- •Санкт-Петербургская государственная медицинская
- •Isbn 5-7243-0283-7 Коллектив авторов, 2009
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Номенклатура жирных кислот
- •Критерии пригодности жира в пищу
- •Лабораторная работа № 11 Определение кислотного числа солевым методом
- •Определение перекисных соединений в составе жира
- •Акролеиновая проба
- •Определение концентрации триацилглицеридов (таг) в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом
- •Клинико-диагностическое значение определения тг в сыворотке крови
- •Тестовый контроль по теме «Строение, классификация липидов. Переваривание липидов в желудочно-кишечном тракте».
- •1. Тема 18. Тканевой обмен липидов
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •Синтаза жирных кислот
- •Синтаза жк
- •Функциональная единица синтазного комплекса
- •Тестовый контроль по теме «Тканевой обмен липидов».
- •Этапы -окисления жирных кислот:
- •Ответы:
- •1. Тема 19. Холестерин. Строение, свойства, биологическая роль. Липопротеины крови. Определение холестерина в сыворотке крови.
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Техническое оснащение занятия.
- •8.Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Методы количественного определения холестерина в сыворотке крови. Клинико-диагностическое значение*
- •Лабораторная работа №12 Количественное определение холестерина в сыворотке крови ферментативным методом
- •Количественное определение холестерина в сыворотке крови по модифицированному методу Златкис-Зака*
- •Тестовый контроль по теме «Обмен холестерина. Липопротеины»
- •Тест 5
- •Тест 15
- •Тест 18.
- •Статины снижают активность гмг-КоА-редуктазы по механизму ______________ ____________ ингибирования.
- •1. Тема 20. Нарушения липидного обмена
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Тестовый контроль по теме: «Нарушение обмена липидов»
- •Дополните ответ.
- •Ответы по теме: «нарушения обмена липидов»
- •Тестовый контроль по теме «Биологические мембраны»
- •Тема 21. Программа контрольной работы по разделу «химия и обмен липидов»
- •Обмен белков
- •1. Тема 22. Переваривание белков в желудочно-кишечном тракте. Качественный и количественный анализ желудочного сока. Промежуточный обмен аминокислот
- •3. Конкретные задачи
- •6. Вопросы для самоподготовки
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения
- •Методы исследования секреторной функции желудка
- •Название реакции: Фермент:
- •Тест 30.
- •Ответы по теме: «переваривание белков в жкт. Качественный и количественный анализ желудочного сока. Тканевой обмен аминокислот»
- •1. Тема 23. Обезвреживание аммиака в организме. Остаточный азот крови. Диагностическое значение определения мочевины в крови и в моче
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Количественное определение мочевины в крови и моче, клинико-диагностическое значение
- •Лабораторная работа №13 Количественное определение мочевины в сыворотке крови уреазным методом
- •Количественное определение мочевины в моче цветной реакцией с парадиметиламинобензальдегидом
- •Количественное определение креатинина в крови и моче
- •Тестовый контроль по теме «Обезвреживание аммиака. Остаточный азот крови»
- •1. Тема 24. Возможные нарушения белкового обмена при действии факторов внешней среды и различных патологических состояниях
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Задача 14
- •Нормальные величины азотсодержащих компонентов крови и мочи
- •Тестовый контроль по теме «Нарушения белкового обмена»
- •Изониазид вызывает нарушение:
- •Продукционная азотемия возникает в результате:
- •Ретенционная азотемия возникает в результате:
- •Ответы по теме: “нарушение обмена белков”
- •1. Тема 25: Строение нуклеиновых кислот. Биосинтез белка. Обмен нуклеопротеинов.
- •3. Конкретные задачи:
- •6. Вопросы для самоподготовки:
- •7. Этапы занятия и контроль их усвоения.
- •Молекулярные механизмы мутаций
- •Виды мутаций
- •Тесты по теме «Молекулярные механизмы передачи генетической информации»
- •Ответы по теме: “молекулярные механизмы передачи генетической информации”
- •Тема 26. Программа контрольной работы по разделу "обмен белков"
- •Оглавление
6. Вопросы для самоподготовки:
6.1. Пути использования ацетил-КоА в клетке.
6.2. Синтез холестерина до мевалоновой кислоты.
6.3. Последующие этапы синтеза холестерина.
6.4. Строение и биологическая роль холестерина.
6.5. Производные холестерина.
6.6. Регуляция синтеза холестерина.
6.7. Эфиры холестерина. Обмен эфиров холестерина.
6.8. Липопротеины. Классификация. Состав, строение.
6.9. Классификация и свойства апобелков.
6.10. Факторы риска при атеросклерозе.
6.11. Индекс атерогенности.
6.12. Клинико-диагностическое значение определения холестерина в крови.
7. Техническое оснащение занятия.
Таблицы: Производные холестерина, метаболическая судьба липопротеинов.
8.Этапы занятия и контроль их усвоения.
№ |
Этапы проведения занятия |
Формы проведения |
Время (мин) |
8.1. |
Постановка задачи |
Излагает преподаватель |
5 |
8.2. |
Контроль исходного уровня знаний |
Тестовый контроль |
10 |
8.3. |
Разбор теоретического материала |
Опрос студентов |
95 |
8.4. |
Приобретение практических навыков. |
Постановка лабораторной работы и оформление протоколов. |
60 |
8.5. |
Подведение итогов занятия. |
Излагает преподаватель. Ответы на вопросы студентов. |
10 |
Пример билета проверочного контроля – см. тестовый контроль по теме.
Методы количественного определения холестерина в сыворотке крови. Клинико-диагностическое значение*
Холестерин (ХС) является важным липидным компонентом всех тканей и клеток организма. 80% ХС в организме составляет свободный ХС, почти весь он является компонентом биологических мембран. В то же время в сыворотке (плазме) крови 2/3 ХС представлено в форме эфиров холестерина. Больше всего его в надпочечниках, крови, нервной системе, коже, пищеварительном аппарате. Основным местом биосинтеза ХС является печень. В организме человека с массой тела 70 кг содержится в среднем 140 г ХС, т. е. около 0,2% массы тела. Известно, что человек с пищей получает в среднем 0,4-0,5 г ХС в день, синтезирует же ежедневно в организме в количестве 1,5-4,2 г, в среднем 2 г. Таким образом, большая часть ХС организма образуется эндогенно.
В настоящее время применяют референсные границы содержания ХС, установленные ВОЗ. Согласно этим данным верхний уровень нормального содержания ХС в возрасте 20-29 лет составляет 5,17 ммоль/л, 30-39 лет - 5,69 ммоль/л и более 40 лет - 6,21 ммоль/л. На уровень ХС оказывает влияние характер пищи и прием алкоголя, интенсивные физические тренировки, фармакологические препараты, включая гормональные контрацептивы, стероиды, гиполипидемические препараты. Сезонные и дневные вариации не оказывают влияния на уровень ХС в сыворотке крови.
Содержание ХС в крови является важным диагностическим тестом. Уменьшение концентрации ХС (гипохолестеринемия) обнаружено при гипертиреозе, анемиях, туберкулезе, лихорадочных состояниях, голодании, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, онкологических заболеваниях. Количество ХС в крови может увеличиваться при нарушении переноса и поглощения клетками липидов. Длительная гиперхолестеринемия является тестом развития атеросклероза вследствие отложения в стенке артерий преимущественно ЭХС с последующим образованием атеросклеротических бляшек. Резко повышается содержание ХС в органах при жировой инфильтрации. Увеличение концентрации ХС отмечается также при механической желтухе, гломерулонефрите и нефротическом синдроме, сопровождаемых отеками, сифилисе, гипотиреозе, В-авитаминозе и т. д. Очень высокий уровень ХС в крови наблюдается при сахарном диабете и липоидном гидронефрите - 26,86
ммоль/л и выше.
Определение содержания ХС не дает диагностической информации о конкретном заболевании, а характеризует общую патологию обмена липидов. Определение ХС имеет социальное значение, так как повышенный уровень ХС в популяции требует организационных мероприятий по первичной профилактике коронарного атеросклероза.
Гиперхолестеринемия является независимым фактором риска ИБС. Связь между уровнем общего ХС плазмы крови и смертностью от ИБС является весьма жесткой и описывается экспоненциальной кривой. Холестерин ЛПВП как "предсказатель" ИБС оказался в 8 раз чувствительнее, чем холестерин ЛПНП. Предложено в качестве "предсказателя" рассчитывать так называемый холестериновый коэффициент атерогенности (К), представляющий собой отношение холестерина ЛПНП и ЛПОНП к холестерину ЛПВП:
холестерин ЛПНП + холестерин ЛПОНП
холестерин ЛПВП
В клинике очень удобно рассчитывать этот коэффициент на основании определения общего холестерина и холестерина ЛПВП:
общий холестерин - холестерин ЛПВП
холестерин ЛПВП
Чем выше этот коэффициент (у здоровых лиц он не превышает 3), тем выше опасность развития (и наличия) ИБС.
Методы определения ХС можно классифицировать следующим образом: а) химические; б) ферментные; в) электрохимические; г) хроматографические.
К химическим относятся методы определения продуктов взаимодействия ХС с кислотами Льюиса после его дегидроксилирования. В качестве реагентов наиболее часто применяются либо реактив Либермана-Бурхарда (смесь концентрированной H2SO4, СН3СООН и уксусного ангидрида), либо реактив Златкиса-Зака (H2SO4 и соли Fe3+). Известно большое число модификаций этих методов, отличающихся способами пробоподготовки, соотношением реактивов и условиями проведения реакций. В зависимости от способа подготовки пробы химические методы можно разделить на 2 группы: 1) прямые методы, не предусматривающие предварительную подготовку пробы;
2) экстракционные методы, включающие экстракцию ХС органическими растворителями.
Основным достоинством прямых методов является простота, доступность и низкая стоимость анализа. Важнейшим недостатком является неспецифичность. Это связано с тем, что в жестких условиях, учитывая значительное эндогенное образование тепла, в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови, образуя окрашенные
продукты (чаще всего в результате дегидратации). На определение ХС сильно влияют билирубин, гемоглобин, каротин, некоторые стеролы, лекарственные препараты, присутствующие в крови. Причиной ошибки может являться также денатурация белка сыворотки в присутствии кислоты. Из-за влияния этих факторов результаты определения ХС прямыми методами оказываются завышенными в среднем на 2—12%.
. Включение этапа экстракции повышает специфичность метода; результаты определения ХС в среднем на 7% ниже, чем при прямом методе. Спектр используемых экстрагентов довольно широк. В настоящее время наиболее часто применяются гексан, изопропанол, петролейный эфир, смесь метанол-хлороформ. Применяемые растворители достаточно эффективно отделяют ХС от основных интерферирующих веществ: билирубина, гемоглобина и других белков, многих лекарств, однако холестериноподобные стерины экстрагируются вместе с ХС.
В химических методах обычно используют фотометрическую регистрацию (λmax = 560 нм), однако для повышения чувствительности применяют и флуориметрический способ. При этом снижается влияние
ряда мешающих компонентов.
Ферментные методы. В настоящее время 95% лабораторий мира использует ферментный способ определения ХС. Ферментное определение протекает в несколько этапов:
I стадия - ферментный гидролиз эфиров ХС (чаще всего используют холестеринэстеразу):
Холестеринэстераза
Эфиры ХС + Н2О -------------------------------► ХС + ЖК (1)
II стадия - окисление ХС растворенным в реакционной смеси кислородом воздуха в присутствии оксидазы ХС:
Холестериноксидаза
ХС + О2 --------------------------------► Холест-4-ен-З-он + Н2О2 (2)
III стадия - определение продуктов реакции (Н2О2 или холест-4-ен-З-она) или убыли кислорода в процессе ее протекания. Чаще всего содержание ХС находят, определяя Н2О2, образующийся в ходе реакции (2).
Электрохимическое определение холестерина. Электрохимические варианты ферментного метода определения ХС основаны на регистрации уменьшения парциального давления О2 или на увеличении концентрации Н2О2 в ходе реакции (2).
Хроматографические методы. Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии и газожидкостной хроматографии обладают высокой разрешающей способностью при разделении близких по свойствам стеринов, позволяют проводить определение в малых количествах биологического материала (капиллярная кровь).