6 курс / Медицинская реабилитация, ЛФК, Спортивная медицина / Молекулярные_и_физиологические_механизмы_старения_в_2_т_,_Т_2_Анисимов
.pdfЧасть V. Модифицирующие факторы старения как средства для изучения его механизмов
лучению в дозе 1.5 Гp кpыс, неонатально получавших БДУ в возpасте 1 или 3 месяцев (Napalkov et al., 1989; Anisimov, Osipova, 1993). Комбиниpованное воздействие БДУ и общего рентгеновского облучения в возpасте 1 месяца пpивело у самок к существенному увеличению частоты опухолей по сpавнению с кpысами, подвеpгшимися воздействию только БДУ или облу- чению. У самцов совместное пpименение БДУ и облучения пpивело лишь к pасшиpению спектpа pазвившихся новообpазований по сpавнению с любой дpугой сpавниваемой гpуппой. Когда же самцов кpыс, неонатально полу- чивших БДУ, облучили в возpасте 3 месяцев, наблюдалось существенное увеличение частоты как всех, так и только злокачественных опухолей и их множественности, по сpавнению с гpуппами, подвеpгшимися воздействию только БДУ или рентгеновского облучения. У самок эффект совместного пpименения БДУ и облучения пpоявился в увеличении частоты и множественности злокачественных опухолей. Таким обpазом, в двух экспеpиментах было установлено, что неонатальное пpименение БДУ сопpовождается существенным увеличением чувствительности pяда оpганов и тканей к канцеpогенному действию ионизиpующей pадиации и pасшиpяет спектp индуциpуемых им новообpазований.
В опытах на мышах был изучен совместный эффект неонатального воздействия БДУ и pяда опухолевых пpомотоpов. На самках мышей BALB/c было установлено, что неонатальное введение БДУ существенно увеличи- вает чувствительность животных к действию эстpадиола-бензоата (Осипова, Анисимов, 1992), уpетана (Anisimov, Osipova, 1992a) и 12-O-тетpадека- ноилфоpбол-13-ацетата (Анисимов, Шейко, 1996). В тpех сеpиях опытов на мышах было показано, что неонатальное пpименение БДУ существенно увеличивает чувствительность ткани-мишени, специфичной для каждого из использованных пpомотоpов канцеpогенеза (табл. 13.2).
Таким образом, в опытах с БДУ впервые экспериментально были полу- чены убедительные доказательства, что само по себе избирательное повреждение ДНК может вызывать инициацию канцерогенеза.
13.7. ПЕРСИСТЕНЦИЯ ИНИЦИИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТА 5-БРОМОДЕЗОКСИУРИДИНА
Иммуногистохимическое изучение распределения и персистенции неонатально введенного БДУ у крыс показало, что он присутствовал в ядрах большинства нормальных тканей в период от 1 часа после последней инъекции до возраста 1 года (Ward et al., 1991). Во всех изученных тканях наблюдалось постепенное уменьшение содержания БДУ с возрастом животных. В тканях с нормально низким уровнем синтеза ДНК (эпителий извитых канальцев почек) это снижение было относительно меньшим, чем в тканях с высоким уровнем синтеза ДНК, например в эпителии матки. Эти данные послужили основанием для изучения модифицирующего влия-
101
Â.Н. Анисимов
Òà á ë è ö à 13.3
Частота возникновения новообразований у крыс, подвергшихся неонатальному воздействию 5-бромодезоксиуридина
и N-нитрозометилмочевины в разном возрасте (Anisimov, 1995)
|
|
|
|
3 месяца |
|
|
15 месяцев |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Воздействие |
Ïîë |
|
|
Число |
Число |
|
Число |
|
Число |
|
Число |
|
êðûñ |
опухо- |
Число |
|
êðûñ |
|
опухо- |
||
|
|
|
|
|
||||||
|
|
êðûñ |
с опухо- |
ëåé íà |
êðûñ |
с опухо- |
|
ëåé íà |
||
|
|
|
ëÿìè, % |
1 крысу |
|
ëÿìè, % |
|
1 крысу |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контроль |
Самцы |
71 |
15 |
(21.1) |
1.33 |
63 |
12 |
(19.0) |
|
1.67 |
|
Самки |
79 |
35 |
(44.3) |
1.80 |
67 |
30 |
(44.8) |
|
1.87 |
ÁÄÓ |
Самцы |
85 |
25 |
(32.5) |
1.40 |
45 |
21 |
(46.7)* |
|
1.38 |
|
Самки |
107 |
58 |
(56.3)* |
1.53 |
64 |
40 |
(62.5)* |
|
1.65 |
ÍÌÌ-10 |
Самцы |
35 |
12 |
(34.3) |
1.50 |
42 |
12 |
(28.6) |
|
1.33 |
|
Самки |
35 |
20 |
(57.1)* |
3.20 |
32 |
15 |
(46.9) |
|
2.53 |
ÁÄÓ + ÍÌÌ-10 |
Самцы |
37 |
23 |
(62.2)* |
1.48 |
44 |
24 |
(54.5) |
|
1.11 |
|
Самки |
46 |
29 |
(63.0)* |
2.00 |
43 |
26 |
(60.5)* |
|
2.00 |
ÍÌÌ-50 |
Самцы |
27 |
18 |
(66.7)* |
1.50 |
41 |
15 |
(36.6) |
|
1.40 |
|
Самки |
35 |
25 |
(71.4)* |
3.44 |
31 |
18 |
(58.1)* |
|
2.94 |
ÁÄÓ + ÍÌÌ-50 |
Самцы |
43 |
37 |
(86.1)* |
2.00 |
41 |
30 |
(73.2) |
|
1.67 |
|
Самки |
33 |
27 |
(81.8)* |
3.03 |
35 |
26 |
(74.3)* |
|
2.04 |
Ïð è ì å ÷ à í è å. НММ-10 — N-нитрозометилмочевина, 10 мг/кг; НММ-50 — 50 мг/кг; * — различие
ñсоответствующим контролем достоверно, р < 0.001.
ния возраста и ускоренного старения, индуцируемого неонатальным введением БДУ, на чувствительность крыс к воздействию НММ (Аnisimov, 1995). В этом опыте контрольным крысам обоего пола и крысам, которые подверглись неонатальному воздействию БДУ (3.2 мг на 1, 3, 7 и 21-й дни жизни), в возрасте 3 или 15 месяцев однократно внутривенно ввели НММ в дозе 10 или 50 мг/кг веса тела. Основные результаты представлены в табл. 13.3.
Было установлено, что канцерогенез, индуцированный введением НММ самцам и самкам крыс в 3-месячном и в 15-месячном возрасте, носит дозозависимый характер. При комбинированном воздействии БДУ и НММ, введенном 3-месячным крысам, происходило усиление канцерогенеза в тех органах, которые являются мишенями для НММ. У крыс всех групп, получавших БДУ, отмечалось появление у самцов редких опухолей и торможение развития опухолей гипофиза у самок, а также уменьшение числа гормонозависимых доброкачественных опухолей молочных желез. При введении НММ крысам в возрасте 15 месяцев инициирующий эффект БДУ сохранялся, а новообразования возникали также преимущественно в тех органах, которые являлись мишенями для этого канцерогена (Anisimov, 1995). Расчеты динамики развития опухолей показали, что фатальные опухоли, приводив-
102
Часть V. Модифицирующие факторы старения как средства для изучения его механизмов
Рис. 13.1. Динамика возникновения новообразований: À — у самцов крыс, подвергшихся неонатальному воздействию БДУ и введению НММ в возрасте 3 мес.; Á — в возрасте 15 мес.
По оси абсцисс — возраст, сут.; по оси ординат — количество крыс с опухолями, %. Стрелками указано время введения НММ.
шие к гибели животных, развивались быстрее всего у животных, которым неонатально вводили БДУ, а НММ вводили в возрасте 15 месяцев (рис. 13.1).
Таким образом, при комбинированном воздействии БДУ и дополнительных промотирующих или канцерогенных воздействий происходит существенное усиление канцерогенеза преимущественно в тканях, являющихся мишенями для второго агента.
Этот феномен наблюдался как в случае применения в качестве второго агента, вызывающего опухоли многих локализаций (например, общее рентгеновское облучение или N-нитрозометилмочевина), так и в случае применения агентов, обладающих выраженной тканеспецифичностью действия
103
В. Н. Анисимов
(например, уретана, эстрадиола-бензоата или ТФА). Эти данные, а также отсутствие единого механизма активации онкогена Ki-ras в мезенхимальных опухолях почек у крыс (наличие трансверзий, не свойственных непосредственному действию БДУ на ДНК) убедительно свидетельствуют о развивающейся вследствие неонатального введения БДУ нестабильности генома во всех тканях организма. Результаты опыта, в котором второй агент (НММ) вводился крысам в 15-месячном возрасте, демонстрируют, что инициирующий эффект БДУ длительно сохраняется после его введения во многих тканях организма.
13.8. МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ИНДУЦИРУЕМОГО БДУ СТАРЕНИЯ И КАНЦЕРОГЕНЕЗА
Для математической модели была выбрана схема старения с двумя возможными путями развития процесса: в сторону старения с апоптозом и некрозом для дифференцированных клеток и многостадийный процесс злока- чественной трансформации клетки (Бутов и др., 2001; Butov et al., 2002). Была рассмотрена математическая модель процессов старения и канцерогенеза в пролиферирующих тканях. Совокупный объем тканей с усредненным уровнем пролиферации был принят в размере 1.5 1010 клеток, что соответствует 15 г живой ткани, т. е. совокупности числа клеток с совпадающим уровнем пролиферации, эквивалентным сумме пролиферирующих с различными скоростями различающихся объемов тканей. В ходе моделирования в качестве отдельных фазовых состояний рассматривались: интерфаза клетки, фаза митоза, преинициированное, инициированное и трансформированное состояния клетки, фаза опухолевого роста. Явлениями, определяющими выбытие клеток, были: апоптоз, некроз, иммунная элиминация. Промоторы и инициаторы рассматривались отдельно. Учитывались системный уровень регулирования пролиферации, усредненное белковое и углеводное питание клетки. В качестве причин смерти рассматривались: функциональная недостаточность органа, критический размер опухоли и др. В порядке упрощения допускалось, что основное число явлений апоптоза и некроза происходит во время интерфазы, и большая* часть мутаций приходится на фазу митоза клеточного цикла. Уровень повреждений, обусловленных свободными радикалами, в норме предполагался превышающим совокупный уровень повреждений ДНК мутагенами и повреждений в процессе транскрипции не менее чем в 5 раз. При этом уровни повреждений мутагенами и в результате транскрипции полагались равными. Уровень репарации ДНК предполагался обеспечивающим равновесное восстановление повреждений.
При воздействии БДУ мутагенный фактор старения увеличивался многократно и становился превалирующим (в модели предполагалось, что уровни промоции и инициации оказываются выше базовых в 2000 раз непо-
104
Часть V. Модифицирующие факторы старения как средства для изучения его механизмов
Рис. 13.2. Схема состояний и переходов в клетке при канцерогенезе.
средственно после введения БДУ, после чего концентрация БДУ и частота мутаций экспоненциально уменьшаются).
В соответствии с этими предположениями и приведенной на рис. 13.2 схемой переходов клеток из одного фазового состояния в другое и осуществляется запись математической модели. Так, процесс Nt представляет собой число клеток в интерфазе с некоторой идеальной нормой развитого организма N; Nts — число клеток в фазе митоза; Аt являются считающим процессом числа переходов из состояния Nt, a A st — обратных переходов. Процесс Bt — число событий гибели клеток в ходе старения (апоптоз и некроз). Число актов удвоения при развитии и (или) ущербе ткани обозначено A Dt , а выбытие во время митоза — Bst . Количество повреждений клеток (инициация) AtP находится в состоянии динамического равновесия с процессом репарации A Rt ; соответствующие прелатентные (обратимо инициированные) клетки NPt в случае дополнительной инициации порождают субпопуляцию клеток латентных (необратимо инициированных) NLt . Соответствующий процесс переходов BPt — закрепление инициации. Воздействие на латентные клетки мутагеном-промотором вызывает поток переходов ATt с формированием субпопуляции трансформированных (неопластических) клеток NTt . В данной модели предполагается, что трансформированные клетки могут осуществлять опухолевый рост ATDt при наличии иммунного контроля с числом элиминированных клеток BTt . Уровни мутагенов и факторов роста определяют интенсивности соответствующих процессов переходов, являясь по существу просто переменными коэффициентами пропорциональности.
105
Â.Н. Анисимов
Âсоответствии с этими обозначениями выполняются следующие балансовые соотношения:
N 1 |
= N 0 |
+ At |
– Bt – Ats |
|
(1) |
|
N 1s = N 0S |
+ AtD |
+ AtS |
+ AtR – BtS |
– AtP |
(2) |
|
N 1P |
= N 0P |
+ AtP |
– AtR – BtP |
|
(3) |
|
N 1L = N 0L + BtP – AtT |
|
(4) |
||||
N 1T = N 0T |
+ AtT |
– BtT + AtTD |
|
(5) |
||
Процессы переходов определяются |
своими |
компенсаторами |
(Бутов |
|||
è äð., 2001). |
|
|
|
выражение a4 N sP ρ ls под интегра- |
||
Здесь, например, в уравнении для AtR |
лом означает, что в момент s за малое время D число клеток, переходящих из состояния NP в состояние NS, пропорционально числу исходных клеток N sP и фактору пролиферации ρ ls с коэффициентом репарации à4, и аналогично во всех остальных уравнениях.
Указанные процессы регулируются онтогенетическими, тканевыми, пролиферативными и синтетическими факторами в соответствии со следующими соотношениями: программный (онтогенетический) уровень развития описывается как dà t = r (1 – à t ) dt с решением à t = 1 – (1 – à 0 ) exp{–rt}, уровень «заполненности» органа определяется соотношением: nt = Nt/N, соответственно, уровень «ущерба» ткани равен Lt = 1 – nt . Функциональная способность органа пропорциональна уровню синтеза белка Qt с учетом онтогенетического уровня à t :Ôt = Gt Qt à t = nt Qt à t .
При нарастании уровня повреждений Àt анаболический потенциал QtM снижается dQtM = – k QtM dAt = – k QtM Dt dt, и при начальном значении Q0M = Q M exp {–k A0 }, равен QtM = Q M exp{–k At }; достижимый по условиям питания уровень синтеза белка определяется следующим соотношени-
åì: dQt = Z (QtM V – Qt ) dt, Q0 > 0, ãäå Vtε [0, 1] — уровень питания (Vt = 1 соответствует норме, но и Vt > 1 допустимо, что соответствует стимуляции
синтеза). Уровень иммунитета Jt снижается по закону dJ t = – J t Dt dt и при начальном значении J 0 = exp{– A0 } равен J t = exp{– A}. Системно обусловленный уровень пролиферации записывается в виде: ρ lt = H t Qt , ãäå Ht — гормонально обусловленный индекс пролиферации.
Внешние воздействия и внутренние повреждающие факторы в уравнениях учитывают условия эксперимента. Мутагены-инициаторы определяются как ϕ t = ϕ b + ϕ ýêñï I (tε K ϕýêñï ), ãäå ϕ b — базовый уровень, ϕ ýêñï — дополнительно привнесенные экспериментом интенсивности мутации во время воздействия K ϕýêñï . Совокупная концентрация мутагенов (промоторов и ини-
106
Часть V. Модифицирующие факторы старения как средства для изучения его механизмов
циаторов) µ t = φ t + ψ t влияет на изменение общесистемных показателей — как уровня иммунитета, так и повреждения типа (II). Уровень свободных радикалов, ответственных прежде всего за повреждения типа (I), определя-
åòñÿ |
êàê Rt = Rb + |
Xt, ãäå Rb соответствует базовому уровню, а |
dX t |
= –λ X t dt + ΘdWt , |
γ > 0 со стохастическим возмущением Wt — ñòàí- |
дартным винеровским процессом. Частота анаболически обусловленных мутаций db предполагается постоянной. Интенсивность общего разруше-
ния записывается как Dt |
= Rt + µ + d t , |
ñ |
пропорциями |
R b = 08. D b , µ b = |
= 0.1 D b d b = 0.1 D b, ãäå |
D b = R b + µ b |
+ d b , µ b = φ b + ψ b . Уровень общего |
||
полного повреждения определяется как At |
= A0 + ∫ Ds ds. |
|
В модели предполагается, что смерть организма происходит по нескольким причинам: по причине истощения функциональной способности ткани с моментом смерти τ φ = inf {t:t > 0, Φ t < ∆ Φ }, по причине истощения иммунитета с ее моментом τ ∫ = inf {t:T > 0, N Tt > N ∆ N }. Давление среды (обусловливающее постоянные компоненты смертности и соответствующие экспоненциальные составляющие в кривой дожития) предполагаются инициированными двумя моментами τ ENV è τ EXP , ãäå τ EXP вызван дополнительным давлением среды эксперимента к независимым от уровней мутагенов событиям внешней среды τ ENV . Эти моменты записываются соотноше-
ниями τ ENV = –T ENV In(ξ 1 ) è τ EXP = –T EXP (a – bφ ýêñï ) × In (ξ 2 ), ãäå ξ 1 è ξ 2 — независимые равномерно распределенные на интервале (0.1) случайные
величины. |
Таким |
образом, смерть организма t определяется как |
τ = τ φ τ ∫ |
τ T τ S |
τ E (символ означает минимальное из значений). |
В ходе имитационного моделирования при больших значениях чисел клеток в субпопуляциях (1)—(5) осуществляется нормирование и соответствующая диффузионная аппроксимация с переходом к уравнениям диффузионного типа [например, уравнения (1) и (5) заменяются соответственно на
Dn1 = Lt {a1 ntm – a2 nt } ρ lt dt – b1 At nt dt + σ 1 n112 dW1 ,
DnT1 = nT1 (a9 – J 1 b4 ) ρ l1 dt + Ω (nTt )12 dWt ,
и аналогично для тех процессов, значения которых велики для имитации в форме точечных процессов].
Выбор коэффициентов и параметров модели определялся значениями соответствующих биологических характеристик и условиями эксперимента (так, например, в отсутствие воздействия мутагеном интенсивности переходов должны обеспечить стабильность объемов клеточных субпопуляций с известными объемами клеток в интерфазе, клеток в фазе митоза и трансформированных, соответственно 1.5 1010, 1.5 106, 10—100).
Моделирование проводилось на основе рекуррентных алгоритмов, построенных по стохастическим уравнениям в терминах семимартингальных характеристик указанных выше процессов и явлений.
107
В. Н. Анисимов
Рис. 13.3. Экспериментальные (À) и модельные (Á) кривые дожития для крыс, подвергшихся четырехкратному воздействию БДУ.
По оси абсцисс — возраст, сут.; по оси ординат — доля выживших.
Результаты моделирования приведены на рис. 13.3.
Соответствие модельных кривых экспериментальным (как для контрольных групп, так и при воздействии БДУ) может служить подтверждением вывода о том, что под воздействием БДУ возникает ускоренное старение в тканях с пролиферирующими клетками (Butov et al., 2002). Полученные данные косвенно свидетельствуют также об уровне влияния повреждений тканей при мутагенезе и оксидативном стрессе как на скорость старения, так и канцерогенеза. Заметим, что этот вывод был подтвержден в наблюдениях in vitro, в которых было показано, что добавление БДУ в культуры клеток человека и животных ускоряет их старение (Michishita et al., 1999). Авторы полагают, что вывод об активации БДУ механизма старения, общего для неиммортализированных и иммортализированных клеток, справедлив. Предложенный принцип построения математических и имитационных
108
Часть V. Модифицирующие факторы старения как средства для изучения его механизмов
моделей процессов старения и канцерогенеза может рассматриваться как первый шаг в попытке описания достаточно сложного и еще не полностью изученного явления.
13.9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Синтетический аналог тимидина 5-бромодезоксиуридин (БДУ), включа- ясь вместо него в ДНК, не «узнается» ферментами репарации, длительно персистирует в различных органах и тканях организма, что приводит к нарушениям комплементарности, точковым мутациям и нестабильности генома в целом. Ряд биологических эффектов БДУ in vitro è in vivo позволил предположить, что этот агент может быть использован для изучения роли избирательных повреждений ДНК в процессах инициации канцерогенеза и старения. Было установлено, что неонатальное введение крысам БДУ сопровождается преждевременным развитием у них и их потомства ряда нарушений в репродуктивной системе, увеличением частоты хромосомных аберраций, более частым и ранним, чем в контроле, развитием новобразований (табл. 13.4). Эти наблюдения, а также анализ кривых выживае-
Ò à á ë è ö à 13.4
Основные биологические свойства 5-бромодезоксиуридина
Наблюдаемые эффекты |
Авторы |
|
|
Включается в реплицирующую ДНК |
Trautner et al., 1962 |
Индуцирует транзиции, главным образом АТ ГЦ |
Kaufman, 1988; Morris, 1991 |
Точковые мутации в ДНК не репарируются |
Lindahl, 1982 |
Изменяет физико-химические свойства ДНК |
Cullen, Bick, 1976; Monier et al., 1977 |
Угнетает синтез ДНК и РНК |
Lykkesfeldt, 1977 |
Индуцирует амплификацию генов |
Biswas et al., 1984 |
Активирует эндогенные вирусы |
Aykawa et al., 1979 |
Изменяет экспрессию протоонкогенов |
Yen, Forbes, 1990 |
Вызывает мутации в 12 кодоне Ki-ras |
Calvert et al., 1996 |
Индуцирует сестринский обмен хроматид и хромо- |
Allen, Latt, 1976; Morris, 1991; Anisi- |
сомные аберрации |
mov, Osipova, 1992 |
Нарушает дифференцировку тканей |
Stockdale et al., 1964 |
Тератогенный эффект |
Fukushima, Barka, 1976; Ruffolo, |
|
Ferm,1985; Anisimov, Osipova, |
|
1993 |
Индуцирует репликативное старение in vitro |
Michishita et al., 1999; Suzuki et al., |
|
2001 |
В комбинации с УФ-облучением вызывает неоплас- |
Barrett et al., 1978; Monier et al., 1977 |
тическую трансформацию in vitro |
|
109
В. Н. Анисимов
|
Ò à á ë è ö à 13.4 (продолжение) |
|
|
Наблюдаемые эффекты |
Авторы |
|
|
При неонатальном введении крысам оказывает сла- |
Napalkov et al., 1989; Anisimov, Osi- |
бый канцерогенный эффект и существенно увели- |
pova, 1992, 1993 |
чивает частоту опухолей у потомства 1-го поколе- |
|
íèÿ |
|
При неонатальном введении крысам увеличивает |
Anisimov, Osipova, 1993; Осипова, |
канцерогенный эффект: |
Анисимов, 1992; Anisimov, 1995; |
общего рентгеновского облучения |
Napalkov et al., 1989 |
N-нитрозометилмочевины |
|
синдрома персистирующего эструса |
|
При неонатальном введении мышам увеличивает |
Anisimov, Osipova, 1992; Анисимов, |
канцерогенный эффект: |
Шейко, 1996; Осипова, Анисимов, |
уретана |
1992 |
12-О-тетрадеканоилфорбол-13-ацетата |
|
эстрадиола-бензоата |
|
Неонатальное введение крысам и мышам сокращает |
Craddock, 1981; Napalkov et al., 1989; |
продолжительность жизни и увеличивает скорость |
Anisimov, Osipova, 1992, 1993 |
старения |
|
Неонатальное введение ускоряет возрастное выклю- |
Anisimov, Osipova, 1992 |
чение репродуктивной функции |
|
Добавление в питательную среду сокращает продол- |
Потапенко и др., 1982 |
жительность жизни D. melanogaster |
|
мости и расчеты параметров скорости старения подопытных и контрольных животных позволяют предполагать, что использованная модель может рассматриваться как модель ускоренного старения, а полученная совокупность фактов может служить серьезным аргументов в пользу мутационной теории старения.
Нестабильность генома, развивающаяся у крыс, подвергшихся неонатальному воздействию БДУ, по-видимому, является тем первичным механизмом, который определяет развитие как процесса ускоренного старени, так и инициацию канцерогенеза и повышение чувствительности организма к действию промоторов опухолевого роста и других канцерогенных агентов, как химических, так и радиационных и вирусных. Таким образом, в опытах in vivo с БДУ впервые были получены убедительные доказательства, что само по себе избирательное повреждение ДНК может вызывать инициацию канцерогенеза. Кроме того, было установлено, что БДУ ускоряет процесс старения организма.
Ë è ò å ð à ò ó ð à
Анисимов В. Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. СПб.: Наука, 2003. 468 с.
Анисимов В. Н. Роль индуцируемой 5-бромодезоксиуридином нестабильности генома в механизмах ускоренного старения и канцерогенеза / Успехи геронтол. 1997. Т. 1. С. 50—56.
110