6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Группы крови человека

Феномен перекрестного реагирования сывороток Оαβ(I) впервые описали Landsteiner и Witt в 1926 г. [134] как парадокс, нарушающий стройную концепцию системы АВО, постулирующую 2 агглютиногена – А и В, и два агглютинина – α и β. Вопреки ожиданиям исследователей элюаты, полученные при адсорбции сывороток Оαβ(I) эритроцитами А, реагировали не только с эритроцитами А, но и с эритроцитами В. Такой же результат наблюдали после адсорбции сывороток Оαβ(I) эритроцитами В: элюат реагировал с эритроцитами В и А.

При адсорбции смеси сывороток Аβ(II) и Вα(III) перекрестного реагирования антител не происходило: элюат с эритроцитов А реагировал только с эритроцитами А, элюат с эритроцитов В – только с эритроцитами В (Wiener и соавт. [229]).

Адсорбционные пробы с сывороткой Оαβ(I), а именно возможность удалить с помощью эритроцитов А агглютинины β, а с помощью эритроцитов В – агглютинины α, указывают на то, что антигены А и В содержат общий компонент, который и является, по Винеру, антигеном С.

Весьма убедительными казались доводы оппонентов, отрицавших существо-

вание антигена С. Так, Dodd, Lincoln, Boorman [91, 146], Bird [80] полагали,

что анти-С-антитела представляют собой химически сшитые, несепарируемые, αβ-молекулы, способные реагировать с антигенами А и В. Таким образом, антиген С на эритроцитах А и В – это лишь видимость.

Другиевидныеисследователи(RaceиSanger[184],Доссе[25],П.Н.Косяков[35], Прокоп [56]) также указывали, что α- и β-агглютинины лиц группы О(I) не являются простойсмесью.Логичнодопустить,чтовпроцессесинтезаα-агглютининовиодно- временноβ-агглютининовкакая-точастьизнихможетбытьсобранакакαβ-антитела.

Важным аргументом против существования антигена С явился также тот факт, что до настоящего времени не найдены индивиды, в эритроцитах которых антиген С присутствует в чистом виде без антигенов А и В.

По мнению Wiener [229], некоторые образцы эритроцитов Аx (А4,А5) как раз и являются носителями антигена С в чистом виде. Эти эритроциты не содержат антигена В, а количество антигена А в них крайне мало. Особенностью этих эритроцитов является то, что они не реагируют с сыворотками Вα(III), но реагируют с сыворотками Оαβ(I), так как сыворотки Вα(III) содержат только α-агглютинины, асывороткиОαβ(I)нарядусα-агглютининамиимеютанти-С-антитела.Болеетого, у лиц Аx в сыворотке крови иногда содержатся α1-экстраагглютинины, поэтому нельзяисключать,чтоантигеныА4 иА5таковыминасамомделенеявляются,т.е. не относятся к группе А, а представляют собой антиген С.

Race и Sanger [184] не разделяли точку зрения Винера, указывая на то, что некоторые сыворотки Вα(III) слабо, но все-таки реагируют с эритроцитами А4, А5 [184]. Кроме того, в слюне людей А4, А5 находят растворимый антиген А, нейтрализующий α-агглютинины сывороток Вα(III), что свидетельствует о принадлежности антигенов А4 и А5 к группе А.

Дискуссия относительно существования антигена С в системе АВО, продолжавшаяся до 1970-х годов, в последующие годы не возобновлялась в связи с

81

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

отсутствием новых данных, а также некоторым скептическим отношением иммуносерологов к этому вопросу, не представляющему, по их мнению, большого значения для практики переливания крови.

На наш взгляд, перекрестно реагирующие антитела имеют значение в трансфузиологии. Их присутствие у реципиентов, по-видимому, усугубляет тяжесть посттрансфузионных осложнений. Об этом свидетельствует то обстоятельство, что среди реципиентов О(I), которым перелили кровь другой группы, осложнения протекают более тяжело и риск летального исхода выше, чем у реципиентов A(II) и B(III), которым перелили кровь другой группы. Однако соответствующие иммуносерологические исследования, подтверждающие или опровергающие высказанное положение, не были проведены.

Вместе с тем в литературе накапливались сведения о том, что перекрестно реагирующие антитела, а стало быть и антиген С, имеют значение в акушерстве.

Rosenfield в 1953 г. [188, 189], исследуя групповые антитела у новорожденных и их матерей, обратил внимание на 2 обстоятельства: 1 – если мать и плод имели группу О(I), то у новорожденных α- и β-агглютинины в сыворотке крови присутствовали чаще, чем в случаях, когда мать и плод имели группу A(II) или оба относились к группе B(III); 2 – у женщин с О(I) группой крови ГБН развивалась чаще, чем у рожениц, имевших другие группы крови.

Unger и Wiener [213], Wiener и Wexler [231], подтвердив данные Rosenfield,

показали, что у новорожденных О(I) от матерей О(I) через месяц после рождения перекрестно реагирующие αβ-антитела исчезали, что свидетельствовало об их материнском происхождении.

Kochwa и Rosenfield установили, что перекрестно реагирующие антитела анти-А,В относятся к глобулинам 7Sγ2, которые легкопроникают через плаценту, поскольку размер их молекул меньше, чем у других антител.

Разделяя взгляды Винера, мы предприняли попытку найти подтверждение его концепции, а именно того, что перекрестные реакции в системе АВО обусловлены антигеном С эритроцитов, а не комбинированными αβ-антителами.

Дляначалапредставлялосьцелесообразнымполучитьсобственныеданныеохарактереперекрестныхреакций,свойственныхсывороткамОαβ(I)[20,21,23,24,47].

Материал и методы. Исследовали сыворотки крови 100 доноров, имеющих группу крови О(I), мужчин и женщин. Каждую сыворотку титровали с эритроцитами А и В до и после адсорбции эритроцитами А, В и О. Титр сывороток устанавливали кратным их разведения 0,9 % NaCl. В качестве контроля первые 3 разведения сыворотки тестировалиэритроцитамиО(I).Адсорбцию антител проводили при комнатнойтемпературе 20–22  оСвтечение 1 ч в соотношении2 объемасыворотки  +1 объем плотно упакованного гомогенизированного осадка трижды отмытых эритроцитов. Устойчивость антител к унитиолу (2,3-димеркаптопропансульфонат натрия – CH2SH-CH-SH-CH2SO3Na) оценивали титрованием сыворотки после добавления равного объема 1,25 % раствора этого реактива и инкубации полученной смеси в течение 2 ч при температуре 37  оС. Температурную устойчивость антител исследовали посредством прогревания сывороток при температуре 56 и 70  оС в течение 1 ч и 10 мин соответственно.

82

Из 100 исследованных сывороток группы О(I) 52 не содержали перекрестно реагирующих антител. При уменьшении титра α-антител на 4–8 ступеней после адсорбции этих сывороток эритроцитами А β-антитела оставались в том же титре, что и до адсорбции. Аналогичный результат наблюдали после адсорбции этих сывороток эритроцитами В. Титр β-антител снижался на 4–8 ступеней, в то время как титр α-антител оставался прежним (табл. 3.7).

Таким образом, 52 % сывороток Оαβ(I) не обладали способностью к перекрестному реагированию, 48 % сывороток содержали перекрестно реагирующие антитела. Перекрестное реагирование было симметричным и асимметричным, в частности, 20 из 48 сывороток показали симметричное перекрестное реагирование, т. е. независимо от того, какими эритроцитами (А или В) проводили их адсорбцию, титр α- и β-агглютининов снижался пропорционально.

Другие 28 сывороток показали асимметричное перекрестное реагирование. В 15 сывороткахпослеадсорбцииэритроцитамиАснижалсятитробоихагглютининов(α и β), а после адсорбции эритроцитами В убывал титр только β-агглютининов, титр α-антител оставался прежним. В 13 сыворотках, наоборот, снижение титра обоих агглютининовнаблюдалипослеадсорбцииэритроцитамиВ.Адсорбцияэритроцитами Аснижалатитрα-агглютининов,ноневлияланатитрβ-антител.Такимобразом,пе- рекрестное реагирование по своему характеру может быть симметричным, асимме- тричнымвсторонуА-антигенаиасимметричнымвсторонуВ-антигена.

													Таблица 3.7
	Варианты перекрестной адсорбции сывороток Оαβ(I)
Категория	Серия	Титр					Титр после адсорбции эритроцитами
		до адсорбции					A(II)		B(III)				О(I)
сыворотки	сыворотки	с эритроцитами				с эритроцитами			с эритроцитами			с эритроцитами
		A	В	О		А	В	О	А	В	О	А		В	О
	399	1 : 256	1 : 256		0	1 : 2	1 : 256	0	1 : 256	0	0	1 : 2 56		1 : 256	0
I	626	1 : 32	1 : 8		0	0	1 : 8	0	1 : 32	0	0	1 : 32		1 : 8	0
	997	1 : 256	1 : 128		0	0	1 : 128	0	1 : 256	0	0	1 : 256		1 : 128	0
	846	1 : 64	1 : 32		0	0	1 : 32	0	1 : 64	0	0	1 : 64		1 : 32	0
	129	1 : 128	1 : 128		0	1:2	1 : 32	0	1 : 64	0	0	1 : 128		1 : 128	0
II	272	1 : 256	1 : 128		0	0	1 : 64	0	1 : 64	0	0	1 : 256		1 : 128	0
	397	1 : 256	1 : 64		0	0	1 : 32	0	1 : 32	1 : 2	0	1 : 256		1 : 64	0
	488	1 : 256	1 : 32		0	0	1 : 8	0	1 : 32	0	0	1 : 256		1 : 32	0
	127	1: 256	1 : 128		0	1 : 2	1 : 64	0	1 : 256	1 : 2	0	1 : 256		1 : 128	0
III	855	1 : 128	1 : 64		0	0	1 : 32	0	1 : 128	0	0	1 : 128		1 : 64	0
	505	1 : 256	1 : 128		0	0	1 : 64	0	1 : 128	0	0	1 : 256		1 : 128	0
	705	1 : 512	1 : 256		0	0	1 : 128	0	1 : 512	0	0	1 : 512		1 : 256	0
	400	1 : 128	1 : 128		0	0	1 : 128	0	1 : 64	0	0	1 : 128		1 : 128	0
IV	424	1 : 256	1 : 64		0	0	1 : 64	0	1 : 128	0	0	1 : 256		1 : 64	0
	454	1 : 256	1 : 128		0	1 : 2	1 : 128	0	1 : 128	1 : 2	0	1 : 256		1 : 128	0
	351	1 : 256	1 : 128		0	0	1 : 128	0	1 : 128	0	0	1 : 256		1 : 128	0

Примечание.КатегорияI–сыворотки,несодержащиеперекрестнореагирующихантител, II – сыворотки, содержащие антитела, дающие симметричные перекрестные реакции, IIIиIV– сыворотки,содержащиеантитела,дающиеасимметричныеперекрестныереакции.

83

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Нанашвзгляд,перекрестноереагированиеобусловленонеαβ-агглютининами, как полагала Dodd и соавт., а антителами αС, βС, что в большей мере согласуется с концепцией Винера, а также полученными нами данными. На рис. 3.2 представлена предполагаемая модель этих антител.

1	2	3	4	5
	– антиген А по Винеру		– антиген В по Винеру

Рис. 3.2. Возможные варианты изогемагглютининов в сыворотке Оαβ(I).

1 – α-изогемагглютинины; 2 – β-изогемагглютинины, 3 – С-изогемагглютинины; 4 – αС-изогемагглютинины; 5 – βС-изогемагглютинины.

Представленная структурная модель изогемагглютининов позволяет объяснить характер перекрестного реагирования сывороток Оαβ(I). Сыворотки, не вызывающие перекрестных реакций, содержат только α- и β-антитела (рис. 3.3, п. 1). Сыворотки, вызывающие симметричные перекрестные реакции, содержат, помимо α- и β-антител, антитела αС и βС или анти-С-антитела (рис. 3.3, п. 4). Сыворотки, вызывающие асимметричные перекрестные реакции, содержат α, β и одну из разновидностей антител – αС или βС (рис. 3.3, п. 2, 3).

1.Перекрестная реакция отсутствует 2. Асимметричная перекрестная реакция

(α-агглютинины не могут адсорбироваться на эритроцитах В, β-агглютинины не могут адсорбироваться на эритроцитах А).

(α-агглютинины могут адсорбироваться на эритроцитах В за счет присутствующего на них антигена С).

3.Асимметричная перекрестная реакция 4. Симметричная перекрестная реакция

(β-агглютинины могут адсорбироваться на эри-	(1-й вариант: β-агглютинины адсорбируются на
троцитах А за счет присутствующего на них ан-	эритроцитах А, α-агглютинины адсорбируются
тигена С).	на эритроцитах В за счет рецептора анти-С, 2-й
	вариант: анти-С-агглютинины адсорбируются
	на эритроцитах А и В).

Рис. 3.3. Комбинации агглютининов, обусловливающие различные варианты перекрестного реагирования.

84

Рассмотрим модель асимметричного реагирования сыворотки, которая содержит агглютинины в сочетании, представленном на рис. 3.4.

Рис. 3.4. Вариант асимметрично реагирующей сыворотки.

Согласно схеме сыворотка содержит 50 % α-агглютининов, 75 % – β. Валентность анти-С реагирует как α и β. При адсорбции такой сыворотки эритро- цитамиАα-агглютининыбудутудаленыполностью.Инымисловами,изсыворот- ки будет удалено 50 % антител. При адсорбции сыворотки эритроцитами В будет удалено 75 % антител (50 % β + 25 % α) за счет рецептора анти-С. В случае, если рецептор анти-С связан не с α-, а с β-агглютининами, асимметричное реагирование проявят эритроциты А, унося на своей поверхности 25 % β-агглютининов.

Какдалеенамипоказано,перекрестнореагирующиеантителатакже,какиммунныеантителаАВОиRh,относятсякклассуIgG,устойчивыкунитиолу,лучшереагируют с отмытыми, чем неотмытыми эритроцитами, в отличие от иммунных (термостабильных)антителявляютсятермолабильными(утрачиваютактивностьпослепрогревания сыворотки при 70  оС в течение 10 мин). В противоположность классическимиммуннымантителамIgG,которыеадсорбируютсянаэритроцитах,ноневызывают их агглютинации, перекрестно реагирующие антитела непосредственно агглютинируют эритроциты в солевой среде. В низкой концентрации они утрачивают способность агглютинировать эритроциты, однако сенсибилизируют их подобно неполнымантителамихорошовыявляютсявнепрямойантиглобулиновойпробеКумбса.

Сыворотки лиц Оαβ(I), очевидно, содержат несколько типов групповых анти- тел:изогемагглютининыαиβIgM,αиβIgG,αСиβСIgG,анти-СIgG,иммунные α и β IgM, иммунные α и β IgG, что закономерно обусловливает перекрестные реакции с различными групповыми антигенами.

Важным аргументом, подтверждающим концепцию Винера о существовании антигена С, явились эксперименты по получению специфических антисыворотк. В частности, при иммунизации мышей эритроцитами А(II) и В(III) нами [21] были полученымоноклональныеантителасоспецифичностьюанти-АВ(МКА-АВ).

Материал и методы. Трехмесячным самкам мышей BALB / с вводили по 0,1 мл отмытых 0,9 % NaCl эритроцитов А(II) или В(III) внутрибрюшинно дважды с интервалом в 7 дней. Третью инъекцию производили внутривенно за 5 дней до слияния спленоцитов с клетками миеломы NS-1. Слияние осуществляли по стандартной методике с использованием 45 % полиэтиленгликоля-1500 «Loba» и 5 % диметилсульфоксида. Эффективность гибридизации составляла 10–5. Клонировали гибридные клетки в среде НАТ без фидера. Антителопродуцирующие клоны отбирали с помощью реакции агглютинации в 96-луночных планшетах с отмытыми эритроцитами О(I), А(II) и В(III).

Класс моноклональных антител устанавливали по флюоресценции сенсибилизи-

85

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

рованных эритроцитов со специфическими антимышиными сыворотками, меченными флюоресцеинизотиоцианатом «Sigma». Реакцию учитывали на флюоресцентном микроскопе «Opton». Иммуносерологические параметры моноклональных антител определяли с помощью общепринятых серологических методов: реакции агглютинации в солевой и коллоидной среде, непрямой пробы Кумбса.

Образцы моноклональных антител титровали до и после адсорбции эритроци-

тами А(II), В(III) и О(I).

Адсорбцию антител проводили при комнатной температуре 20–22  оС в течение 1 часа в соотношении 2 объема сыворотки + 1 объем плотно упакованного гомогенизированного осадка трижды отмытых эритроцитов.

Элюцию антител выполняли по методике, описанной Wiener [232], Feng и соавт. [102]: осадок трижды отмытых сенсибилизированных эритроцитов замораживали, затем оттаивали и добавляли к нему 50 % этиловый спирт в соотношении 1 : 9. Смесь вновь замораживали, оттаивали и отмывали дистиллированной водой. К полученномуосадкустромысенсибилизированныхэритроцитовдобавлялиравныйобъем0,15М NaClиинкубировалипритемпературе37 оС1ч,далеесмесьцентрифугировали,полученную надосадочную жидкость (элюат) испытывали на специфичность и активность.

Устойчивость антител к унитиолу (2,3 димеркаптопропансульфонат натрия – CH2SH-CH-SH-CH2SO3Na) оценивали посредством титрования сыворотки после добавления равного объема 1,25 % раствора этого реактива и инкубации полученной смеси в течение 2 ч при температуре 37  оС.

Нейтрализацию антител производили водорастворимыми группоспецифическими субстанциями, фруглюмином А и В, выделенным из желудка свиней и лошадей (производства Белорусского НИИГПК), из расчета 1 мг сухого фруглюмина на 1 мл МКА.

Из полученных гибридом отобрали 8 продуцирующих МКА анти-АВ. Серии 1–7 МКА анти-АВ получили при иммунизации эритроцитами А(II), серию 8 МКА антиАВ – эритроцитами B(III). Все серии антител агглютинировали эритроциты А1(II), А2(II)иВ(III)инереагировалисэритроцитамиО(I).ТитрМКАанти-АВсэритроци-

тамиА1соответствовал1 : 16–1:128,сэритроцитамиB(III)–1 : 8–1:64(табл. 3.8).

Таблица 3.8

Протокол перекрестной адсорбции МКА анти-АВ, полученных при иммунизации мышей эритроцитами А(II) и B(Ш)

		Титр до адсорбции				Титр после адсорбции эритроцитами
	Серия					А(II)			В(Ш)			О(I)
		с эритроцитами
	МКА				с эритроцитами			с эритроцитами			с эритроцитами
		А(II)	В(Ш)	О(I)	А(II)	В(Ш)	О(I)	А(II)	В(Ш)	О(I)	А(II)	В(Ш)	О(I)
1.	B6-1	1 : 16	1 : 8	0	0	0	0	1 : 4	0	0	1 : 16	1 : 8	0
2.	B10-1	1 : 128	1 : 16	0	0	0	0	1 : 4	0	0	1 : 128	1 : 16	0
3.	B6-2	1 : 32	1 : 8	0	0	0	0	1 : 4	0	0	1 : 32	1 : 8	0
4.A4-2		1 : 64	1 : 16	0	0	0	0	1 : 2	0	0	1 : 32	1 : 16	0
5.A1C8		1 : 64	1 : 8	0	0	0	0	1 : 2	0	0	1 : 32	1 : 4	0
6.	B10-2	1 : 128	1 : 16	0	0	0	0	1 : 4	0	0	1 : 128	1 : 16	0
7.AD2-1		1 : 64	1 : 16	0	0	0	0	1 : 2	0	0	1 : 64	1 : 16	0
8.	BD2-2	1 : 16	1 : 64	0	0	1 : 4	0	0	0	0	1 : 16	1 : 64	0

86

Обращал на себя внимание тот факт, что титр МКА анти-АВ (серии 1–7), полученных иммунизацией животных эритроцитами A(II), был на 1–3 ступени выше с эритроцитамиA(II), чем с эритроцитами B(III). Титр МКА анти-АВ (серия 8), полученных иммунизацией животных эритроцитами B(III), был на 2 ступени выше с эритроцитами B(III), чем с эритроцитамиA(II).

При адсорбции МКА анти-АВ серий 1–7 эритроцитами A(II) активность антител полностью (до нуля) снижалась как в отношении эритроцитов A(II), так и эритроцитов B(III). Образец МКА анти-АВ серии 8 после адсорбции эритроцитами A(II) сохранил способность агглютинировать эритроциты B(III) в разведении 1 : 4, полностью утратив активность в отношении эритроцитовA(II).

При адсорбции МКА анти-АВ серий 1–7 эритроцитами B(III) активность антител убывала в отношении эритроцитов B(III), однако в отношении эритроцитов A(II) сохранялась в разведении 1 : 2–1 : 4. Образец МКА анти-АВ серии 8 после адсорбции эритроцитами B(III) утратил активность как в отношении эритроцитов B(III), так иA(II). Титр МКА анти-АВ после адсорбции эритроцитами О(I) не изменился и соответствовал исходному.

Элюаты, снятые с эритроцитов A(II), реагировали с одинаковой авидностью с эритроцитами A(II) и B(III). Элюаты, полученные с эритроцитов B(III), сильнее реагировали с эритроцитами A(II), слабее – с эритроцитами B(III). И в первом, и во втором случаях агглютинация была хорошо выражена.

Полученные данные позволили заключить, что МКА анти-АВ серий 1–7 содержали комбинированные антитела со специфичностью анти-АВ и анти-А, МКА анти-АВ серии 8 – анти-АВ и анти-В.

После инкубации с унитиолом испытуемые антитела не утрачивали активности, что указывало на их принадлежность к классу IgG. Об этом также свидетельствовали эксперименты с флюоресцирующими антимышиными анти-IgG- сыворотками, которые специфически реагировали с эритроцитами, нагруженными субагглютинирующей дозой МКА анти-АВ.

При температуре 6–8  оС МКА анти-АВ проявляли более высокую активность (титр от 1 : 8 до 1 : 128). При температуре 40–45  оС, так же, как и при температуре 20–25  оС, активность антител была ниже (титр от 1 : 4 до 1 : 64). В отличие от клас- сическихтермостабильныхиммунныхантителIgG(например,анти-D,аллоиммун- ныхα,βидр.)полученныеМКАанти-АВоказалисьтермолабильными.Послепро- гревания при температуре 70  оС они полностью утрачивали активность. Уместно упомянуть, что естественные перекрестно реагирующие антитела, содержащиеся в сывороткахОαβ(I),такжеотносятсяккатегориитермолабильных.

Вопреки ожиданиям все полученные серии МКА-АВ легко нейтрализовались группоспецифическими субстанциями – фруглюмином А и В, хотя, как известно, группоспецифические субстанции нейтрализуют только естественные IgM изогемагглютинины α и β, но не разрушают иммунные IgG α- и β-антитела. Это свойство естественных и иммунных антител используют для их идентификации. То обстоятельство, что МКА анти-АВ, будучи иммунными

87

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

IgG, нейтрализовались группоспецифическими субстанциями, существенно отличает их от классических иммунных антител и позволяет выделить их в особую группу – иммунные IgG-антитела термолабильные легко нейтрализуемые. К этой же группе могут быть отнесены перекрестно реагирующие антитела лиц О(I), имеющие идентичную иммуносерологическую характеристику – IgG термолабильные. Их происхождение (иммунное или естественное) остается неясным. Не исключено, что они так же, как МКА анти-АВ, являются иммунными.

Обработка эритроцитов B(III) протеолитическими ферментами, специфически разрушающими антиген В, лишала эритроциты групповых свойств. После такой обработки эритроциты B(III) в отличие от обработанных глутаровым альдегидом приобретали свойства эритроцитов О(I) группы и не агглютинировались сыворотками анти-В. Одновременно исчезала их способность взаимодействовать с перекрестно реагирующими антителами МКА анти-АВ, а также перекрестно реагирующими антителами лиц О(I).

По характеру реагирования полученные МКА анти-АВ вряд ли можно отнести к анти-А и анти-В. По-видимому, это одно, маскирующееся под анти-А и анти-В антитело, реагирующее с общей для эритроцитов А(II) и В(III) антигенной детерминантой. По своим свойствам эти антитела близки к перекрестно реагирующим антителам сывороток лиц О(I), описанным выше. Сам факт получения антител анти-АВ в ответ на иммунизацию эритроцитами какA, так и B служит веским аргументом в пользу того, что оба антигена наряду с существенными серологическими различиями имеют идентичный эпитоп С, в равной мере являющийся сильным иммуногеном.

Таким образом, имеются все основания полагать, что групповая система АВО представлена не двумя агглютиногенами – А, В и двумя агглютининами – α, β, а тремя агглютиногенами – А, В, С и тремя агглютининами – α, β и С.

Антиген С выявляют с помощью перекрестно реагирующих сывороток лиц Оαβ(I) [184, 229]. Именно фракция перекрестно реагирующих агглютининов представляет собой антитела анти-С. Последние можно удалить из сыворотки указанных лиц адсорбцией как А, так и В эритроцитами. При рутинном исследовании антиген С маскируется присутствием антигена А и / или В. Антитела анти-С в обычных методах исследования проявляют себя подобно несепарируемой комбинации α- и β-агглютининов. У лиц, имеющих группу крови А и В, агглютинины анти-С отсутствуют.

Не исключено, что антитела анти-С могут встречаться в чистом виде. Однако отличить их от анти-А и анти-В обычными методами не представляется возможным. У плодов O(I) от матерей O(I) находят антитела со свойствами анти-С, у плодов А(II) и В(III) от матерей А(II) и В(III) таких антител не находят.

Owen (цит. по Wiener [229]) получил чистую фракцию анти-С-агглютининов адсорбцией сывороток Оαβ(I) эритроцитами опоссума и кролика, которые, содержат парциальный антиген В и, по-видимому, не содержат антигена С. После такой обработки оставшиеся в сыворотке антитела анти-С реагировали

88

с эритроцитами А и В, и их можно было удалить эритроцитами А или В в адсорбционной пробе. Однако для окончательного доказательства того, что С-, α- и β-агглютинины являются самостоятельными независимыми друг от друга антителами, не достает эксперимента, в котором антигены А и В были бы разрушены ферментативно (не реагировали бы с сыворотками анти-А и анти-В), но при этом сохранили бы антиген С (продолжали бы агглютинироваться анти-С- сывороткой или элюатом αβ). Только в том случае, если эритроциты не агглютинируются α и β, но продолжают агглютинироваться анти-С-антителами, можно не только с достаточной степенью уверенности констатировать существование антигена С, но и с помощью такого реактива изучить закономерности наследования этого антигена, возможные его разновидности и комбинации. В наших экспериментах ферментативное разрушение В-антигена приводило одновременно к утрате их способности реагировать с МКА анти-АВ. Иными словами разрушение В-антигена влекло за собой разрушение антигена С. Однако, несмотря на отрицательный результат этого эксперимента, полученные нами данные в целом со всей очевидностью свидетельствуют о наличии третьего антигена в системе АВО, существование которого блестяще предсказал Wiener.

Подгруппы крови

А2 и А2В

Эритроциты A(II) с пониженными агглютинационными свойствами впервые описали Dungern и Hirszfeld в 1911 г. [94].

Landsteiner и Levine [133] подразделили фенотип А на подгруппы А1 и А2. Около 88 % лиц группы А относятся к подгруппе А1, 12 % – к подгруппе А2. Среди лиц AB(IV) 80 % А1В, 20 % А2В. Ранее полагали, что лица А1 имеют антигены А и А1, а лица А2 – только антиген А. Клетки А1 и А2 несут различное количество антигенного вещества, имеющего в то же время и некоторые качественные отличия. Так, сыворотки анти-А лиц, имеющих группу крови B(III), содержат 2 фракции анти-А-антител: одна фракция (анти-А) реагирует с эритроцитами А1 и А2, другая (анти-А1) – только c эритроцитами А1 (Wiener и соавт. [225, 227]). Адсорбция сывороток анти-А эритроцитами А2 позволяет получить реактив, который не реагирует с эритроцитами А2, но сохраняет высокую активность по отношению к эритроцитам А1 и может быть использован для

дифференцировки образцов эритроцитов А на А1 и А2 (Р.М. Уринсон [61]). Для определения подгрупп А используют экстраагглютинины α1 и α2, специ-

ально отобранные моноклональные антитела анти-А, а такжелектины Dolichos biflorus и Ulex europaeus. Первый из них реагирует с эритроцитами А1, второй – с эритроцитами А2.

У лиц А1 с частотой примерно 1 на 10 000 встречаются экстраагглютинины α2.Лица А2 и А2В содержат экстраагглютинины α1 с частотой1 на 50 и 1 на 5 соответственно.

Гены А1 и А2 передаются по наследству. Лица А1А2 имеют фенотип А1.

89

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Присутствие аллеля А2 можно обнаружить при семейном исследовании. Если один из родителей передает аллель А2, а другой О или В, фенотип ребенка будет

А2 или А2В.

Оба аллеля (А1 и А2) кодируют синтез ацетилгалактозаминилтрансфераз, которые присоединяют терминальные углеводные группировки А к веществу Н. Указанные трансферазы отличаются друг от друга кинетической активностью, оптимумом рН, изоэлектрическимиточками.А1-трансферазаобладаетбольшейактивностью.

N-ацетилгалактозамины как акцепторный субстрат также, по-видимому, не идентичны, что вносит свой вклад в разнообразие строения антигена А.

Предполагают, что различия А1 и А2 обусловлены липидсвязанными цепями 3 (тип 3Н и 4Н). Поскольку А1-трансфераза более активно присоединяет терминальные углеводные группировки, на цепях 3Н эритроцитов А1 образуется большее число А-антигенных копий, а на цепях 3Н клеток А2 в силу меньшей активности А2-трансферазы образуется меньшее число копий. Таким образом, 3Н-цепи лиц А2 получают существенно меньше вещества А. В то же время на них остается больше вещества Н, чем и объясняется большая экспрессия Н-антигена на эритроцитах А2 по сравнению с эритроцитами А1.

В количественном отношении антиген Н находится в реципрокных соотношениях с А и В. Как отмечено выше, иммунодоминантные А- и В-сахара присоединяются к Н-цепям типов 1, 2, 3 и 4. По мере увеличения количества присоединенных А- или В-антигенных группировок содержание серологически выявляемой субстанции Н уменьшается. Поскольку фенотипы А1 и В несут большее количество иммунодоминантных группировок, серологически выявляемое количество антигена Н на таких клетках минимально. Иными словами, исходное количество вещества Н на клетках указанных групп заблокировано или преобразовано в А- и В-детерминанты. Это убедительно подтверждают результаты сравнительного исследования содержания вещества Н на эритроцитах А2 и О. Эритроциты А2 содержат меньше антигена А, однако количество антигена Н на них выше по сравнению с клетками А1 и В. На эритроцитах А2 для антител анти-Н доступно гораздо большее количество соответствующих антигенных участков. Количество антигена Н на эритроцитах А1 и В иногда настолько мало, что некоторые из носителей этих фенотипов вырабатывают анти-Н-антитела, не реагирующие с собственными клетками. У лиц А2 анти-Н-антитела не образуются.

Предположение о том, что вещество Н экранировано на клетках детерминантами А и В подтверждается и тем, что эритроциты А3, Ах и других слабых подгрупп по количеству содержащегося в них вещества Н приближаются к клеткам группы О. Поскольку аллель О является молчащим, вещество Н на эритроцитах О свободно от группоспецифических углеводных группировок. В силу этого эритроциты О реагируют с анти-Н-антителами более интенсивно, чем клетки А2, и анти-Н-антитела у лиц О никогда не образуются.

Интересная деталь, эритроциты группы О удавалось преобразовать in vitro в А или В посредством обработки А- или В-трансферазой в присутствии А- и

90