- •Растворимость. Факторы:
- •2) Методы осаждения белков:
- •3) Методы разделения белков (зависит от цели):
- •Лекция №3 «Ферменты. Строение. Механизм действия. Часть 1»
- •(Класс(1-6).Подкласс.Подподкласс.Цифровой номер в подподклассе)
- •Лекция №4 «Витамины»
- •Лекция №5 «Ферменты. Часть 2. Ингибирование и активация ферментов. Регуляция ферментативной активности»
- •Лекция №6 «Углеводный обмен»
- •Лекция №7 «Обмен углеводов. Аэробное дихотомическое окисление глюкозы».
- •Лекция №8 «Тканевое дыхание. Синтез атф».
- •Лекция №9 «Механизм действия сигнальных молекул».
- •Лекция №10 «Регуляция углеводного обмена»
- •Лекция №11 «Гормоны гипофиза и щитовидной железы»
- •Лекция №12 «о кислороде»
3) Методы разделения белков (зависит от цели):
-грубого разделения (2-3 фракции белков):
Высаливание.
Ультрацентрифугирование. Принцип: на разных массе, размере белков. Зависит от скорости движения ротора. Чем тяжелее, тем быстрее осядет белок.
-точного разделения (5-15-20 фракций белков)
Хроматография: - адсорбционная (основана на разной степени сорбции белков) сорбент – гидроксиапатит (пр.: акт.уголь)
- гель-фильтрация (основана на принципе молекулярного сита – разделение белков происходит по молекулярной массе и размеру) сорбент – сефадекс, сефароза (гранулированный пористый носитель с разным размером пор)
-ионнообменная (основана на разном заряде белка) носитель – анионнообменная\катионнообменная смола (обладает положительным\отрицательным зарядом) буфер с другим значением рН – элюент.
-аффинная\специфичная (основана на сродстве белка к лиганду) носитель – рецептор\антиген\субстрат, имеющий определённый лиганд. Замедляется тогда гормон\антитело\белок-фермент.
Нюансы:-используется колонка, наполненная спец.сорбентом
-иммуннохроматографические методы – используются в медицине для диагностики инфаркта миокарда для определения кардиомаркёров, для определения разл.наркотических в-в в плазме крови (основана на взаимодействии белка-антигена из биожидкости с антителом).Работает по принципу тонкостной хроматографии с использованием специфических тест-полосок.
С использованием эл.тока:
-электрофорез. Принцип: белки с зарядом движутся в эл.поле. Выявляются 5 белковых фракций:
-альбумины
-альфа-1-глобулины
-альфа-2-глобулины
-бета-глобулины
-гамма-глобулины
-изоэлектрофокусирование (основано на разных изоэлектрических точках). Используются амфолиты, создавая градиент рН от кислой (рН=3) до щёлочной (рН=10). Подключаем электроды, создавая эл.ток, и в эл.поле белки движутся до своей изоэл.точки (когда заряд равен нулю).
Лекция №3 «Ферменты. Строение. Механизм действия. Часть 1»
Лектор: проф. В.А. Дадали
Ферменты – спец.белки, обладающие каталит.св-вами. Ферменты – белковые катализаторы, или катализаторы белковой природы. Катализаторы – в-ва, ускоряющие хим.р-ции, участвующие в них и регенерирующиеся в них. Ферменты отличаются от обычных катализаторов:
-высочайшей активностью (активнее в 10^16 раз)
-высокоактивные (пр.: ферменты нервного импульса – АЦ-Х-эстераза)
-умеренноактивные (пр.: пищеварительные ферменты – пепсин)
-абсолютной избирательностью действия (фермент может действовать на один-единственный субстрат, или ускорять одну-единственную р-цию). Пример: …
Большинство ферментов обладают относительной избирательностью. Пример: уреаза (расщепляет мочевину – NH2-C(=O)-NH2 --- NH3 + CO2) Ni входит как ультрамикроэлемент в уреазу.
Пример: пепсин (фермент – расщепитель белков, липаза – расщепитель жиров, амилаза – расщепитель углеводов)
-регулируемостью действия (их активность может изменяться под действием хим.в-в, пример: гормоны)
Законы термодинамики и кинетики сохраняются для белков-ферментов!!!
От активности ферментов зависит метаболизм и обмен в-в в организме! А на все ли процессы действуют ферменты? НЕТ!
Все процессы делятся на термодинамическиневыгодные и термодинамическизапрещённые.
График: дельтаG (свободная энергия) по ординатам
Координата р-ции по абсциссам.
График сначала идёт вверх, потом резко вниз
Конечная энергия ниже энергии исходных! дельтаG<0.
Только такие процессы ускоряются ферментами!!
График: дельтаG (свободная энергия) по ординатам
Координата р-ции по абсциссам.
График сначала идёт резко вверх, потом вниз
Конечная энергия ниже энергии исходных! дельтаG>0.
Такие процессы не ускоряются ферментами!!
Уникальная активность, уникальные св-ва нужно объяснить! Каково их строение?.. Ферменты – белки. Ферменты, как и белки, могут быть простыми и сложными. Если фермент – простой белок, то он – неразветвлённая цепь аминокислот (рибонуклеаза – 152 iаминокислоты – третичная структура). Если же фермент – сложный белок (таких больше), то он состоит из простого белка - акофермент (НЦА) + небелковая часть (ко-фактор). Если ко-фактор – орг.молекула, то термин «ко-фактор» заменяется на «ко-фермент». Если ко-фактор – атом металла (другой неорг.ион), то он сохраняет название «ко-фактор». Ко-ферментами являются производные всех витаминов! Это говорит о значимости витаминов в питании. Ко-ферментами могут быть также другие орг.молекулы (пример: гем)! Ко-факторами могут быть минералы: макроэлементы (Mg++, Ca++, K+) и микроэлементы (Fe++, Zn++ (300 ферментов), Se++). Пример: В6 (пиридоксин) – акт.часть-пиридоксальфосфат.
НОМЕНКЛАТУРА ФЕРМЕНТОВ.
Комиссия по ферментов (Enzyme Commission). Правила:
-для отличия в-в ферментов было принято окончание «аза». 4 фермента-исключения: пепсин (фермент жел.сока), трипсин, хемотрипсин (ферменты кишечника), лизоцим (св-ва антибиотика)
-Классификация (по типу р-ции):
-оксидоредуктаза
-трансфераза
-гидролаза
-лиаза
-изомераза
-лигазы (синтетазы)
-Каждый класс разбит на подклассы и подподклассы. Этим градациям были присвоены свои номера. Международный шифр: