Глава III оплодотворение и беременность оплодотворение

Характеристика яйцеклетки. Яйцеклетки млекопитающих неподвижны и имеют значительно большие размеры, чем спермин. Это обусловлено и большей массой цитоплазмы, и, главным образом, наличием запасного питательного материала в виде желтка (дейтоплазмы). Этот материал представлен желточными гранулами и пластинками. Состоит из белков, фосфолипидов и нейтральных жиров. Желток может находиться в цитоплазме яйцеклетки или быть обособленным от цитоплазмы. Образуется в печени и других органах и через кровь поступает в ооцит.

У домашних животных диаметр яйцеклетки без прозрачной оболочки колеблется от 0,11 до 0,15 мкм и мало зависит от размеров тела. Яйцеклетка коровы имеет диаметр около 115 мкм, толщина прозрачной оболочки 15-30 мкм и общий диаметр клетки составляет 165 мкм. Яйцеклетка овцы несколько больше – соответственно 112-125, 9-16 и 167 мкм. Яйцеклетка свиньи имеет диаметр 130 мкм, толщина прозрачной оболочки – 15 мкм.

Яйцеклетка, вышедшая из фолликула, вскоре погибает, если не будет оплодотворена. Уже в период прохождения истмической части яйцепровода цитоплазма и ядро клетки распадаются на отдельные фрагменты и после размягчения прозрачной оболочки постепенно рассасываются. Происходит это уже в матке, куда неоплодотворенные яйцеклетки попадают примерно в то же время, когда и оплодотворенные. У кобыл неоплодотворенные клетки остаются в яйцепроводах, где подвергаются медленной (в течение нескольких недель или даже месяцев) цитоплазматической дегенерации. У этого вида животных развивающийся зародыш оказывает, по-видимому, более мощное эндокринное (или иное) влияние на функцию яйцепроводов, что позволяет ему проникнуть в матку, тогда как неоплодотворен-ная клетка туда не проходит. Продолжительность жизни яйцеклетки коровы составляет 10-12 ч; овцы – 12-15; лошади – 8-10 ч; свиньи – 6-15 ч. В течение этого периода яйцеклетка может быть оплодотворена, но чаще способность к оплодотворению сохраняется более короткое время и обычно не превышает 6 ч.

По мнению Ф.И.Осташко и др., яйцеклетки млекопитающих сохраняют способность к оплодотворению in vivo 4-5 сут и оплодотворение их возможно не только в яйцепроводе, но и в роге матки.

Сущность оплодотворения. Оплодотворение - физиологический процесс, в результате которого происходит объединение генетического материала яйцеклетки и спермия и образование новой клетки (зиготы) с диплоидным набором хромосом.

Во время продвижения яйцеклетки по яйцепроводу в начале ампулярной части его вследствие беспорядочного движения спермиев происходит встреча их с яйцеклеткой и оплодотворение. Наступление оплодотворения зависит от числа присутствующих спермиев, а также биологической полноценности обеих гамет.

У некоторых млекопитающих яйцеклетка окружена фолликулярными клетками (лучистым венцом). Эти клетки склеены между собой материалом, имеющим в своем составе гиалуроновую кислоту. Под влиянием фермента гиалуронидазы фолликулярные клетки довольно быстро рассеиваются уже в воронке яйцепровода. Фермент деполимеризует гиалуроновую кислоту и разрушает склеивающий клетки материал. Гиалуронидаза содержится в плазме спермы и спермиях (акросоме). Особенно много содержится фермента в семенниках и сперме кролика. Функция гиалуронидазы при оплодотворении заключается в том, что она позволяет отдельным спермиям пройти между фолликулярными клетками и достичь яйца. Для этого не требуется разрушение всего лучистого венца, хотя полное обнажение клетки важно и необходимо для продвижения ее по яйцепроводу, но оно может произойти и без Участия спермиев.

Следует отметить, что этот процесс не имеет видовой специфичности. Это послужило поводом использовать фермент гиалуронидазу для повышения оплодотворяемости путем добавления ее в сперму. Однако результаты испытаний противоречивы.

Лучистый венец хорошо выражен у яйцеклеток свиней, значительно слабее - у коров. Клетки венца могут направлять спермий, когда он проходит между ними, и подводить его к яйцеклетке. Определенную роль в соединении гамет играют гормоны оплодотворения (гамоны). Известно четыре гамона. Два из них (гинога-моны) выделены из яйцеклетки. Гиногамон 1 активизирует действие спермиев, гинагамон 2 вызывает их агглютинацию. Два других (андрогамоны) выделены из спермиев. Андрогамон 1 парализует движение спермиев и нейтрализует гиногамон 1. Андрогамон 2 (акрозин) растворяет прозрачную оболочку и облегчает достижение спермиев поверхности яйцеклетки; он нейтрализует гиногамон 2.

После достижения спермием прозрачной оболочки следует видоспецифическая реакция, которая приводит к прочной связи половых клеток. Сродство определенных фракций белков из плазматических мембран спермиев и прозрачной оболочки яйца, по-видимому, имеет решающее значение в прикреплении к ней. Вскоре после этого спермий по узкому извилистому пути быстро проникает через эту оболочку. При этом отделяется и утрачивается на поверхности прозрачной оболочки пузырчатая акросомная и плазматическая мембраны спермия. Головка спермия попадает в околожелточное пространство и вскоре соприкасается с желточной оболочкой. После этого прозрачная оболочка становится малочувствительной к другим спермиям. Вот почему у ряда видов (хомяк, собака, овца, лошадь и др.) число проникших через прозрачную оболочку спермиев не велико. У других животных (крольчиха, корова, свинья и др.) ответная реакция прозрачной оболочки замедленная или совсем не проявляется и в околожелточное пространство могут попасть десятки и даже сотни спермиев.

После контакта спермия с желточной оболочкой яйцеклетки, когда произойдет слияние их плазматических мембран (у ряда видов под желточной оболочкой находится вторая оболочка – плазматическая мембрана), начинается кортикальная реакция. Кортикальные зерна, расположенные в поверхностном слое цитоплазмы яйцеклетки, вздуваются, затем их оболочки вместе с плазматической мембраной гаметы разрываются. В пространство между ее поверхностью и желточной оболочкой изливается содержимое этих гранул (зерен), которое содержит протеолитический фермент. Он разрушает связи желточной оболочки с другими спермиями, и это предотвращает полиспермию. Кортикальная реакция распространяется по поверхности яйцеклетки волнообразно в течение 10-20 с. У некоторых видов в процессе кортикальной реакции желточная оболочка приподнимается над поверхностью яйцеклетки, образуя перивителиновое пространство. На внутренней поверхности оболочки накапливаются тонким слоем вещества, освобождающиеся из гранул. В результате желточная оболочка утолщается и ее называют оболочкой оплодотворения.

П осле соприкосновения спермия с желточной оболочкой происходит образование второго полярного тельца и ооцит второго порядка превращается в зрелую яйцеклетку. Затем спермий полностью погружается в цитоплазму клетки. Входит он не перпендикулярно, а по касательной по отношению к желточной оболочке (рис. 58). После вхождения в яйцеклетку головка спермия набухает, теряет форму и оболочку и становится едва заметной, ядерный материал выходит из нее и вскоре появляются в виде мелких точек ядрышки. Они постепенно соединяются и образуют большие, круглые частицы, которые включаются в мужской пронуклеус; пронуклеус окружен ядерной оболочкой.

Также происходит образование женского пронуклеуса. После второго редукционного деления ядро яйцеклетки разрывается и его содержимое смешивается с цитоплазмой. Материал хромосом превращается в раздробленную зернистую массу. Затем образуются ядрышки, которые вскоре окружаются оболочкой. Образуется женский пронуклеус. Эти изменения наступают в течение 2-3 ч после проникновения спермия.

Слияние пронуклеусов (сингамия) является конечной стадией оплодотворения. После сближения в цент-Ре клетки пронуклеусы уменьшаются- в величине, исчезают ядрышки; затем исчезают и ядерные оболочки. Появляются две группы хромосом, которые движутся навстречу друг другу и в стадии метафазы происходит их слияние (соединение ядер клеток при конъюгации). Почти непосредственно за этим следуют анафаза и телофаза первого деления мейоза.

В отдельных случаях в яйцеклетке оказывается 2 или даже 3 спермия (полиспермия). В результате образуется 3 или 4 пронуклеуса. Возможность оплодотворения несколькими спермиями может возникать в тех случаях, когда второй спермий проникает через прозрачную оболочку в точке, диаметрально противоположной точке первоначального проникновения. Но если осеменение проведено в оптимальное время, то яйцепроводы и оболочки яйцеклетки, действуя совместно, исключают до минимума возможность одновременного И0стижения поверхности яйцеклетки двумя жизнеспособными спермиями. При старении яйцеклетки создаются условия для полиспермии.

Б. П. Хватов пересаживал крольчихам яйцеклетки с тремя пронуклеусами и получил нормальное потомство. По его мнению, в оплодотворении обычно участвует женский и один мужской пронуклеус, остальные же редуцируются. Но могут быть и такие случаи, когда из трех пронуклеусов сливаются два мужских, а женский редуцируется; или же участвуют все три пронуклеуса, но один из них – целиком, а два других – по половине. При этом диплоидный набор хромосом не нарушается. Б.П.Хватов считает, что наличием таких вариантов можно объяснить появление различных наследственных признаков при осеменении самок смешанной спермой.

Суперфекундация (superfecundatio) – оплодотворение нескольких яйцеклеток в период одной половой охоты спермой различных самцов. Суперфекундация характерна, главным образом, для многоплодных животных (собак, кошек, реже свиней, овец). Если самцы принадлежат к одной и той же породе, то суперфекундацию выявить трудно. Легче это сделать, если они относятся к различным породам или видам. В литературе описан случай, когда кобыла родила близнецов: жеребенка и мула. Несомненно, что в этом случае она покрывалась и жеребцом и ослом.

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЗАРОДЫШЕЙ

Оплодотворенная яйцеклетка попадает в матку и развивается там до состояния зрелого плода. Развитие яйцеклетки при удачной трансплантации (пересадке) может происходить и в матке другого животного (реципиента), если в момент пересадки стадии полового Цикла коровы-донора эмбриона и реципиента совпадали.

Впервые пересадка зародышей была осуществлена Хиппом в 1890 г. у крольчих. С тех пор работы в этом направлении проводились и на других видах животных и это сделало трансплантацию зародышей одним из фундаментальных методов исследования воспроизводительной функции, в частности, – процессов оплодотворения и беременности. В настоящее время трансплантация зародышей имеет огромное практическое значение. Во многих странах функционируют коммерческие центры по трансплантации зародышей крупного рогатого скота и других животных.

Начало практического внедрения способа связано с успехами центра при Макдональдском колледже (Канада). Сотрудники колледжа в период с 1965 по 1969 г. успешно осуществляли трансплантацию яйцеклеток у крольчих, овец, свиней. Затем работы были перенесены на крупный рогатый скот и в 1973 г. получен живой теленок. С тех пор масштабы применения способа трансплантации зародышей резко возросли и в 1985 г. в США было получено несколько десятков тысяч телят-трансплантантов. В СССР за 1984-1987 гг. было проведено около 17 тыс. пересадок зародышей и получено более 3 тыс. телят. В эти годы началось внедрение метода трансплантации зародышей крупного рогатого скота и в Беларуси. В настоящее время в республике функционируют областные центры трансплантации эмбрионов, а также несколько пунктов в хозяйствах. Координируют их работу племживобъединения и лаборатория БелНИИЖ,

Значение метода в скотоводстве. В молочном скотоводстве пересадка зародышей позволяет ускорить и более точно провести оценку коров по качеству их дочерей, путем раннего получения зародышей от телок сократить интервалы между поколениями и ускорить селекцию, значительно увеличить распространение ценных генов путем отбора матерей для получения быков-производителей. В мясном скотоводстве можно добиться повышения продуктивности стад путем увеличения рождения двоен. Естественная двойневость У коров мясных пород составляет 2,8%, но вследствие размещения обоих эмбрионов в одном роге матки примерно у половины животных развитие их нарушается. Размещая эмбрионы в обоих рогах, можно увеличить число двоен до 20% и более. А при ранней идентификации пола станет возможным пересаживать только однополые зародыши и это предотвратит рождение телочек-фримартинов.

Пересадка зародышей может производиться коровам и с целью устранения бесплодия, если оно вызвано непроходимостью яйцепроводов, спайками яичников с яичниковым карманом, нарушением условий в матке вследствие старения и в других случаях. Применение этого метода позволяет многим странам вести обмен генофондом, который из-за ограничений правилами ветеринарного контроля в виде покупок животных осуществляется в небольших масштабах.

Пересадка зародышей дает возможность получать идентичных близнецов путем деления морулы или ранней бластоцисты на две или более частей, переносить ядра соматических клеток в зиготы и воспроизводить затем подобных особей.

Для получения оплодотворенных яйцеклеток in vitro и последующей пересадки их животным-реципиентам разработаны способы культивирования ооцитов из яичников убитых животных (фолликулярных ооцитов). Достигнут успех оплодотворения in vitro тубальных (извлеченных из яйцепроводов) зрелых ооцитов и последующей пересадки их реципиентам. В 1978 г. была извлечена посредством кесарева сечения девочка у 30-летней многорожавшей женщины, которой была пересажена оплодотворенная вне организма яйцеклетка. В 1982 г. впервые после оплодотворения тубальных ооцитов in vitro был получен теленок.

Большие возможности открывает трансплантация зародышей для развития генной инженерии (получение трансгенных животных, химерных животных и т.д.).

Метод трансплантации зародышей включает ряд приемов: вызывание суперовуляции у доноров и их осеменение; извлечение оплодотворенных яйцеклеток; синхронизацию половой охоты у реципиентов или же сохранение извлеченных зародышей до момента пересадки реципиентам с естественной половой охотой; пересадку зародышей реципиентам.

Вызывание суперовуляции у коров-доноров. Трансплантация зародышей может быть эффективной в том случае, когда за один прием от донора будет получено несколько половых клеток. А это возможно только в результате искусственного вызывания суперовуляции.

Вызвать суперовуляцию можно путем применения гонадотропина СЖК или очищенного ФСГ. Эти гормоны применяют в отдельности или в комплексе с гонадотропин-рилизинг-гормоном, простагландином, эстрогенами, хорионическим гонадотропином.

Существуют два основных способа вызова суперовуляции с помощью ГСЖК (фоллигон, интергонан, маротропин и др. препараты).

Ирландский способ
Дни цикла: 16-17-й 19-20-й 21-й 1-й 2-й 5-й 6-8-й	1500-3000 ЕД ГСЖК внутримышечно 10 мг эстраднол-бензоата вутримышечно Половая охота (0 день). 1500-3000 ЕД хорионического гонадотропина внутривенно Первое осеменение Второе осеменение Хирургическое извлечение зародышей Нехирургическое извлечение зародышей
Датский способ
Дни цикла: 8-12-й 10-14-й Через 48 часов 0 1-й 2-й 6-8-й	1500-3000 ЕД ГСЖК внутримышечно 25 мг ПГ-Ф2а или 500 мкг клопростенола внутримышечно Половая охота Первое осеменение Второе осеменение Нехирургическое извлечение зародышей

Гонадотропин СЖК оказывает более продолжительное действие, чем эндогенный или экзогенный ФСГ, что может быть причиной высокой изменчивости в числе и качестве овуляций, низкого выхода качественных эмбрионов. Для предотвращения нежелательных явлений вводят дополнительно антисыворотку на СЖК. Эстрогены вводятся для повышения оплодотворяемости, а хорионический гонадотропин и простагландины -для ускорения овуляции.

Главное достоинство применения ГСЖК для вызова суперовуляции – однократное введение животному всей дозы препарата.

Однако более стабильные результаты получают при использовании очищенного ФСГ, получаемого из гипофиза свиней. Общая доза на обработку препарата ФСГ-П (США) – от 32 до 50 мг. Инъецируют гормон два раза в день с промежутком 12 ч.

Дни цикла: 8-12-й 9-13-й 10-14-й 11-15-й (0) 12-16-й (1) (8)

Утро (8-00) ФСГ-П 6мг Вечер (20-00) ФСГ-П 6 мг Утро (8-00) ФСГ-П 5 мг Вечер (20-00) ФСГ-П 5 мг Утро (8-00) ФСГ-П Змг + клопростенол 500 мкг (эстрофан, ремофан, суперфан, клатрапростин) Вечер (20-00) ФСГ-П 3 мг + клопростенол 250 мкг Утро (8-00) ФСГ-П 2 мг Вечер (20-00) ФСГ-П 2 мг Половая охота. Осеменение в 20 ч Осеменение в 8 ч и 20 ч Извлечение эмбрионов

Простагландин целесообразнее вводить на 4-й день после начала обработки. Используют и другие схемы гормональной обработки коров-доноров эмбриона (в течение 5 дней по 10 мг ФСГ-П, простагландин на 3-4-й • день, начало обработки на 8-й день полового цикла; в течение 4 дней: 15 мг, 12 мг, 10 мг и 5 мг ФСГ-П, простагландин на 3-й день и т. д.). Дозу гормона регулируют в зависимости от серии препарата, срока его хранения, индивидуальной чувствительности животных и других факторов. Препараты фоллитропин (Литва), ФСГ (Беларусь), "ФСГ-СУПЕР" (Россия), фолликотропин (Чехия) и др. применяют в дозах, рекомендуемых наставлениями по применению этих препаратов.

У обработанных животных число овуляций варьирует от 0 да 50, чаще – 10-15. Это зависит от дозы и качества гормональных препаратов, индивидуальных особенностей животных и ряда других факторов. Увеличение дозы ГСЖК увеличивает число зрелых фолликулов, но процент овуляций может снизиться. Большие дозы препарата нередко вызывают образование кист яичников, геморрагических фолликулов или их лютеинизацию. Некоторые животные совершенно не реагируют на введение гонадотропных гормонов; таких коров может быть до 40% . Существует и ряд других проблем. Так, большое число созревающих фолликулов приводит к продлению процесса овуляции на несколько суток, а это отрицательно отражается на оплодотворяемости яйцеклеток и приживляемости их после пересадки реципиентам. При множественных овуляциях оплодотворяемость снижается, часть оплодотворенных яйцеклеток теряется вследствие увеличения яичника и неспособности воронки яйцепровода воспринять их. На результаты обработки оказывают влияние порода возраст животных, сезон года (в зимние месяцы число овуляций снижается), лактация и др.

В качестве коров - доноров эмбрионов отбирают ценных в генетическом отношении животных, хорошо реагирующих на введение гонадотропинов и дающих биологически полноценные зародыши. Молочная продуктивность донора за ряд лет должна быть выше стандарта данной породы в среднем на 50-60%, содержание жира в молоке – на 20% и более. Используют обычно коров, имеющих не менее двух-трех лактации, в возрасте не более 8-9 лет. После родов гормональную обработку не следует начинать ранее чем через 2-3 мес. До обработки животное должно проявить минимум два нормальных естественных половых цикла, иметь положительный баланс энергии, хорошее состояние половых органов и нормальный воспроизводительный статус в предыдущий репродуктивный период. Учитывают при отборе доноров эмбрионов и такие селекционные признаки, как породность, экстерьер, конституция, морфофункциональные свойства вымени, жизнеспособность приплода.

После отбора доноров и при необходимости вызвать суперовуляцию у нескольких животных одновременно им вводят дважды с промежутком 11 дней простагландин (клопростенол). Можно подкожно имплантировать синхромат (норгестамет). Через 9 дней имплантант удаляют и внутримышечно инъецируют простагландин (прозолвин, 3 мл). Через двое суток наблюдается половая охота.

Извлечение зародышей. Для извлечения зародышей предложено два метода: хирургический и нехирургический. Хирургический метод пригоден для всех видов животных и человека, но для крупного рогатого скота и лошадей в настоящее время он применяется главным образом в научных целях.

При хирургическом извлечении зародышей животное не кормят 1-1,5 сут и не поят 5-6 ч. Под общим трахеальным наркозом "веселящим" газом галотам в сочетании с тио- или оксибарбитуратом делают разрез по белой линии живота. Осматривают половые органы, подсчитывают количество желтых тел в яичниках, подтягивают один из рогов матки к просвету паны, делают небольшой разрез вблизи тела матки и катетер Фоллея вставляют в полость маточного рога до изгиба в сторону верхушки.

Катетер из латексной резины имеет основной канал диаметром 2-3 мм для оттока промывной жидкости и второй канал диаметром 0,5 мм для нагнетания воздуха в резиновый баллончик, находящийся на расстоянии 4-5 см от верхушки катетера. На передней части катетера имеются два отверстия на различных уровнях для оттока жидкости. Резиновый баллончик необходим для предотвращения вытекания жидкости в тело или другой рог матки. После введения катетера и нагнетания воздуха в баллончик прокалывают тупой иглой верхушку маточного рога и вводят через прокол канюлю, через которую подают промывную жидкость (60-120 мл); жидкость вытекает через катетер Фоллея. Для улучшения результатов нередко делают тубо-маточное промывание. В этом случае канюлю вставляют в яйцепровод в ампулярную часть и подают промывную жидкость (10-20 мл). Промывание яйцепроводов и матки позволяет получать более 70% яйцеклеток и зародышей от числа желтых тел, а при промывании только матки – около 45%. Однако промывание матки более безопасно.

У коров оперативный доступ может быть сделан под паралюмбальной и дополнительно местной инфильтрационной анестезией в области левой или правой голодной ямки.

У овец извлечение зародышей хирургическим способом проводят через 40-80 ч после проявления первых признаков половой охоты; возможно проведение операции и через 5-12 сут. В зависимости от сроков выполнения процедуры промывают различные участки половых путей. В первые трое суток промыванию подвергают яйцепроводы, а иногда и конечную часть рогов матки; на 5-7-й день делают смывы из большей части рогов матки, а после 9-го дня – промывают всю матку. При извлечении зародышей из яйцепровода в воронку его вводят стеклянную трубочку (внутренний диаметр 2 мм) на глубину до 3 см и свободный конец ее помещают в маркированную чашку Петри. Овечью сыворотку (2 мл и больше) вводят при помощи шприца в яйцепровод в месте соединения с маточным рогом, и всю жидкость собирают. Если собирают зародышей из рога матки, тогда шприц или канюлю вводят в рог матки на расстоянии 4 см от тубо-маточного соединения и свободный конец помещают в емкость (чашку Петри) для зародышей. В просвет матки в месте соединения с яйцепроводом шприцем вводят 2 мл сыворотки. Чтобы сыворотка не терялась, рог матки за канюлей или шприцем пережимают рукой. Если зародыши извлекают на 5-7-й день от начала охоты, то используют 5-10 мл сыворотки и делают смывы из большей части рогов матки. А для получения бластоцист через 9 дней после начала охоты промывают всю матку. При этом шейку матки пережимают зажимом, сыворотку вводят в верхушку одного рога матки, а собирают ее через канюлю, вставленную в противоположный яйцепровод.

У овец к числу овуляций получают до 80% зародышей.

При нехирургическом извлечении зародышей у коров катетер вводят поочередно в рога матки через шейку матки под ректальным контролем (рис. 59). Оптимальное время для извлечения - 7-8-й день от начала половой

о хоты. К этому времени большинство зародышей будет находиться в верхушках рогов матки на протяжении около 10 см от соединения матки с яйцепроводом.

Для извлечения зародышей используются двух- или трехходовые катетеры (типа Фоллея) из латексной резины или телескопический комбинированный трехходовой инструмент с внутренним выдвигающимся эластическим катетером фирмы IMV (Франция).

Перед извлечением зародышей путем ректального исследования подсчитывают число желтых тел в яичниках коровы-донора. Наличие 10 или более желтых тел указывает на хорошую ответную реакцию животного на гормональную обработку, менее 5 желтых тел – на слабую реакцию. Для проведения операции корову фиксируют в станке в положении стоя. Желательно, чтобы тазовые конечности животного находились несколько выше передних. Для предупреждения частой дефекации и снятия мышечного напряжения делают сакральную анестезию. В эпидуральное пространство между крестцовой костью и первым хвостовым позвонком вводят 5 мл 2%-ного раствора новокаина. Строптивым коровам вводят внутримышечно миорелаксант (рампунь) 0,5-0,7 мл, или маточный релаксант комбилен 0,7-1,0 мл, илиханегиф 10 мл, или аминазин 5 мл. Теплой водой с мылом моют наружные половые органы и корень хвоста, вытирают бумажными салфетками или ватными тампонами.

Металлический катетер и переходники стерилизуют кипячением, латексный катетер обеззараживают в 96%-ном спирту, после чего промывают фосфатно-буферной средой для трансплантации зародышей. В латексный катетер затем вставляют стерильный металлический стилет и фиксируют в замковом узле кате-бра. Предварительно стилет смазывают стерильным вазелином или вазелиновым маслом. Снаружи кате-Р также можно слегка смазать вазелиновым маслом, чего его помещают в защитный полиэтиленовый чехол.

Катетер в чехле вводят во влагалище и направляют в канал шейки матки. Придерживая инструмент в та ком положении, сдвигают полиэтиленовый чехол назад, а катетер проводят через шейку матки и направляют в один из рогов матки. При этом металлический стилет вынимают из катетера постепенно, по мере введения катетера в рог матки. Важно правильно разместить катетер в роге матки. В большинстве моделей инструментов из латексной резины баллончик для воздуха находится на расстоянии около 5 см от его кончика. На этом участке в катетере проделано с различных сторон на различных уровнях четыре отверстия для выхода и входа промывной жидкости. Желательно, чтобы кончик катетера находился на расстоянии около 6 см от соединения яйцепровода с маткой. В этом случае расстояние от тубо-маточного соединения до баллончика составит приблизительно 10 см. Это как раз тот участок, за пределы которого зародыши еще не вышли. Нагнетают воздух в баллончик в количестве 15-30 см³. При этом обязательно контролируют рукой степень его наполнения и расширение рога матки, чтобы не допустить разрыва маточной стенки.

Как только баллончик будет наполнен воздухом, приступают к промыванию перекрытого (баллончиком) участка рога матки. Для этого полиэтиленовый шприц емкостью 50 мл (фирмы IMV) с фосфатно-буферной средой присоединяют к катетеру и вводят осторожно 30-35 мл среды. Затем шприц отсоединяют и жидкость из матки собирают в подготовленный сосуд; при этом открытый конец катетера оберегают от загрязнения. Опять присоединяют шприц и вводят столько же среды. В момент присоединения и отсоединения шприца катетер впереди металлического замкового устройства сдавливают пальцами. С каждым последующим введением количество среды увеличивают, доводя до 50-60 мл. А всего для промывания рога матки используют 500 мл среды. Обычно пользуются несколькими шприцами, что при быстром заполнении и смене их значительно уменьшает затраты времени на промывание.

Для предотвращения контакта жидкости для промывания матки с внешней средой и обеспечения асептики при извлечении зародышей при помощи двухходовых катетеров нами в систему катетер-шприц ключен трехходовый переходник фирмы IMV, из которого предварительно извлекаются клапаны и отсоединяется передняя канюля. К боковому патрубку переходника присоединяют эластичную трубку с зажимом. Свободный конец трубки помещают в сосуд для сбора поступающей из матки среды. После введения катетера в матку подготовленный переходник передним 'концом соединяют с замковым устройством катетера. Задний конец переходника служит для присоединения шприца со средой. В процессе промывания при открытом зажиме на эластичной трубке среда из рога матки поступает в сосуд, не контактируя с воздухом; шприц в таком положении должен оставаться соединенным с переходником. После закрытия зажима и передавливания пальцами катетера производят замену освобожденного шприца другим, заполненным средой. Такое усовершенствование процедуры обеспечивает стерильность среды для промывания и предупреждает потери зародышей, что возможно при.собирании поступающей из матки жидкости через открытый задний конец катетера. Можно сделать и совершенно замкнутую систему, если емкость со средой соединить трубкой (с зажимом) с задним концом переходника. В этом случае емкость должна быть расположена выше таза животного, чтобы среда поступала в матку самотеком.

После использования всего объема среды (500 мл) в рог матки можно ввести шприцем 30-40 мл воздуха. Иногда вводят воздух два-три раза. Это необходимо для более полного возвращения вводимой в матку среды. При этом имеет значение и умение специалиста контролировать состояние матки рукой через прямую кишку. Отсутствие больших потерь среды (из 500 мл не более 10-15 мл) и примесей в ней крови указывает на Достаточно техничное проведение операции.

Когда будет завершено промывание одного рога матки, воздух из баллончика выпускают и катетер извлекают из половых путей. Другой подготовленный катетер вводят в другой рог матки, и всю процедуру повторяют заново. Можно пользоваться и одним катетером, переводя его из одного рога в другой.

В качестве среды для промывания матки используют фосфатно-солевой буфер (ФСБ) Дюльбекко. ФСБ готовят путем смешивания трех различных стерильных растворов.