра NaОН, израсходованного на титрование, и производят вычисления.
Расчет: 1 мл 0,1 н NaОН соответствует 1,4 мг азота
Х=
Где А – количество 0,1 н NaОН, израсходованного на титрование;
100 – пересчет на 100 г (на 100 %);
1000 – перевод мг азота в г;
0,0075 – 3 мл 0,25 % р-ра глицина соответствует 0,0075 г аминокислоты.