2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Медицинская_бактериология_Соколова_Т_Н_

Неинвазивные тесты

Существует два типа неинвазивных методов выявления микроорганизма:

1.Серологические методики (обнаружение антител к H. pylori).

2.Дыхательный тест (наиболее распространенный). Дыхательный тест. Наличие H. pylori в желудке определяют

по активности специфичной для данной бактерии уреазы. Пациент перорально принимает раствор, содержащий меченую 13С или 14С мочевину. В присутствии H. pylori фермент расщепляет мочевину, в результате чего выдыхаемый воздух содержит СО2 с меченым изотопом углерода (13С или 14С), уровень которого и определяют методом массспектроскопии или с помощью сцинтилляционного счетчика.

ВИБРИОНЫ. БРУЦЕЛЛЫ. ФРАНЦИСЕЛЛЫ. YERSINIA PESTIS. БАЦИЛЛЫ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ, БРУЦЕЛЛЕЗА, ТУЛЯРЕМИИ, ЧУМЫ, СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ Контрольные вопросы

1.Вибрионы: классификация и роль в патологии человека.

2.Холерный вибрион: морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства, факторы патогенности, резистентность во внешней среде.

3.Холера: эпидемиология, взаимодействие холерного вибриона с организмом человека, микробиологическая диагностика.

4.Бруцеллы: общая характеристика.

5.Бруцеллёз: общая характеристика, взаимодействие бруцелл с организмом человека, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

6.Возбудитель туляремии: общая характеристика.

7.Туляремия: общая характеристика, взаимодействие возбудителя с организмом человека, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

8.Возбудитель чумы: общая характеристика.

9.Чума: взаимодействие возбудителя с организмом человека, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

10.Возбудитель сибирской язвы: общая характеристика.

11.Сибирская язва: взаимодействие возбудителя с организмом человека, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

21

VIBRIO CHOLERAE

Vibrio cholerae – вид бактерий рода Vibrio, семейства Vibrionaceae представители которых вызывают холеру.

Холера вызывает поражение тонкой кишки с нарушением вод- но-солевого обмена, диареей, обезвоживанием, интоксикацией. Это антропоноз (болеют только люди), особо опасная инфекция.

Механизм заражения фекально-оральный, преобладает водный, возможен алиментарный (с пищей) и контактно-бытовой.

Выделяют два биовара:

классический - Vibrio cholerae var.asiatica и

Эль-Тор – V.cholerae var.eltor

Общая характеристика холерного вибриона: грамотрицательная

палочка, очень подвижная (монотрих), изогнутая (похожа на запятую), растёт быстро, на простых питательных средах, особенно при рН среды 8,5-9,0; на щелочной пептонной воде образует нежную плёнку уже через 6-8 часов.

Рис. 11. Электронная микроскопия. Vibrio cholerae

Факторы вирулентности: вырабатывает экзотоксин (холероген), эндотоксин, пили, ферменты вирулентности (фибринолизин, гиалуронидаза).

Биохимические свойства: Вибрион восстанавливает нитраты и образует индол (положительная нитрозоиндоловая проба или реакция холер-рот). Очень быстро (за 6 часов) на пептонной воде утилизирует крахмал, так как обладает высокой амилазной активностью.

Серологические свойства: Имеет О- и Н- антигены. По О- антигену различают более 150 серовариантов. Холеру вызывают О1 и О139, другие серогруппы не вызывают холеру, но могут вызывать острые кишечные инфекции. Серогруппа О1 содержит 3 фракции А, В и С, по ним выделяют серовариант Огава (содержит фракции А и В), Инаба (содержит фракции А и С) и Гикошима (содержит фракции

22

А, В и С). Н-антиген жгутиковый, белковый, термолабильный; общий для всех вибрионов

Резистентность во внешней среде: Малоустойчив во внешней среде, особенно классический биовар, устойчивость биовара эль-тор значительно выше. При кипячении погибает мгновенно. Долго сохраняется в стоячей воде, в выгребных ямах, в продуктах со щелочным рН и высокой влажностью, на одежде и белье, испачканных испражнениями больных. Высокочувствителен к дезинфектантам (особенно к кислым и содержащим хлор).

Патогенез холеры

Человек заражается фекально-оральным путем (чаще водным), вибрион преодолевает кислотный барьер (кислая среда желудка), далее проникает и размножается в тонком кишечнике, где вырабатывает экзотоксин холероген, который вызывает профузный понос (фекалии напоминают рисовый отвар), в результате чего нарушается вод- но-солевой обмен, развивается обезвоживание организма и ацидоз. При разрушении холерного вибриона, выделяется эндотоксин, который нарушает фагоцитоз, снижает кровяное давление, вызывает ин- фекционно-токсические явления.

Лабораторная диагностика холеры проводится только в специальных лабораториях особо опасных инфекций (ООИ).

Материал для исследования: рвотные массы, испражнения, вода. Бактериоскопический метод (ориентировочный) - делают мазок, окрашивают водным фуксином, либо обрабатывают люминесцент-

ным веществом (РИФ).

Бактериологический метод (основной): на 1% щелочной пептонной воде выделяют чистую культуру и далее идентифицируют по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам.

Для экспресс - диагностики используют РИФ, ИФА, ПЦР. Серологическая идентификация холерного вибриона: использу-

ют сыворотки, О-сыворотка, RO-сыворотка, типоспецифическая сыворотка Огава, типоспецифическая сыворотка Инаба и О139сыворотка.

Специфическая профилактика холеры имеет вспомогательное значение. Используют убитую, а также комбинированную вакцины, включающие холероген-анатоксин, О-антиген.

Принципы лечение холеры

Возмещающие жидкости для восстановления водно-солевого баланса в организме, антибиотики (тетрациклин).

23

БРУЦЕЛЛЫ

Бруцеллы - бактерии рода Brucella, включающего виды: Brucella melitensis (человек заражается от коз и овец),

Brucella abortus (от коров), Brucella suis (от свиней).

Вызывают бруцеллез - зоонозное заболевание, характеризующееся лихорадкой, поражением печени, селезенки, при хроническом бруцеллезе – опорно-двигательного аппарата, нервной системы и других систем. Передаётся только от больных животных алиментарным и контактным путем. Больные люди не опасны для других людей.

Рис. 12. Электронная микроскопия. Brucella

Brucella - грамотрицательные коккобактерии. Бруцеллы медленно растут на сложных питательных средах. Brucella abortus для роста нуждаются в повышенной концентрации СО2.

Микробиологическая диагностика бруцеллёза проводится, прежде всего, с использованием серологических методов диагностики: реакции агглютинации на стекле Хаддлсона; объемная реакция агглютинации Райта, РНГА - реакция Кумбса для выявления неполных антител, ИФА и др.

Бактериологический метод проводится только в лаборатории ООИ, используют выделение гемо - и миелокультуры.

Используется кожно-аллергическая проба Бюрне, ПЦР. Специфическая профилактика бруцеллёза проводится по эпиде-

миологическим показаниям живой вакциной.

YERSINIA PESTIS

Yersinia pestis относится к семейству Enterobacteriacea, роду

Yersinia. Вызывает чуму – острую зооантропонозную природноочаговую инфекцию. Чума характеризуется тяжелым течением с

24

сильной интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, легких и других органов, а также высокой летальностью. Относится к особо опасным, карантинным заболеваниям. Источником инфекции являются животные, в основном грызуны. От больного животного к человеку чума передается через укусы блох (переносчики). При легочной форме чумы больной человек становится источником инфекции, возникает опасность эпидемий и пандемий.

Yersinia pestis представляет собой мелкую, овоидной формы грамотрицательную палочку (Рис.13).

Рис. 13. Электронная микроскопия. Yersinia pestis в просвете капилляра

Окрашивается метиленовой синькой более интенсивно по полюсам (метахромазия).

Психрофил (оптимальная температура роста 280С), факультативный анаэроб. Растёт на простых питательных средах. На плотной среде образует характерные R-формы колоний (напоминающие кружевные платочки), на МПБ образует плёнку со спускающимися от неё тяжами, напоминающими по форме сталактиты (рис.14).

Рис. 14. Рост колоний Yersinia pestis

25

Биохимические свойства: биохимическая активность высокая. По способности ферментировать глицерин различают глицеринпозитивную континентальную разновидность (чума природных очагов) и глицериннегативную океаническую разновидность (завозная чума).

Патогенез чумы

От больного животного через укус блохи происходит заражение человека. В месте укуса происходит проникновение возбудителя, затем бактерии проникают в региональные лимфоузлы, вызывая их воспаление, развивается кожно-бубонная форма заболевания (рис.15).

Далее Yersinia pestis проникает в кровь – развивается геморрагическая форма. С кровью возбудитель попадает в лёгкие, где вызывает пневмонию (вторично-легочная форма заболевания). Больной легочной формой выделяет Yersinia pestis при кашле, что дает возможность распространения возбудителя аэрозольным путем. При вдыхании аэрозоля, содержащего возбудитель, происходит передача инфекции от больного человека к здоровому. Микроорганизм попадает в лёгкие, развивается пневмония (первично-легочная форма). Возможны также поражения ЖКТ при кишечной форме чумы.

Рис. 15. Кожно-бубонная форма чумы

Факторы патогенности:

1.F1-Ag (фактор 1): капсульный (гликопротеин), нетоксичен при введении лабораторному животному в чистом виде, иммуноген.

2.Активатор плазминогена: протеаза. Этот фактор:

а) активирует лизис сгустков фибрина,

б) инактивирует фракции комплемента C3b и С5а.

3. V/W-Ag относится к группе Vi-антигенов и состоит из белковой (V) и липопротеиновой (W) фракций, обладает антифагоцитарным действием и способствует внутриклеточному размножению бактерий.

26

4. Мышиный токсин: белковый токсин.

Микробиологическая диагностика чумы: материалом для исследования является кровь, пунктат бубона (увеличенный лимфатический узел), мокрота. Экспресс-диагностика направлена на обнаружение Ag с помощью РИФ. Используют ИФА, а также ПЦР.

Бактериологический метод проводится только в лаборатории особо опасных инфекций. Чистую культуру получают, засевая исследуемый материал на селективные питательные среды с сульфитом Na и генциановым фиолетовым. Проводят идентификацию: по морфологическим, серологическим свойствам, используют видовой фаг. Проводят биопробу (заражают морскую свинку).

Специфическая профилактика чумы: используют живую вакци-

ну EV.

FRANCISELLA TULARENSIS

Francisella tularensis - бактерии вызывающие туляремию – при- родно-очаговое зоонозное заболевание, передающееся контактным, алиментарным, воздушно-пылевым путями. Резервуаром и источником инфекции являются грызуны (водяные крысы полевые мыши, ондатры, зайцы). От человека заболевание не передается.

Francisella tularensis - мелкая грамотрицательная коккобактерия. Облигатный аэроб. Растёт на сложных плотных питательных средах, а также в желточном мешке куриного эмбриона.

Патогенез туляремии

Заболевание характеризуется длительным (около месяца) течением и разнообразной клинической картиной. Выделяют несколько клинических форм. В месте внедрения Francisella tularensis возникает воспалительный очаг, из него происходит лимфогенное распространение микроорганизма в регионарные лимфатические узлы и образование первичного бубона, оттуда микроб проникает в кровь и далее происходит гематогенная диссеминация Francisella tularensis по различным органам с образованием гранулем и поражением лимфатических узлов (вторичные бубоны).

Микробиологическая диагностика туляремии включает серологические методы диагностики (РА, РНГА, РСК, ИФА) для выявления специфических иммуноглобулинов в сыворотке больного.

Биологический метод проводят с использованием морской свинки. Патологический материал (в зависимости от клинической формы) вводят животному, затем его органы используют для получения чис-

27

той культуры на питательных средах.

Идентификация Ag с помощью РА и РИФ. Проводят кожноаллергическую пробу с тулярином, сенсибилизация наблюдается уже с 5-го дня болезни.

Специфическую профилактику туляремии проводят живой вакциной Гайского-Эльберта.

BACILLUS ANTHRACIS

Bacillus anthracis вызывает сибирскую язву. Это острая зоонозная инфекция. Характеризуется тяжелым течением с сильной интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, легких и других органов, высокой летальностью. Человек от животных заражается контактным, алиментарным, воздушно-пылевым путем.

Источник инфекции - крупный рогатый скот (коровы и др.), лошади, свиньи, верблюды и др. Споры Bacillus anthracis годами могут находиться в земле и быть источником инфекции.

Bacillus anthracis - это грамположительная большая палочка, образует цепочки (стрептобацилла), имеет полипептидную капсулу. В неблагоприятных условиях образует эндоспору, и в таком состоянии может сохраняться десятки лет. Растёт на простых питательных средах, образует R-формы колоний («львиная грива»), выделяет экзотоксин, обусловливающий патогенез заболевания.

Патогенез сибирской язвы

От животного, преимущественно контактным путем, Bacillus anthracis попадает на кожу, в месте внедрения микроорганизма образуется сибиреязвенный карбункул и развивается кожная форма заболевания (рис.16).

Рис. 16. Сибиреязвенный карбункул

При алиментарном пути инфицирования (встречается реже) с пищей (молоко, мясо) Bacillus anthracis попадает на слизистую ЖКТ (развивается кишечная форма). При респираторной форме заражения

28

(встречается редко) бацилла проникает в слизистую респираторного тракта и развивается легочная форма заболевания. При проникновении возбудителя в кровь развивается септическая форма. Для сибирской язвы характерна чрезвычайно высокая смертность, обусловленная развитием отека легких и сердечно-сосудистой недостаточности.

Микробиологическая диагностика сибирской язвы

Исследуемый материал: отделяемое карбункула, мокрота. Бактериоскопический метод – мазок из патологического мате-

риала окрашивают по Граму, Цилю-Нильсену, метиленовым синим. Для выявления антигенов возбудителя используют РП Асколи и

РИФ.

Бактериологический метод - получение чистой культуры на МПА, идентификация по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам. Проводятся фаготипирование и биопроба на мышах или морской свинке. Для выявления сенсибилизации используют кожно-аллергическую пробу с антраксином.

Специфическую профилактику сибирской язвы осуществляют живой вакциной СТИ (аббревиатура от учреждения – разработчика вакцины, санитарно-технический институт) и сибиреязвенным гаммаглобулином – экстренная профилактика.

МИКОБАКТЕРИИ. АКТИНОМИЦЕТЫ. ЛИСТЕРИИ.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА, ПРОКАЗЫ, АКТИНОМИКОЗА, ЛИСТЕРИОЗА Контрольные вопросы

1.Актиномицеты: систематическое положение и общая характеристика патогенных актиномицетов.

2.Актиномикоз: этиология, взаимодействие возбудителя с организмом человека, клинические проявления, микробиологическая диагностика, этиотропная терапия.

3.Общая характеристика микобактерий: отличия от других прокариот, кислотоустойчивость.

4.Возбудители туберкулёза: классификация, морфологические и культуральные свойства, факторы вирулентности, корд-фактор, устойчивость во внешней среде.

5.Туберкулёз: эпидемиология, клинические проявления, взаимодействие возбудителя с организмом человека, инфекционная гранулема (место и причина образования), иммунитет, инфекционная аллергия, профилактика, этиотропная терапия.

29

6.Микробиологическая диагностика туберкулёза: общая схема.

7.Листерии: классификация, морфологические и культуральные свойства, резистентность во внешней среде.

8.Листериоз: эпидемиология, клинические проявления, взаимодействие возбудителя с организмом человека, микробиологическая диагностика (общая схема).

Микобактерии, род Mycobacterium, это грамположительные палочки. Род Mycobacterium состоит из 74 видов. Микобактерии вызывают туберкулез, лепру, микобактериозы. Это длинные и тонкие палочки, напоминающие швейные иголки, устойчивые к спирту, кислоте и щелочам. Такая устойчивость не позволяет окрасить микроорганизмы по Граму или простыми методами окрашивания, их окрашивают по Цилю-Нильсену – окрашиваются в красный цвет. Растут долго (до 3-х месяцев), на сложных средах (Левенштейна-Иенсена), образуют R-колонии, напоминающие цветную капусту или бородавки, пигментированные (жёлтые). Спирто -, кислото - и щелочеустойчивость связаны с высоким содержанием липидов и восков в клеточной стенке бактерий.

Основные факторы вирулентности – гликолипид корд-фактор, липиды, белки.

Рис. 17. Мазок. Mycobacterium tuberculosis

Возбудители туберкулёза:

Mycobacterium tuberculosis (вызывает 92% всех случаев ту-

беркулеза человека).

Mycobacterium bovis (5%).

Mycobacterium africanum (3%).

30