3 курс / Фармакология / Диссертация_Потапова_А_А_Нефро_и_гепатозащитное_действие_сухого
.pdf51
Таблица 3.1.3
Обработка данных по определению LD50 2-ГП-β-ЦД
|
|
|
|
Исследуемые дозы, мг/кг |
|
|
||||
|
50 |
100 |
300 |
|
500 |
|
700 |
2000 |
3000 |
4000 |
К-во животных |
6 |
6 |
6 |
|
6 |
|
6 |
6 |
6 |
6 |
Выжило |
6 |
6 |
6 |
|
6 |
|
5 |
3 |
3 |
0 |
Погибло |
0 |
0 |
0 |
|
0 |
|
1 |
3 |
5 |
6 |
LD50 с доверительным |
|
|
|
|
|
1995±364,1 |
|
|
|
|
интервалом |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
LD10 |
|
|
|
|
|
594 |
|
|
|
|
LD16 |
|
|
|
|
|
902 |
|
|
|
|
LD84 |
|
|
|
|
|
3087 |
|
|
|
|
Уровень значимости |
|
|
|
|
|
0,05 |
|
|
|
Рисунок 3.1.3 - График зависимости эффекта (% гибели) от дозы 2-ГП-β-ЦД
3.2 Определение оптимальной терапевтической дозы СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД на модели поражения печени тетрахлорметаном
Как видно из данных, представленных в таблице 3.2.1, после введения CCl4 развивалось токсическое поражение печени с синдромами холестаза (увеличение содержания ОБ на 326% и
активности ЩФ на 287%) и цитолиза (увеличение активности АлАт на 625%), а также наблю-
далось развитие жирового гепатоза с увеличением содержания ТРГ в печени крыс на 866% по сравнению с данными интактных животных (таблица 3.2.1).
При лечебно-профилактическом введении per os СЭ ШБ в дозе 50 мг/кг эти показатели
(ОБ, АлАт, ЩФ и ТРГ) также были достоверно выше нормы на 340%, 656%, 254% и 802% со-
ответственно (таблица 3.2.1). При повышении дозы СЭШБ до 100 мг/кг такие показатели, как содержание ОБ и активность АлАт в сыворотке крови также оставались достоверно более вы-
сокими, чем в норме на 192% и 575% соответственно. Активность ЩФ, содержание ТРГ досто-
верно снижались по сравнению с контролем на 57% и 66% соответственно, и были
52
Таблица 3.2.1
Влияние лечебно-профилактического перорального введения СЭ ШБ в различных дозах на био-
химические маркеры при CCl4-поражении печени у крыс
|
|
Экспериментальные группы |
|
|
|||
|
Интакт- |
Контроль, |
CCl4+СЭ |
CCl4+СЭ |
|
CCl4+СЭ |
CCl4+СЭ |
Показатель |
ные, |
(CCl4+ Н2О, |
ШБ, 50 |
ШБ, |
|
ШБ, |
ШБ, 500 |
|
n =8 |
перорально), |
мг/кг |
100 мг/кг |
|
300 мг/кг |
мг/кг |
|
|
n =6 |
n =3 |
n =4 |
|
n =7 |
n =7 |
ОБ |
12,8±1,79 |
54,6±4,51 |
56,4±9,50 |
37,4±4,72 |
|
28,3±3,55 |
33,5±3,43 |
сыворотки |
|
+326% |
+340% |
+192% |
|
-48%* |
-39%* |
крови, |
|
|
|
|
|
+120% |
+161% |
мкмоль/л |
|
|
|
|
|
-50%" |
-41%" |
АлАт, |
0,2 ±0,01 |
1,2 ±0,09 |
1,2 ±0,05 |
1,1 ±0,19 |
|
0,7 ±0,09 |
0,8 ±0,08 |
сыворотки |
|
+625% |
+656% |
+575% |
|
-42%* |
-33%* |
крови, |
|
|
|
|
|
+319% |
+388% |
мкмоль/с*л |
|
|
|
|
|
-42%" |
|
ЩФ, |
608±29,9 |
2353±238,5 |
2153±168,7 |
1017 ±62,8 |
|
734 ±44,7 |
715±35,3 |
сыворотки |
|
+287% |
+254% |
-57%* |
|
-69%* |
-71%* |
крови, |
|
|
|
-53%" |
|
-66%" |
-67%" |
нмоль/с*л |
|
|
|
|
|
|
|
|
4,0 ±0,60 |
38,6 ±4,87 |
35,9 ±5,34 |
13,0 ±2,76 |
|
17,8 ±0,46 |
18,0 ±1,97 |
ТРГ печени |
|
+866% |
+802% |
-66%* |
|
-54%* |
-53%* |
мкмоль/г |
|
|
|
-64%" |
|
+348% |
+352% |
|
|
|
|
|
|
-50%" |
-50%" |
Примечания: данные статистически значимы по отношению к *-контролю (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони);
–интактным (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони); " - СЭШБ 50мг/кг(р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом
Бонферрони)
достоверно более низкими, чем в дозе 50 мг/кг на 53% и 64% соответственно, что говорит о по-
вышении эффективности действия СЭ ШБ в дозе 100 мг/кг по сравнению с дозой 50 мг/кг.
При применении СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг наблюдалось достоверное по сравнению с па-
тологическим контролем снижение всех изученных биохимических маркеров, а именно ОБ – на
48%, АлАт – 42%, ЩФ – на 69%, ТРГ – на 54%, при этом все эти показатели, за исключением ЩФ, оставались достоверно более высокими, чем у интактных животных на 120%, 319% и 348% соответственно. При введении СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг все перечисленные маркеры бы-
ли достоверно ниже, чем это регистрировалось в дозе 50 мг/кг на 50%, 42%, 66% и 50% соот-
ветственно, но существенно не отличались от дозы 100 мг/кг.
Как видно из таблицы 3.2.1, дальнейшее повышение дозы СЭ ШБ до 500 мг/кг, не приве-
ло к существенным изменениям в степени нормализации изученных биохимических показате-
лей по сравнению с животными, которым вводили СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг.
53
По значению коэффициента гепатопротекции с учетом восстановления всех биохимиче-
ских показателей также видно, что наиболее высокий коэффициент (66%) отмечался у группы животных, получавших СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг, хотя он достоверно не отличался от значений этого коэффициента для доз 100 и 500 мг/кг, которые составляли соответственно 50% и 59%.
Наименьший же коэффициент гепатопротекции наблюдался при применении СЭ ШБ в дозе 50
мг/кг (3%), что достоверно отличалось от остальных изученных доз (рисунок 3.2.1).
80% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
66±9% |
* |
|
||||||||
70% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
* |
|
|
|
|
|
59±11% |
|
|||||||||
60% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
50±16% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
50% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
30% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
20% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3±0,5% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
10% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
50 мг/кг |
|
100 мг/кг |
|
300 мг/кг |
|
500 мг/кг |
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
* - данные статистически значимы по отношению к дозе 50 мг/кг (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони).
Рисунок 3.2.1 - Значения коэффициента гепатопротекции при пероральном введении различных доз сухого экстракта шлемника байкальского
Учитывая результаты выживаемости животных (таблица 3.2.2), можно сказать, что эф-
фективность защитного действия СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг все же выше, чем в дозе 100 мг/кг,
поскольку выживаемость животных данной группы выше, чем в группах, получавших СЭ ШБ не только в дозе 50 мг/кг, но и в дозе 100 мг/кг. При дальнейшем увеличении дозы до 500 мг/кг данный показатель не изменялся.
Таким образом, по совокупности данных восстановления биохимических маркеров по-
ражения печени, коэффициенту гепатопротекции и проценту выживших животных можно сде-
лать вывод о том, что оптимальной терапевтической дозой СЭ ШБ, как гепатопротектора, при его пероральном введении является доза 300 мг/кг.
Из представленных в таблице 3.2.3 результатов по изучению гепатозащитного дей-
ствия СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозах 5, 15 и 25 мг/кг видно, что у животных, которым вводили СЭ- 2-ГП-β-ЦД в дозе 5 мг/кг, содержание ОБ и активность АлАт в сыворотке крови были так же достоверно выше нормы, как и у животных патологического контроля, на 186% и 439% соот-
54
ветственно. При этом активность ЩФ и содержание ТРГ достоверно снижались на 39% и 34%
соответственно, но превышали значения интактных крыс на 109% и 319%.
Таблица 3.2.2
Выживаемость животных при пероральном введении различных доз СЭ ШБ на модели поражения печени тетрахлорметаном
|
|
|
|
|
|
|
|
Дни опыта |
|
|
|
|
|
Общее |
|
% вы- |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
количе- |
Коли- |
|
Группы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Совместное |
|
жив- |
||||||
Предварительное |
|
|
|
|
ство жи- |
чество |
|||||||||||||||
живот- |
|
|
|
введение су- |
За- |
ших |
|||||||||||||||
|
введение сухого |
|
|
|
вотных, |
погибших |
|||||||||||||||
ных |
|
|
|
|
хого экс- |
|
бой |
живот- |
|||||||||||||
|
|
экстракта |
|
|
|
|
|
|
взятых в |
животных |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
тракта и СС14 |
|
ных |
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
опыт |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кон- |
р |
р |
|
р |
р |
р |
|
р |
|
р |
р |
|
р |
р |
р |
|
р |
|
|
|
|
троль, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
2 |
* |
|
|
* |
|
8 |
2 |
75 |
(CCl4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
+Н2О) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4 + |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
СЭ ШБ, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
2 |
* |
2 |
* |
1 |
8 |
5 |
38 |
||
50 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4 + |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
СЭШБ, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
2 |
* |
2 |
|
* |
|
8 |
4 |
50 |
100 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4 + |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
СЭШБ, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
1 |
* |
|
|
* |
|
8 |
1 |
88 |
300 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4 + |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
СЭШБ, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
1 |
* |
|
|
* |
|
8 |
1 |
88 |
500 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Примечания: р- перороальное введение растворителя (вода очищенная); * введение CCl4; + введение СЭ ШБ; цифрами указано количество погибших животных в определенные дни опыта
При повышении дозы СЭ-2-ГП-β-ЦД до 15 мг/кг такие показатели, как активность ЩФ и содержание ТРГ уменьшились по сравнению с контролем еще в большей степени, чем при его введении в дозе 5 мг/кг (на 46% и 54% соответственно), а также достоверно снизились и такие показатели, как содержание ОБ и активность АлАт (на 49% и 27% соответственно), причем со-
держание ОБ и активность ЩФ достоверно не отличалось от нормы, хотя достоверных отли-
чий по всем показателям между группами, получавшими СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозах 5 и 15 мг/кг не выявлено (таблица 3.2.3).
При дальнейшем повышении дозы СЭ-2-ГП-β-ЦД до 25 мг/кг не наблюдалось усиления гепатозащитного эффекта по изученным показателям, поскольку степень их нормализации у животных, которым его вводили в данной дозе, существенно не отличалась от таковой у живот-
ных, получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе 15 мг/кг. Хотя нужно сказать, что при этом активность ЩФ оказалась достоверно выше нормы на 110%, что не отмечалось у крыс, которым вводили СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе 15 мг/кг.
55
Таблица 3.2.3
Влияние лечебно-профилактического внутрибрюшинного введения различных доз СЭ- 2-ГП-β- ЦД на биохимические маркеры при CCl4-поражении печени у крыс
|
|
Экспериментальные группы |
|
|
|||
|
Интакт- |
Контроль1, |
CCl4+СЭ- |
CCl4+СЭ- |
|
CCl4+СЭ- |
Контроль2, |
|
ные, |
(CCl4+ Н2О |
2-ГП-β- |
2-ГП-β- |
|
2-ГП-β- |
CCl4+2- |
Показатель |
n =6 |
внутри- |
ЦД, 5 |
ЦД, 15 |
|
ЦД, 25 |
ГП-β-ЦД, |
|
брюшинно), |
мг/кг, |
мг/кг, |
|
мг/кг, |
внутри- |
|
|
|
|
|||||
|
|
n =4 |
n=5 |
n=5 |
|
n=4 |
брюшин- |
|
|
|
|
|
|
|
но, 25 |
|
|
|
|
|
|
|
мг/кг, n=3 |
ОБ |
13,4±1,31 |
50,4 ±6,31 |
38,5 ±3,88 |
25,6 ±1,67 |
|
27,0±4,84 |
42,5 ±4,80 |
сыворотки |
|
+275% |
+186% |
-49%* |
|
- 46%* |
+217% |
крови, |
|
|
|
|
|
|
|
мкмоль/л |
|
|
|
|
|
|
|
АлАт, |
0,18±0,031 |
1,23 ±0,062 |
0,97 ±0,028 |
0,91 ±0,057 |
|
0,93±0,089 |
1,20 ±0,109 |
сыворотки |
|
+589% |
+439% |
-27%* |
|
-27%* |
+567% |
крови, |
|
|
|
+406% |
|
+400% |
|
мкмоль/с*л |
|
|
|
|
|
|
|
ЩФ, сыво- |
856±84,4 |
2940±135,4 |
1790±183,2 |
1590±222,2 |
|
1788±205,6 |
3429±370,1 |
ротки кро- |
|
+243% |
-39%* |
-46%* |
|
-39%* |
+301% |
ви, |
|
|
+109% |
-54%# |
|
+110% |
|
нмоль/с*л |
|
|
-48%# |
|
|
-48%# |
|
|
6,4±0,58 |
40,4±3,84 |
26,8±2,27 |
18,5±2,66 |
|
21,7±2,59 |
37,8±4,44 |
ТРГ печени |
|
+531% |
-34%* |
-54%* |
|
-46%* |
+491% |
мкмоль/г |
|
|
+319% |
+189% |
|
+241% |
|
|
|
|
|
-51%# |
|
-43%# |
|
Примечания: данные статистически значимы по отношению к *-контролю 1(р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони);
–интактным (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони);
#- контролю 2 - CCl4+2-ГП-β-ЦД (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони)
Как видно из рисунка 3.2.2, наиболее высокий коэффициент гепатопротекции отмечался у животных, получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД также в дозе 15 мг/кг (57%), чем в дозах 5 мг/кг
(38%) и 25 мг/кг (50%), но достоверной разницы при этом не установлено. Наибольший про-
цент выживаемости (100%) наблюдался в группе животных, получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе
15 мг/кг (таблица 3.2.4). У животных, которым его вводили в дозе 5 мг/кг, этот процент был ниже и составлял 83%. При увеличении дозы до 25 мг/кг выживаемость животных составила только 67%, как это наблюдалось и в контрольной группе 1. Нужно отметить, что введение только 2-ГП-β-ЦД в дозе 25 мг/кг на фоне поражения печени тетрахлорметаном (контроль 2)
не оказало влияния на процессы восстановления изученных биохимических показателей, кото-
рые достоверно не отличались от патологического контроля 1 (таблица 3.2.3), а также
56
80% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
57±8,6% |
50±7,4% |
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
60% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
38±6,1% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
40% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
20% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 мг/кг |
|
15 мг/кг |
|
25 мг/кг |
|
||||||||||
|
|
|
|
|
Рисунок 3.2.2 - Значения коэффициента гепатопротекции при внутрибрюшинном введении различных доз СЭ-2-ГП-β-ЦД
Таблица 3.2.4
Выживаемость животных при внутрибрюшинном введении различных СЭ- 2-ГП-β-ЦД на модели поражения печени тетрахлорметаном
|
|
|
|
|
|
Дни опыта |
|
|
|
|
|
|
Коли- |
% вы- |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Общее ко- |
вы- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
чество |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Совместное |
|
личество |
жив- |
|||||
Группы жи- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
погиб- |
|||||||
Предварительное |
|
|
введение |
|
За- |
животных, |
ших |
|||||||||||
вотных |
|
|
|
ших |
||||||||||||||
введение веществ |
|
веществ и |
бой |
взятых в |
жи- |
|||||||||||||
|
|
живот- |
||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
СС14 |
|
|
опыт |
вот- |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ных |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ных |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контроль 1, |
р |
р |
р |
р |
р |
р |
|
р |
р |
р |
р |
р |
|
р |
|
|
|
|
(CCl4 + Н2О |
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
2 |
* |
|
|
* |
|
6 |
|
67 |
внутрибрю- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
шинно) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4+СЭ-2- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
ГП-β-ЦД, |
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
1 |
* |
|
|
* |
|
6 |
1 |
83 |
5 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4+СЭ-2- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
ГП-β-ЦД, |
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
* |
|
|
* |
|
6 |
0 |
100 |
15 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CCl4+СЭ-2- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
ГП-β-ЦД, |
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
2 |
* |
|
|
* |
|
6 |
2 |
67 |
25 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контроль 2, |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
|
|
|
|
CCl4+2-ГП-β- |
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
2 |
* |
1 |
|
* |
|
|
|
|
ЦД внутри- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
3 |
50 |
брюшинно, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
25 мг/кг |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Примечания: р- внутрибрюшинное введение растворителя (вода очищенная); * введение CCl4; + введение испытуемых веществ; цифрами указано количество погибших животных в определенные дни опыта
не способствовало повышению выживаемости животных по сравнению с контролем 1 (таблица
3.2.4). При сравнении данных групп патологического контроля, которые вместо исследуемых субстанций получали воду очищенную в эквиобъмном количестве перорально (таблица 3.2.3) и
внутрибрюшинно (таблица 3.2.4) достоверных отличий между ними не выявлено.
57
Полученные данные позволяют заключить следующее: 1) сам по себе способ введения
(перорально или внутрибрюшинно) воды очищенной не оказывает влияния на выраженность гепатотоксического действия СС14 у животных патологического контроля; 2) 2-ГП-β-ЦД, кото-
рый был использован для повышения растворимости СЭ ШБ, не обладает собственным гепато-
защитным эффектом; 3) оптимальной терапевтической дозой СЭ-2-ГП-β-ЦД при испытании его в качестве гепатопротектора следует считать дозу 15 мг/кг.
3.3 Определение оптимальной терапевтической дозы СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД на модели
поражения почек хлоридом ртути (II)
Как следует из полученных результатов, представленных в таблице 3.3.1, однократное введение раствора хлорида ртути(II) вызвало поражение почек с развитием выраженного азоте-
мического синдрома. У животных группы патологического контроля по сравнению с данными у крыс интактной группы достоверно изменились следующие показатели: возросла концентрация креатинина на 417%; наблюдалось снижение объема мочи после 2,5% водной нагрузки на 81%
и СКФ на 93%; повышалось содержание мочевины в сыворотке крови и моче на 1074% и 222%
соответственно. Достоверных изменений в концентрации креатинина в моче не выявлено.
Лечебно-профилактическое введение СЭ ШБ на фоне почечной недостаточности, вы-
званной хлоридом ртути |
(II), оказало нефрозащитное действие, которое |
было наиболее |
вы- |
ражено в дозе 300 мг/кг |
по сравнению с дозами 50, 100 и 500 мг/кг, |
что видно из |
дан- |
ных таблицы 3.3.1. При введении СЭ ШБ в дозе 50 мг/кг такие показатели, как содержание мо-
чевины в моче и в сыворотке крови были достоверно выше, чем в норме на 192% и 712% соот-
ветственно, а диурез - достоверно ниже на 68% и оставались на уровне контрольных живот-
ных. Содержание креатинина в сыворотке крови снижалось на 34% по сравнению с контролем,
но было выше нормы на 242%, в связи с чем, СКФ оставалась достоверно более низкой, чем в норме на 77%.
При увеличении дозы СЭ ШБ до 100 мг/кг наблюдалось увеличение диуреза по сравне-
нию с контролем на 327%, снижение уровня креатинина в сыворотке крови на 64% и повыше-
ние СКФ на 917%, что было на 234% выше, чем в дозе 50 мг/кг. При этом отмечалось сниже-
ние содержания мочевины в сыворотке крови на 85% по сравнению с нелеченными животными,
но содержание мочевины в моче достоверно не отличалось от патологического контроля и было выше нормы на 148%.
Применение СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг привело к достоверному снижению по срав-
нению с контролем содержания креатинина в крови на 82%, которое было достоверно бо-
лее низким, чем в дозе 50 мг/кг на 73%. При этом объем мочи увеличивался достоверно по сравнению с контролем на 379%, в результате чего СКФ при введении СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг
58
Таблица 3.3.1
Влияние лечебно-профилактического введения per os различных доз СЭ ШБ на функциональное состояние почек на модели поражения хлоридом ртути (II)
|
|
|
Экспериментальные группы |
|
||
|
Интакт- |
Контроль, |
Хлорид |
Хлорид |
Хлорид |
Хлорид |
|
ные, |
(хлорид |
ртути (II)+ |
ртути (II)+ |
ртути (II)+ |
ртути (II)+ |
Показатель |
n =8 |
ртути (II) |
СЭ ШБ, 50 |
СЭ ШБ, |
СЭ ШБ, |
СЭ ШБ, |
|
|
+ Н2О пер- |
мг/кг, |
100 мг/кг, |
300 мг/кг, |
500 мг/кг, |
|
|
орально), |
n =6 |
n =8 |
n =8 |
n =8 |
|
|
n =7 |
|
|
|
|
Креатинин |
933±177,5 |
1693±277,2 |
1733±335,2 |
1707±101,0 |
1003±126,1 |
1451±168,5 |
мочи, |
|
|
|
|
|
|
мкмоль/л |
|
|
|
|
|
|
Креатинин |
75 ±8,6 |
388±13,2 |
257±26,1 |
139±24,0 |
69 ±3,1 |
156 ±21,4 |
сыворотки |
|
+417% |
-34%* |
-64%* |
-82%* |
-60%* |
крови, |
|
|
+242% |
-46%" |
-73%" |
-39%" |
мкмоль/л |
|
|
|
|
|
+126%# |
Объем мо- |
2,5 ±0,42 |
0,5 ±0,11 |
0,8 ±0,40 |
2,1 ±0,14 |
2,3 ±0,29 |
1,6 ±0,26 |
чи за 2 ч, |
|
-81% |
-68% |
+327%* |
+379%* |
+240%* |
мл/100 г |
|
|
|
|
|
|
Мочевина |
48±8,8 |
153±31,1 |
138±35,8 |
118±14,9 |
53±10,4 |
214±30,4 |
мочи, |
|
+222% |
+192% |
+148% |
-65%* |
+351% |
ммоль/л |
|
|
|
|
|
+301%≈ |
Мочевина |
5,7±0,18 |
67,4±8,89 |
46,6±12,09 |
10,1±2,16 |
5,1±0,28 |
9,1±2,04 |
сыворотки |
|
+1074% |
+712% |
-85%* |
-92%* |
-86%* |
крови, |
|
|
|
|
|
|
ммоль/л |
|
|
|
|
|
|
СКФ, |
12,9±2,14 |
1,0±0,17 |
2,9 ±0,59 |
9,7 ±0,44 |
16,3±2,01 |
7,8 ±1,32 |
мкл/100г/м |
|
-93% |
-77% |
+917%* |
+1594%* |
+717%* |
ин |
|
|
|
+234%" |
+462%" |
-52%≈ |
|
|
|
|
|
+68%# |
|
Примечание: данные статистически значимы по отношению к *-контролю (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони);
–интактным (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони); "- СЭШБ, 50мг/кг(р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом
Бонферрони);
#-СЭШБ,100мг/кг(р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони); ≈-СЭШБ, 300мг/кг(р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони)
увеличилась по сравнению с нелеченными животными на 1594%, что было достоверно выше на 462% и 68% по сравнению с животными, получавшими СЭ ШБ и в дозе 50 и в дозе
100 мг/кг. Содержание мочевины, как в сыворотке крови, так и в моче, уменьшилось по срав-
нению с контролем на 92% и 65% соответственно.
59
При дальнейшем увеличении дозы СЭ ШБ до 500 мг/кг содержание креатинина в сыворотке крови уменьшилось по сравнению с контролем на 60% , что было на 39% более вы-
ражено, чем в дозе 50 мг/кг, но этот показатель оказался на 126% больше, чем в дозе 100 мг/кг.
При этом менее выражено (+240%) увеличивался объем мочи, чем при введении СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг, в связи с чем, СКФ увеличивалась по сравнению с контролем только на 717%,
что было достоверно более низким на 52%, чем в дозе 300 мг/кг. У крыс, получавших СЭ ШБ в дозе 500 мг/кг, содержание мочевины в сыворотке крови уменьшилось по сравнению с контро-
лем на 86%, а содержание мочевины в моче было достоверно более высоким, чем у интактных крыс на 351%, а также выше, чем у крыс, которым вводили СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг, на 301%.
Таким образом, сравнение полученных данных по тесту Бонферрони показал, что эф-
фективность действия СЭ ШБ при повышении дозы от 50 до 100 и 300 мг/кг сначала увеличи-
вается, а затем при дальнейшем повышении дозы до 500 мг/кг – снижается. Это позволяет сде-
лать вывод, что оптимальной терапевтической дозой СЭ ШБ при оценке нефропротекторного действия при пероральном введении, как и в случае оценки гепатопротекторной активности,
является доза 300 мг/кг, что подтверждают и рассчитанные коэффициенты нефропротекции
(рисунок 3.3.1).
120% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
102±9,2% |
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
100% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
|
|
|
|
* |
|
|||||||||
80% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
57±10,2% |
|
|
|
|
|
55±7,8% |
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
60% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
40% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
17±3,8% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
20% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
50 мг/кг |
|
100 мг/кг |
|
300 мг/кг |
|
500 мг/кг |
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
* - данные статистически значимы по отношению к дозе 300 мг/кг (р<0,05, однофакторный дисперсионный анализ с постобработкой тестом Бонферрони)
Рисунок 3.3.1 - Значения коэффициента нефропротекции при пероральном введении различных доз дозы сухого экстракта шлемника байкальского на модели поражения почек хлоридом ртути (II)
Процент выживших животных, представленный в таблице 3.3.2, значительно увеличивался при введении СЭ ШБ в дозе 100 мг/кг по сравнению с дозой 50 мг/кг, а затем оставался неиз-
менным. Как видно из таблицы 3.3.3, СЭ-2-ГП-β-ЦД при внутрибрюшинном введении также обладал нефрозащитным действием, которое было выражено в разной степени в зависимости
60
Таблица 3.3.2
Выживаемость животных при пероральном введении различных доз СЭ ШБ на модели поражения почек хлоридом ртути (II)
|
|
|
|
Дни опыта |
|
Общее коли- |
Количе- |
% вы- |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
ство |
||
Группы |
|
Совместное вве- |
|
чество живот- |
живших |
|||||
|
За- |
погиб- |
||||||||
животных |
|
дение СЭ ШБ и |
ных, взятых в |
живот- |
||||||
|
бой |
ших |
||||||||
|
хлорида ртути (II) |
опыт |
ных |
|||||||
|
|
животных |
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контроль, (хлорид |
р |
|
р |
р |
р |
р |
|
8 |
1 |
88 |
ртути (II)+ Н2О пе- |
* |
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
рорально) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Хлорид ртути (II) |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
8 |
2 |
75 |
+СЭ ШБ, 50мг/кг |
* |
|
1 |
1 |
|
|
|
|
|
|
Хлорид ртути (II) |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
8 |
0 |
100 |
+СЭ ШБ 100мг/кг |
* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Хлорид ртути (II) |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
8 |
0 |
100 |
+СЭ ШБ 300 мг/кг |
* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Хлорид ртути (II) |
+ |
|
+ |
+ |
+ |
+ |
|
8 |
0 |
100 |
+СЭ ШБ 500 мг/кг |
* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Примечания: р- пероральное введение растворителя (вода очищенная); * введение хлорида ртути (II); + введение СЭШБ; цифрами указано количество погибших животных в определенные дни опыта
от дозы. При лечебно-профилактическом введении СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе 5 мг/кг наблюдалось достоверное снижение по сравнению с контролем 1 таких показателей, как мочевина сыворот-
ки крови и мочи, а также креатинин сыворотки крови и мочи на 67% и 60% и на 87% и 31% со-
ответственно. При этом объем мочи достоверно повышался на 160%, а СКФ - на 1530% и до-
стоверно не отличались от уровня интактных животных.
При повышении дозы до 15 мг/кг перечисленные показатели изменялись в том же направлении и практически в той же степени без обнаружения в каком-либо случае достовер-
ных различий по сравнению с животными, получавшими СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе 5 мг/кг (таблица
3.3.3). При этом такие показатели, как мочевина сыворотки крови и мочи и креатинин сыворот-
ки крови и мочи уменьшались по сравнению с контролем 1 соответственно на 69% и 60% и на
85% и 31%, а объем мочи и СКФ увеличились на 240% и 1574%.
При введении СЭ-2-ГП-β-ЦД в дозе 25 мг/кг регистрируемые в данной эксперименталь-
ной серии показатели нормализовались в меньшей степени: содержание мочевины в сыворотке крови и моче и содержание креатинина в сыворотке крови уменьшились соответственно на
36%, 39%, 76%, а объем мочи увеличился только на 164%, при том, что СКФ достоверно не от-
личалась ни от контроля 1, ни от других опытных групп, а такой показатель, как мочевина сы-
воротки крови был достоверно более высоким, чем в дозе 15 мг/кг на 100%, оставаясь также достоверно более высоким, чем в норме на 125%. Выявленные изменения свидетельствовали о