- •Лабораторная работа № 1
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Лабораторная работа №2
- •Теоретическая часть Стерилизация стеклянной посуды
- •Стерилизация инструментов и приборов
- •Лабораторная работа № 3 Тема: Питательные среды и техника их приготовления.
- •Стерилизация питательных сред
- •Техника приготовления основных питательных сред
- •Стандартные питательные среды
- •Специальные (элективные) питательные среды
- •Дифференциально-диагностические (цветные) питательные среды
- •Определение рН питательных сред
- •Лабораторная работа № 4 Тема: Методы посева и культивирование продуцентов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 5 Тема: Изучение роста микроорганизмов и влияние на него рН и температуры культивирования.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 6 Тема: Выделение чистых культур бактерий. Количественный учет микроорганизмов.
- •Метод выделения чистых культур с помощью химических веществ.
- •Методы обогащения.
- •Количественный учет микроорганизмов путем счета колоний(чашечный метод Коха)
- •Практическая часть
- •3. Определение микробного числа почвы
- •4.Определение микробного числа воздуха
- •5. Определение микробного числа воды
- •6. Определение микробной загрязненности предметов обихода и рук
- •Лабораторная работа № 7 Тема: Отделение биомассы микробов от культуральной жидкости.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 8 Тема: Изучение ферментативной активности (бродильной, протеолитической, целлюлозолитической) микроорганизмов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 9 Тема: Исследование хлебопекарных дрожжей.
- •Практическая часть
- •3. Определить процентное содержание сахаромицетов и посторонних микроорганизмов
- •4. Качество прессованных дрожжей.
- •Лабораторная работа № 10 Тема: Методы получения аминокислот из микробной массы.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 11 Тема: Методы экстрагирования из микробной массы ферментов, витаминов и липидов.
- •Практическая часть
- •1 Метод.
- •Лабораторная работа № 12 Тема: Микрофлора молочнокислых продуктов. Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности (закваски, бифидумбактерии, лактобактерии).
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности
- •Практическая часть
Практическая часть
1. Выделение аминокислот из микробной массы.
1 метод. Отделяют микробную массу от питательной среды, сливают жидкую фракцию в выпарную чашку и концентрируют выпариванием до половины объема. После этого подкисляют концентрат раствором соляной кислоты (0,2-0,4 мл раствора на 1 мл концентрата). В этот момент происходит выпадение кристаллов глутаминовой кислоты или лизина. Кристаллы отделяют декантированием, растворяют кипящей водой в соотношение 1:5, повторно кристаллизируют и сушат выпариванием.
2 метод. На лабораторной работе группа студентов делится на две бригады, первая бригада выделяет белок из муки злаковых культур, вторая – из измельченных бобовых культур.
Для создания лучших условий экстрагирования белков необходимо просеять муку, выделяя фракцию с размером частиц не более 100 мкм, и отбрасывая оболочки и более крупные частицы, богатые крахмалом. Взвесить в химическом стакане навеску муки массой 10 г, постепенно прилить к ней 60 мл 10 % (NH4)2SO4. Суспензию настаивать 10…15 мин для растворения белков. Содержимое стакана разлить поровну в две центрифужные пробирки. Разделить суспензию на центрифуге при скорости вращения ротора 500 об/мин и продолжительности процесса центрифугирования 10 мин.
Фугат собрать в чистый химический стакан и определить с помощью биуретового метода Яроша концентрацию белка. Для этого в пробирку объемом 20 мл прилить 2,4 мл раствора мочевины, 0,1 мл фугата и 2,5 мл биуретового реактива. Записать время внесения биуретового реактива. Смесь хорошо перемешать и поместить в водяную баню с температурой 40 °С на 10 мин. Затем охладить ее до 20 °С под струей холодной воды или на воздухе. Через 30 минут после внесения биуретового реактива определить оптическую плотность раствора, пользуясь кюветами № 5 и светофильтром № 6 ФЭК-56. Количество белка определить по предварительно построенной калибровочной кривой.
В три пробирки объемом 20 мл налить по 5 мл фугата и провести экстракцию белков раствором сульфата алюминия разной концентрации. В первую пробирку добавить 5 мл 0,5 % Al2(SO4)3 c температурой 3…5 °С, во вторую – 5 мл 2,5 % Al2(SO4)3 c температурой 3…5 °С, в третью – 5 мл 5 % Al2(SO4)3 c температурой 3…5 °С. Содержимое каждой из пробирок тщательно перемешать и провести высаливание белков при температуре 3…5 °С (в холодильнике) в течение 15 мин. Образовавшийся осадок отделить фильтрованием через складчатый фильтр. В фильтрате определить количество белка с помощью биуретового метода Яроша в соответствии с пунктами 5 и 6. Рассчитать коэффициент извлечения белка
где сн– концентрация белка в фугате, г/л; ск– концентрация белка в фильтрате, г/л.
Полученные экспериментальные данные и результаты расчетов внести в табл. 1.
Таблица 1. Экспериментальные данные и результаты расчетов выделения белков из белоксодержащих продуктов
Показатели |
Фугат |
Фильтрат после осаждения Al2(SO4)3, % | ||
0,5 |
2,5 |
5 | ||
Время внесения биуретового реактива |
|
|
|
|
Средняя оптическая плотность |
|
|
|
|
Количество растворенного белка |
|
|
|
|
Доля извлеченного белка |
|
|
|
|
Построить график зависимости концентрации остаточного белка от концентрации экстрагента и сравнить эффективность выделения белка из различного сырья.
Вопросы для самоконтроля:
Какие методы применяются для получения аминокислот?
Продуценты лизина, их характеристика.
Охарактеризуйте биотехнологию получения лизина. Основные технологические параметры.
В чем заключается сущность биуретового метода определения концентрации белков?