2 курс / Нормальная физиология / Методические_рекомендации_по_курсу_экспериментальной_физиологии
.pdfРАБОТА 2. Одновременная регистрация пневмограммы и электрокардиограммы у крыс
Цель работы
Освоить методику синхронной записи пневмограммы и электрокардиограммы (ЭКГ) у лабораторных животных.
Методика работы
Повторите п. п. 1-5 из предыдущей работы. Фиксируйте крысу к столику
Введите игольчатые электроды под кожу передних и правой задней лапы. Подключите дыхательную манжетку и сердечные электроды в любые гнезда
коммутатора элекгроэнцефалографа.
С помощью наружной и внутренней ручек селектора (первый ряд переключателей справа на верхней панели прибора) первого канала наберите соответствующие коммутатору номера для пневмографии.
Теми же ручками 2 канала наберите соответствующие номера коммутатора. Помните, что длинный провод гарнитуры Вы подключаете к гнезду "Земля" на коммутаторе.
Повторите п. п. 7-12 из предыдущей работы.
Получите такую длину записи, чтобы каждому участнику эксперимента достался участок записи с 3-5 сердечными сокращениями.
Повторите пункт 13 предыдущей работы.
Сравните количественно и качественно запись ЭКГ у крысы с ЭКГ человека. Зарисуйте в протокол функциональную схему установки.
Сделайте вывод.
РАБОТА 3. Термометрия методом термопары
Цель работы
Знакомство с методикой измерения температуры тела у лабораторных животных при помощи термопары.
Методика работы
Примечание: Для выполнения работы используются медноконстантановые термопары, которые представляют собой проволоку (медь-константан-медь), соединения которой осуществляются сваркой, при этом образуются два медноконстонтановых спая. Помещение этих спаев в среду с различной температурой при замыкании цепи приводит к возникновению в ней разницы потенциалов. На каждый градус разницы температур спаев возникает напряжение в 40 мВ. Таким образом при фиксированной температуре одного из спаев термопары (температура холодового спая Тхс) и измерении напряжения в сети (тЭДС) можно рассчитать температуру среды в которой находится второй спай.
Повторите п.п. 1-4 работы № 1.
Введите термопару животному in rectum на глубину 5 см. Запишите показания вольтметра (тЭДС, мкВ), термометра (Тхс, °С).
Рассчитайте температуру тела животного по формуле: Ттела=Тхс+тЭДС/40. Зарисуйте в протоколе функциональную схему установки.
Сделайте вывод.
ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ № 7
ОСНОВЫ СТЕРЕОТАКСИЧЕСКОЙ ТЕХНИКИ. Стериотаксис: устройство и правила работы. Стериотаксическии атлас головного мозга
РАБОТА 1. Устройство стереотаксического аппарата
Цель работы
Познакомиться с устройством стереотаксиса и освоить основные принципы работы с ним.
Методика работы
Осмотрите стереотаксис и найдите головодержатель (рис. 13,14). Найдите ушные держатели и с помощью винтов попробуйте изменить
расстояние между их кончиками (рис.14 (4,5)).
Рассмотрите зубные держатели и освойте механизм изменения их наклона, а, следовательно, и наклона головы животного (рис.14 (3,2)).
Найдите носовые держатели, с помощью винтов попробуйте их закрепить (рис.14 (1)).
Используя схему (рис.13), найдите на приборе стереотаксическую головку (препаратоводитель).
Найдите устройство для перемещения каретки в продольном, рострокаудальном направлении (используется для установки координаты АР). Рассмотрите и определите величину деления на линейке штатива (рис.13 (2)).
Найдите измерительные линейки для поперечного перемещения стереотаксической головки, во фронтальной плоскости (координата L). Обратите внимание на деления, расположенные на основании микрометрического винта, определите величину (в мм) его одного оборота (рис.13 (5)).
На оси крепления электродов рассмотрите и определите величину одного оборота микрометрического винта и механизм погружения в мозг на определенную величину (координата Н) - вертикальное перемещение (рис.13 (3)).
Вверхней трети, на задней поверхности головки стереотаксиса найдите дисковидное устройство, обеспечивающее угловое перемещение каретки в поперечной плоскости, позволяющее изменять угол погружения электродов и канюль в мозг. На боковой поверхности найдите аналогичное устройство для углового перемещения каретки в продольной плоскости (рис.13 (7)).
Внижней части стереотаксической головки (препаратоводителя) найдите фиксатор для электродов и канюль. Опробуйте механизм их закрепления с помощью расположенных там винтов (рис.13 (6)).
Найдите и установите манипуляционный столик для фиксации тела животного.
Рис. 13 Стсреотаксис (общий вид).
1– стойка; 2 – устройство для продольного перемещения каретки; 3– микрометрический винт вертикального перемещения стереотаксической головки,
4–-головка стсреотаксическая: 5 – микрометрический винт горизонтального перемещения стереотаксической головки; 6– фиксатор электродов и канюль; 7–- устройство углового перемещения каретки; 8 – станина; 9 – головодержатель; 10 – стойка головодержателя.
Рис. 14. Головодержатель стереотаксиса.
1–- носовой зажим; 2 – рукоятка штанги для регуляции наклона зубного держателя; 3 – зубной держатель; 4 – ушные держатели; 5–- винт перемещения ушных держателей; 6–-стойка головодержателя; 7–- препаратоводитель.
РАБОТА 2. Определение координат структур головного мозга по стереотаксическому атласу
Цель работы
Освоить методику определения координат заданных структур мозга по стереотаксическому атласу
Методика работы
Получите от преподавателя задание - какую структуру Вы будите исследовать. Откройте стереотаксический атлас и ознакомьтесь с используемыми в нем
сокращениями.
Среди многочисленных фронтальных срезов стереотаксического атласа выберите срез мозга, где наиболее ярко представлено исследуемое нервное образование (наибольший диаметр образования). Записать соответствующую фронтальную координату (АР) - она указана на соответствующей фотографии среза мозга (рис. 12).
Пользуясь горизонтальной шкалой атласа и линейкой определите сагиттальную координату (L) центральной точки нервного образования.
Пользуясь вертикальной шкалой атласа определите горизонтальную координату (Н) образования.
Запишите формулу стереотаксических координат АРXLYНZ выбранной структуры мозга.
РАБОТА 3. Фиксация животного в стереотаксическом аппарате
Цель работы
Освоить правила фиксирования животного в стереотаксисе.
Методика работы
Определите массу животного.
Рассчитайте и введите раствор наркозного вещества.
Закрепите голову наркотизированного животного в стереотаксисе. Придерживая голову животного с нижней поверхности левой рукой, правой
осторожно вставьте в наружные слуховые проходы ушные держатели так, чтобы положение головы было строго симметричным.
Проверьте правильность закрепления головы крысы в стереотаксисе: сжав пальцами правой руки затылочную область головы крысы, убедитесь в отсутствии подвижности вдоль оси ушных держателей.
Закрепите медиальные резцы верхней челюсти в зубном держателе. Опустите зажим носового держателя на переносицу животного, так чтобы
резцы неподвижно зафиксировались в пластине зубного держателя. Зафиксируйте положение носового держателя с помощью винта.
Расположите тело животного на манипуляционном столике стереотаксиса.
Рис. 12. Фронтальные срезы мозга крысы:
(n. – nucleus)
AAA – area amygdalaris anterior
AB – n. basalis amygdalae
AC – n. centralis amygdalae
AD – n. antero-dorsalis
AL – n. lateralis amygdalae
AM – n. anteromedialis thalami
AV – n. antero-ventralis
ACO – n. corticalis amygdalae
AHA – area hypothalamica anterior AHL – area hypothalamica lateralis AME – n. medialis amygdalae APL – area praeoptica lateralis APM – area praeoptica medialis ARC – n. arcuatus
CA – comissura anterior
CD – n. caudatus
CF – comissura fornicis
CI – capsula interna
CL – claustrum
CDP – caudate-putamen complex CPYR – cortex pyriformis
CH – chiasma opticum
DS – decussatio supramammilaris FF – fimbria fornicis
GL – corpus geniculatum laterale GP – globus pallidus
GLV – GL-pars ventralis
HL – n. habenulae lateralis
HM – n. habenulae medialis
HDM – n. dorsomedialis hypothalami HIP – hippocampus
HVM – n. ventromedialis hypothalami IV – n. interventralis
LA – n. lateralis anterior
MD – n. mediodorsalis
ML – n. mammilaris lateralis
NCM – n. centralis medialis
NHP – n. hypothalami posterior
NPC – n. paracentralis
NSL – n. septalis lateralis
NSM – n. septalis medialis
T. OLF. LAT – n. tractus olfactoril lateralis PF – n. parafascicularis
PC – pedunculus cerebri
PV – n. paraventricularis
PVA – n. paraventricularis anterior PVP – n. paraventricularis posterior R – n. reticularis
RE – n. reunions
S – stria medullaris
SO – n. supraopticus
ST – stria terminalis
SCH – n. suprachiasmaticus
SPM – n. supramammilaris
STH – n. subthalamicus
TMT – tractus mammilo-thalamicus TO – tractus opticus
T. OLF. LAT. – tractus olfactorius lateralis V – ventriculus lateralis
VE – n. ventralis thalami
VM – n. ventralis medialis
VDM — n. ventralis pars dorsomedialis
ZI – zona incerta
ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ № 8
СТЕРЕОТАКСИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА
РАБОТА 1. Вживление электродов и канюль в структуры головного мозга
Цель работы
Освоить методику вживление электродов и канюль в глубокие структуры головного мозга.
Методика работы
Зафиксируйте животное в стереотаксисе как описано в работе № 3 занятия №7.
У зафиксированного в стереотаксисе животного, в области предполагаемого разреза кожи на голове, удалить шерсть с помощью ножниц и скальпелем сделать продольный разрез кожи длиной 2-2,5 см по средней линии головы в ростро-каудалыюм направлении.
С помощью хирургических пинцетов или зажимов раздвинуть кожные лоскуты и освободить скальпелем кость от надкостницы и протереть её тампоном, смоченным перекисью водорода для остановки возможного кровотечения. Кости черепа протереть спиртом или эфиром для подсушивания. При этом четко
проступают швы, необходимые для определения координат, по которым будет введен электрод или канюля.
Найдите ориентировочные точки: брегму (пересечение сагиттального и коронарного швов) и ламбду (пересечение сагиттального и затылочного швов) ( см. рис. 15)
Рис. 15. Вид костей черепа крысы. Дорсальная поверхность.
Вг - брегма: АРО - нулевая отметка фронтальной поверхности
Вставьте в держатель стереотаксиса иглу с затупленным концом и перемещая её, установите так, чтобы её конец касался ламбды. Определите по шкале препаратоводителя координаты лямбды. Отведите конец иглы в точку брегма и наклоните голову животного так, чтобы она оказалась на 1 мм выше ламбды. По шкале препаратоводителя определите нулевые координаты брегмы (рис. 16).
Рис.16. Кости черепа крысы. Латеральная поверхность.
Вг — брегма; L — ламбда; НО - нулевой горизонтальный уровень; АРО - нулевой уровень фронтальной поверхности мозга.
К нулевым отсчетам (см. п.5), прибавьте значения координат, полученных по стереотаксическому атласу для исследуемой структуры мозга (занятие №7, работа 1).
Найденную точку на черепе, промаркируйте и сделайте бормашиной трепанационное отверстие. Сверлите отверстие осторожно, чтобы не "провалиться" и не повредить ткань мозга. Помните, что длительное сверление сопровождается нагревание кости, что нежелательно. Перед введением электрода кость ещё раз подсушите эфиром или перекисью водорода.
Электрод (канюлю) закрепите в препаратоводителе стереотаксиса, подведите его к трепанационному отверстию и введите на требуемую глубину (координата Н).
Взять инградиенты фосфатцемента (порошок и жидкость) и смешать их в пропорции 7:1 до получения консистенции густой сметаны.
С помощью шпателя нанести полученную смесь на высушенные кости черепа «заливая» вживленный электрод (канюлю).
Через 5-10 минут, после того, как пломба застынет, препаратоводитель стереотаксиса отвести в сторону, закрыть отверстие канюли (если она пластиковая - запаивают её паяльником, или закрывают парафином, или клейкой лентой) и извлечь крысу из стереотаксиса.
РАБОТА 2. Микроинъекции в структуры головного мозга Цель работы
Освоить методику микроинъекций в боковые желудочки мозга.
Методика работы
Взять крысу и зафиксировать её в иммобилизационный станок, как указано в работе № занятия №
Открыть отверстие канюли для инъекции (удалив клейкую ленту или парафин с отверстия, или обрезать верхнюю часть канюли).
Иглу переходника микродозатора ввести в отверстие канюли и осуществите введение раствора: медленно в течение 1 минуты не более 10 мкл.
Извлеките иглу из канюли и закройте её отверстие.
РАБОТА 3. Контроль точности вживления канюль в структуры головного мозга с помощью маркировочной жидкости
Цель работы
Морфологический контроль точности вживления канюль в желудочки мозга с помощью маркировочной жидкости.
Методика работы
Введите животному через имеющиеся канюли небольшое количество черной туши, как указано в предыдущей работе.
Произведите эвтаназию экспериментального животного путем декапитации.
В затылочной области черепа, освободив предварительно кости от покровных и мышечных тканей, осторожно разломите с помощью пинцета или зажимов черепные кости.
Осторожно извлеките головной мозг животного, отсекая от его основания сосуды, нервы и оболочки.
Поместите мозг в чашку Петри с водой.
С помощью бритвенного лезвия произведите разрез мозговой ткани в области вживленной канюли. В случае правильного введения канюли Вы увидите индикаторное вещество в обоих боковых желудочках мозга.
ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ №9
МЕТОДЫ НЕВРОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ОТДЕЛОВ ЦНС
РАБОТА 1. Оценка функции спинного мозга
Цель работы
Освоить неврологические тесты, характеризующие рефлекторную деятельность спинного мозга.
Методика работы
Рефлекс сгибания лапы.
Бережно поднимите крысу за кожу спины. Возьмите пинцет и ущемите пальцы задней лапы. Отметьте реакцию животного.
Уколите ступню иглой и отметьте реакцию.
Нагрейте металлический прут в водяной бане при температуре +60 °С. Прикоснитесь им к подушечкам пальцев задней лапы крысы. Отметьте реакцию.
Запишите данные в протокол опытов и сделайте вывод.
Примечание. У здорового животного при действии этих раздражителей наблюдается сгибание лапы и, некоторое время, сохранение сгибания