6 курс / Гастроэнтерология / Российский_журнал_гастроэнтерологии,_гепатологии,_колопроктологии (53)
.pdf
|
2, 2009 |
|
|
|
|
|
Оригинальные исследования |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
кистозными структурами прослеживалась про- |
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
||||||
слойка мягкотканной плотности, слабо накап- |
|
|
|
|
|
|||||
ливающая контрастное вещество (артериальная |
|
|
|
|
|
|||||
фаза – 38 ед. Н, венозная – 57 ед. Н, отсро- |
|
|
|
|
|
|||||
ченная – 68 ед. Н). A. gastroduodenalis прохо- |
|
|
|
|
|
|||||
дила в структуре инфильтрата. Ствол v. portae |
|
|
|
|
|
|||||
в начальном сегменте был расширен до 26 мм, |
|
|
|
|
|
|||||
на расстоянии 30 мм от конфлюенса сдавлен до |
|
|
|
|
|
|||||
2 мм. V. mesenterica superior прослеживалась по |
|
|
|
|
|
|||||
переднему контуру инфильтрата и была интактна. |
|
|
|
|
|
|||||
Тело и хвост железы увеличены (тело – 32 мм, |
|
|
|
|
|
|||||
хвост – 21 мм), структура их неоднородна. ГПП |
|
|
|
|
|
|||||
был расширен на всем протяжении до 10 мм. |
|
|
|
|
|
|||||
Парапанкреатическая клетчатка вокруг выход- |
|
|
|
|
|
|||||
ного отдела желудка и верхних брыжеечных |
|
|
|
|
|
|||||
сосудов инфильтрирована. Печень увеличена в |
|
|
|
|
|
|||||
размерах. Внутри- и внепеченочные протоки рас- |
|
|
|
|
|
|||||
Рис. 7. УЗ-изображение спонтанного контрастирова- |
||||||||||
ширены: правый печеночный проток – 16,9 мм, |
||||||||||
ния полости ПНК в режиме ЦДК |
|
|
||||||||
левый – 15 мм, общий желчный проток – 30 мм. |
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
||||||
На уровне интрапанкреатической части диаметр |
|
|
|
|
|
|||||
холедоха составлял 17 мм, на уровне головки про- |
Выбор того или иного метода лечения ложных |
|||||||||
свет его постепенно сужался и исчезал. |
аневризм висцеральных артерий зависит от разме- |
|||||||||
Ретроспективный |
анализ |
позволяет говорить |
ров аневризмы, жалоб и клинического состояния |
|||||||
о том, что на фоне выраженных признаков хрони- |
пациента. Тяжелое состояние затрудняет выпол- |
|||||||||
ческого панкреатита были недооценены результаты |
нение открытого хирургического вмешательства. |
|||||||||
СКТ – о накоплении капсулой некоторых кистоз- |
Эндоваскулярное лечение предпочтительно у лиц, |
|||||||||
ных образований контрастного вещества, а также |
имеющих высок й риск оперативного вмешатель- |
|||||||||
дуплексного сканирования – о вовлечении магист- |
тва. Пре мущества этого метода перед открытой |
|||||||||
ральных висцеральных артерий в патологический |
хирургической операцией заключаются в малой |
|||||||||
процесс и уплотнении стенки hepatica propria |
травматичности и низкой вероятности летального |
|||||||||
|
|
|
|
- |
исхода. Возможно применение его и в качестве |
|||||
a. hepatica communis, находящихся в развившемся |
||||||||||
инфильтрате, что свидетельствовало о прорастании |
первого этапа лечения, что позволяет значительно |
|||||||||
стенки этих сосудов. |
Вестиснизить опасность интраоперационной кровопо- |
|||||||||
На |
основании |
данных |
предоперационного |
тери. Особое значение это имеет у больных с |
||||||
обследования в 10 наблюденияхМбыла диагности- |
ложными аневризмами на фоне хронического |
|||||||||
рована ПНК ПЖ с осложнением в виде аррози- |
панкреатита, |
сопровождающимися |
портальной |
|||||||
онного кровотечения в полость кисты из прилежа- |
гипертензией и развитием венозных коллатералей |
|||||||||
щего магистрального сосуда. Интраоперационные |
различной степени выраженности. |
|
|
|||||||
данные позволили верифицировать в 1 случае |
Комплексное ультразвуковое исследование |
|||||||||
псевдоаневризму желудочно-двенадцатиперстной, |
является методом выбора для мониторирования |
|||||||||
в 6 – селезеночной и в 1 – общей печеночной |
состояния ложной аневризмы как интраопераци- |
|||||||||
артерии. Диаметр ПНК варьировал от 73 до |
онно (при эндоваскулярном вмешательстве), так |
|||||||||
143 мм. |
Размеры |
полости |
ложной аневризмы |
и после него. Интраоперационное ультразвуко- |
||||||
колебались от 20×16 до 35,0×37,2 мм, дефект |
вое мониторирование дает возможность оценить |
|||||||||
сосуда выявлен в 3 наблюдениях (4,9–7,1 мм). |
результаты вмешательства и при необходимости |
|||||||||
При ДС отмечалось спонтанное контрастиро- |
одномоментно провести дополнительные лечебные |
|||||||||
вание полости аневризмы с регистрацией артери- |
манипуляции. Данный метод позволяет в после- |
|||||||||
ального кровотока (рис. 7). При СКТ с болюсным |
операционный период неинвазивно, без лучевой |
|||||||||
контрастным усилением полость аневризмы кон- |
нагрузки, с наименьшими затратами контроли- |
|||||||||
трастировалась в артериальную фазу, но характер |
ровать эффективность оперативного (эндоваску- |
|||||||||
контрастирования был несколько менее интенсив- |
лярного или открытого) вмешательства, а также |
|||||||||
ным по сравнению с аортой. Наиболее показа- |
мониторировать состояние аневризм незначитель- |
|||||||||
тельным методом исследования была трехмерная |
ных размеров. |
|
|
|
||||||
УЗ-ангиография в реальном масштабе времени. |
В 3 наблюдениях в качестве первого этапа |
|||||||||
Следует подчеркнуть, что особой дополнительной |
лечения |
проведена эндоваскулярная |
окклюзия |
|||||||
информации по сравнению с двумерным УЗИ и |
селезеночной |
артерии проксимальнее |
дефекта |
|||||||
СКТ эта методика не несет, однако она позволя- |
(второй этап – открытое оперативное вмешатель- |
|||||||||
ет более четко и качественно оценить найденные |
ство), в 2 случаях изогнутость чревного ствола и |
|||||||||
патологические изменения. |
|
наличие |
гемодинамически значимого |
стеноза не |
51
Оригинальные исследования |
2, 2009 |
|
|
|
|
|
|
|
Рис. 8. УЗИ брюшной полости, В-режим. |
|
|
|
|
|
|
GB – желчный пузырь, DUOD – изображение две- |
|
|
|
|||
надцатиперстной кишки с кистозным образованием |
Рис. 9. КТ с контрастированием. Венозная фаза. |
|||||
в ее стенке (указано стрелками), прилежащим к кисте |
||||||
головки ПЖ (CYST) |
|
|
|
Контрастирование ДПК водой после релаксации |
||
|
|
|
атропином. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
позволили выполнить |
эндоваскулярное |
вмеша- |
1 – киста в стенке кишки, 2 – сужение просвета |
|||
вертикальной ветви |
|
|
||||
тельство, вследствие чего осуществлена открытая |
|
|
||||
|
|
|
||||
операция. У 3 больных при выраженном болевом |
|
|
|
|||
|
|
|
||||
синдроме и угрозе разрыва кисты проведено экс- |
|
|
|
|||
тренное открытое оперативное вмешательство. |
|
|
|
|||
Установлено, что при выполнении в качестве пер- |
|
|
|
|||
вого этапа эндоваскулярной окклюзии артерии, |
|
|
|
|||
вовлеченной в патологический процесс, кровопо- |
|
|
|
|||
теря составила 750 мл, при открытом оператив- |
|
|
|
|||
|
- |
|
|
|
|
|
ном вмешательстве она варьировала от 3500 до |
|
|
|
|||
7000 мл. В 2 случаях проводилось динамическое |
|
|
|
|||
наблюдение за состоянием кисты: в одном – из-за |
|
|
|
|||
тяжелого соматического состояния пациенткиВести |
|
|
||||
выраженной портальной гипертензииМс развити- |
|
|
|
|||
ем венозных коллатералей (в ходе наблюдения |
|
|
|
|||
полость кисты уменьшилась, но полностью не |
|
|
|
|||
закрылась); в другом – консервативное лечение |
|
|
|
|||
привело к уменьшению полости вплоть до полной |
|
|
|
|||
ее окклюзии. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
У 3 больных ПНК в ПЖ сочеталась с пато- |
Рис. 10. МР-изображение кисты в стенке ДПК (указа- |
|||||
логическими изменениями медиальной |
стенки |
но стрелкой) |
|
|
||
ДПК, прилежащей к образованию. Изменения в |
|
|
|
|||
стенке кишки при УЗИ определялись в виде ее |
альной стенки ДПК выявлено кистозное образова- |
|||||
утолщения до 16,4 и 37 мм с наличием жидко- |
ние (рис. 10). МР-сигнал на Т1 ВИ был снижен |
|||||
стного образования в мышечном слое, имевшего |
по всей ткани железы, больше в головке. В Т2 ВИ |
|||||
четкие ровные контуры, анэхогенную структуру, |
интенсивность МР-сигнала была повышена. При |
|||||
тонкую капсулу с единичными гиперэхогенными |
контрастировании он |
становился |
максимально |
|||
перегородками (рис. 8); более четко УЗ-картина |
интенсивным на 3-й минуте от начала введения |
|||||
определялась при 3D. Во время ДС кровотока в |
контрастного вещества. При МРХПГ определялся |
|||||
капсуле и перегородках не отмечено. |
|
|
расширенный ГПП (рис. 11). Данные изменения |
|||
В процессе СКТ |
(с применением |
методи- |
были расценены как кистозная форма дуоденаль- |
|||
ки релаксации ДПК) диагностировано аналогич- |
ной дистрофии (рис. 12). |
|
||||
ное утолщение стенки с тонкостенным кистоз- |
Для уточнения диагноза проведено эндоУЗИ, |
|||||
ным образованием в мышечном слое (рис. 9). |
подтвердившее поражение стенки двенадцати- |
|||||
Накопление контрастного препарата в ткани |
перстной кишки. Выявленные изменения опре- |
|||||
головки ПЖ было резко снижено и замедлено, |
делялись на фоне увеличения всех отделов ПЖ, |
|||||
максимальная плотность отмечена в отсроченную |
преимущественно головки. Контуры железы были |
|||||
фазу исследования. При МРТ в проекции меди- |
четкие и бугристые. |
Паренхима |
неоднородно |
52
2, 2009 |
|
Оригинальные исследования |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рис. 11. Конусовидное сужение общего желчного протока в режиме МРХПГ (указано стрелкой)
Рис. 13. Нетипичная УЗ-картина дуоденальной дистрофии ДПК
TUM – опухоль (указана стрелками), DUOD – двенадцатиперстная кишка, PANCR – поджелудочная железа. Паренхима ПЖ не изменена
-Вести М
Рис. 12. Удаленный панкреатодуоденальный ком- |
Рис. 14. КТ-изображение атипичной формы дуо- |
плекс. Головка ПЖ рассечена, в срезе видны каль- |
денальной дистрофии ДПК (указано стрелкой). |
цинаты. Зонд проведен через большой дуоденальный |
Паренхима ПЖ не изменена |
сосочек в вирсунгов проток. Стрелками указаны |
|
кисты в медиальной стенке ДПК |
Мы диагностировали и атипичный случай |
|
дуоденальной дистрофии, при котором ПЖ не |
уплотнена во всех отделах с включениями каль- |
была увеличена, контуры ее были ровные и чет- |
ция и постнекротическими кистами. ГПП был |
кие, структура не изменена на всем протяжении, |
расширен от 4,4 до 13 мм, у одного больного в его |
кроме крючковидного отростка, а в стенке ДПК |
просвете определялись конкременты. В 2 случаях |
определялось кистозное образование с тонкими |
диагностировано расширение общего желчного |
гиперэхогенными перегородками (рис. 13–16). |
протока с его конусовидным сужением на уровне |
В 3 наблюдениях (пациенты в возрасте от 15 |
головки ПЖ. A. gastroduodenalis была смеще- |
до 34 лет) на дооперационном этапе обнаружена |
на во всех наблюдениях кпереди и медиально. |
кистозная опухоль на фоне отсутствия выражен- |
В одном случае кистозная форма дуоденальной |
ных воспалительных изменений паренхимы желе- |
дистрофии локализовалась на латеральной стенке |
зы. Одно образование локализовалось в головке |
кишки, стенка при этом была утолщена незна- |
ПЖ и два – в хвосте. Однако при морфологи- |
чительно, а образование располагалось большей |
ческом исследовании они были верифицированы |
частью экзоорганно. |
как постнекротические кисты. |
53
Оригинальные исследования |
2, 2009 |
Рис. 15. Удаленный панкреатодуоденальный комплекс.
Стрелками показано утолщение и кистозное поражение стенки ДПК
Рис. 17. Трехмерная УЗ-ангиография взаимоотношения кистозного образования в проекции хвоста ПЖ с магистральными сосудами
-Вести М
Рис. 16. Протоковая форма дистопии ПЖ в мышечной оболочке ДПК. Окраска гематоксилином и эози-
ном, ×200
В первомнаблюдениидооперационно поставлен диагноз: серозная цистаденома. Диагностическая ошибка была сделана вследствие наличия образования на фоне отсутствия каких-либо изменений структуры железы, характерных для хронического панкреатита. Структура образования в виде четких и ровных контуров, тонкой капсулы, а также присутствие тонких перегородок позволили заподозрить кистозную опухоль – цистаденому.
Во втором наблюдении при комплексном лучевом исследовании диагностирована муцинозная цистаденома (рис. 17–19). Данные в этом наблюдении ошибочно интерпретированы из-за невыраженности изменений структуры ПЖ, характерных для хронического панкреатита. Были недооценены также результаты КУЗИ и МРТ, касавшиеся внутренней структуры образования, где можно было заподозрить наличие кровоизлияния, что при отсутствии кровотока в капсуле и перего-
Рис. 18. КТ-изображение кистозного образования в проекции хвоста ПЖ в артериальную фазу исследования
Рис. 19. МР-изображение кистозного образования в проекции хвоста ПЖ в STIR-последовательности
54
2, 2009 |
|
|
|
|
|
|
Оригинальные исследования |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Таблица 3 |
|
Показатели чувствительности и специфичности (%) |
|
|
||||||||
ультразвукового и компьютерно-томографического исследований |
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
УЗИ |
|
|
СКТ |
|
|
||
Авторы |
Год |
чувствительность |
специфичность |
чувствительность |
специфичность |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Клименков А.А. и соавт. [11] |
1987 |
80 |
|
– |
|
93 |
|
– |
|
|
Cao H.G. [26] |
1989 |
80 |
|
– |
|
81 |
|
– |
|
|
Данилов М.В., Фёдоров В.Д. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
[6] |
|
1995 |
76,2 |
|
– |
|
– |
|
– |
|
Buscail L. и соавт. [25] |
1995 |
58 |
|
75 |
|
75 |
|
95 |
|
|
Manferdi R. и соавт. [46] |
2001 |
60–70 |
|
80–90 |
74–85 |
|
74–85 |
|
||
родках в большей степени |
позволило говорить |
при анализе полученных данных выявил, что соче- |
|
|||||||
о постнекротической кисте. Повышение плотно- |
тание ультразвукового и компьютерно-томографи- |
|
||||||||
сти мягкотканного компонента при контрастном |
ческого исследований повышает чувствительность |
|
||||||||
усилении могло свидетельствовать о наличии |
с 80 и 81% до 91%. В нашем исследовании мы |
|
||||||||
кровотока в нем, однако трактовка этих данных |
оценивали комплексную чувствительность, спе- |
|
||||||||
была ошибочна, так как при морфологическом |
цифичность и точность УЗИ, КТ и МРТ: они |
|
||||||||
исследовании мягкотканный компонент в полости |
составили соответственно 95,5, 90,5 и 94,8%. |
|
||||||||
образования оказался свежими тромботическими |
Эти значения выше показателей, полученных |
|
||||||||
массами. Таким образом, повышение плотности |
названными авторами при оценке УЗИ и СКТ в |
|
||||||||
мягкотканного компонента при СКТ говорило о |
отдельности. Следовательно, комплексное луче- |
|
||||||||
состоявшемся кровоизлиянии в полость ПНК. |
вое исследован е позволяет более точно диагно- |
|
||||||||
Диагноз муцинозной цистаденомы был постав- |
стирова ь хрон ческий панкреатит, осложненный |
|
||||||||
лен и в третьем наблюдении из-за нетипичной |
по |
некро |
ческой кистой/кистами. |
|
|
|||||
картины кистозного образования и наличия выра- |
Локализация |
и распространенность процесса |
|
|||||||
женных воспалительных изменений с вовлечени м |
наиболее |
четко |
определяются при |
спиральной |
|
|||||
|
|
|
- |
компьютерной томографии. МРТ позволяет точно |
|
|||||
в процесс верхней брыжеечной вены, на фоне |
|
|||||||||
которых при КУЗИ в структуре инфильтрата |
распознать состояние билиарных и панкреатиче- |
|
||||||||
регистрировались артерии с магистральнымВестиколских протоков и выявить признаки кровоизлия- |
|
|||||||||
латеральным типом кровотока и вены. Из анамнеза |
ния в постнекротическую кисту. К преимуществам |
|
||||||||
известно, что заболевание у пациентаМимело непро- |
ультразвукового исследования относятся возмож- |
|
||||||||
должительное течение (первый приступ произо- |
ность количественной оценки гемодинамической |
|
||||||||
шел 1,5 года назад и был купирован консерватив- |
ситуации как в самом патологическом очаге, так |
|
||||||||
но, настоящий рецидив является вторым). А при |
и вокруг него, а также определения состояния |
|
||||||||
непродолжительном течении панкреатита отмеча- |
стенки вовлеченного в патологический процесс |
|
||||||||
ются небольшая атрофия экзокринной паренхимы |
сосуда. Причиной диагностических ошибок явля- |
|
||||||||
и большая степень васкуляризации в зоне пора- |
ются атипичная картина опухолевого поражения |
|
||||||||
жения [15], что в нашем случае подтверждается |
на фоне выраженных воспалительных изменений |
|
||||||||
и характером накопления контрастного вещества |
ПЖ и окружающих ее органов и тканей, наличие |
|
||||||||
при СКТ и МРТ. Для хронического панкреатита |
постнекротической кисты у пациентов в молодом |
|
||||||||
типично наличие артерий с магистральным типом |
возрасте на фоне отсутствия воспалительных |
|
||||||||
кровотока. Регистрация коллатерального спектра |
изменений остальной паренхимы железы, что |
|
||||||||
кровотока, по-видимому, объясняется некорректно |
наиболее вероятно является следствием каких- |
|
||||||||
выставленным углом сканирования из-за визуали- |
либо ранее перенесенных травм эпигастральной |
|
||||||||
зации точечного локуса сосуда. |
|
области. |
|
|
|
|
|
|||
Таким образом, комплексное лучевое иссле- |
Кроме того, комплексное лучевое исследование |
|
||||||||
дование позволяет диагностировать хронический |
позволяет диагностировать такие осложнения, |
|
||||||||
панкреатит, осложнившийся |
постнекротической |
локализованные в парапанкреатической области, |
|
|||||||
кистой/кистами. Чувствительность, точность и |
как |
кистозная |
форма дуоденальной |
дистрофии |
|
|||||
специфичность отдельно ультразвукового и ком- |
и аррозионное кровотечение в полость псевдо- |
|
||||||||
пьютерно-томографического исследований раз- |
кисты, получить данные о локализации ложной |
|
||||||||
нятся по данным литературы, представленным в |
аневризмы, взаимоотношении ее с окружающи- |
|
||||||||
табл. 3. |
|
|
ми органами и сосудистыми структурами, оце- |
|
||||||
Сочетание методик исследования может повы- |
нить состояние |
стенок и просвета |
аневризмы. |
|
||||||
сить результативность диагностики. Так, H.G. Cao |
С помощью дуплексного сканирования возможна |
|
55
Оригинальные исследования |
|
2, 2009 |
|
|
|
качественная и количественная оценка кровотока |
Выводы |
|
по артерии – источнику аневризмы и в полос- |
|
|
ти самой аневризмы. Своевременно выявленные |
Результаты нашего исследования соответст- |
|
все эти данные дают возможность определить |
вуют данным литературы, поскольку выявлена |
|
оптимальную тактику лечения и снизить риск |
как типичная, так и редкая локализация кистоз- |
|
хирургического вмешательства. Эндоваскулярная |
ных образований – в латеральной стенке ДПК. |
|
операция в качестве первого этапа является пред- |
Доступные нам литературные источники свиде- |
|
почтительным методом выбора при лечении лож- |
тельствуют о том, что кистозная форма дуоде- |
|
ных аневризм висцеральных артерий. |
нальной дистрофии выявляется только при эндо- |
|
|
сонографии, однако в выполненной нами работе |
|
|
данный диагноз был поставлен при проведении |
|
|
трансабдоминального ультразвукового исследо- |
|
|
вания, а также при спиральной компьютерной |
|
|
томографии. |
Список литературы |
|
|
|
|
|
14. Кузин |
М.И., |
Шкроб |
О.С., Кузин Н.М. |
и др. |
|||||||||
1. |
Алиев М.А., Баймаханов Б.Б., Ахметов Е.А. Маг |
|
Хирургические |
болезни |
/ |
Под ред. М.И. Кузина. – |
|||||||||||||
|
М.: Медицина, 1986. – С. 563–569. |
|
|||||||||||||||||
|
нитно-резонансная холангиопанкреатография: техника, |
|
|
||||||||||||||||
|
15. |
Кунцевич |
Г.И., |
Скуба |
Н.Д., |
Щербаков |
С.В., |
||||||||||||
|
результаты и |
клинические |
показания. – |
Алма-Аты, |
|||||||||||||||
|
|
Журенкова Т.В. Корреляция ультразвуковых и морфо- |
|||||||||||||||||
|
2005. – 120 с. |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
логических методов исследования в оценке кровоснабже- |
|||||||||||
2. |
Быченко В.Г., Машинский А.А., Белышева Е.С. и др. |
|
|||||||||||||||||
|
ния поджелудочной железы при хроническом панкреа- |
||||||||||||||||||
|
Магнитно-резонансная холангиопанкреатография |
при |
|
||||||||||||||||
|
|
тите и раке поджелудочной железы // Ультразвуковая |
|||||||||||||||||
|
заболеваниях печени, желчных путей и поджелудочной |
|
|||||||||||||||||
|
|
диагностика. – 1998. – № 4. – С. 20–27. |
|
||||||||||||||||
|
железы // Медицинская |
визуализация. – |
2002. – |
|
|
||||||||||||||
|
16. |
Лемешко З.А., Кондрашин С.А., Соколина И.А. и др. |
|||||||||||||||||
|
№ 4. – С. 14–19. |
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
Редкое наблюдение: комплексная лучевая диагностика |
||||||||||||
3. |
Губергриц Н.Б., Момот Н.В. Агапова Н.Г. и др. Сосу |
|
|||||||||||||||||
|
аневр змы гастродуоденальной артерии // Рос. журн. |
||||||||||||||||||
|
дистые заболевания поджелудочной железы |
|
сосуди- |
|
|||||||||||||||
|
|
|
га |
роэн ерол. гепатол. колопроктол. – 2003. – Т. 13, |
|||||||||||||||
|
стые осложнения панкреатической патологии: лучевые, |
|
|||||||||||||||||
|
|
№ 3. – С. 75–78. |
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
сонографические и морфологические сопоставления |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
17. |
Лепорский |
Н.И. |
Болезни |
поджелудочной железы. – |
||||||||||||||
|
(Обзор литературы) // Медицинская визуализация. – |
||||||||||||||||||
|
|
М.: Медгиз. 1951. – 181 с. |
|
|
|
||||||||||||||
|
2005. – № 5. – С. 11–121. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
18. |
Мартынова Н.В., Нуднов Н.В. Современное состояние |
||||||||||||
4. |
Губергриц Н.Б., Христич Т.Н. Клиническая панкр а- |
||||||||||||||||||
|
проблемы лучевой диагностики новообразований подже- |
||||||||||||||||||
|
тология. – Донецк: Лебедь, 2000. – 416 с. |
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
лудочной железы (Обзор литературы) // Медицинская |
||||||||||||||
5. |
Гурова Н.Ю. |
Возможности |
высокопольной |
магнитно- |
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
Вести |
|
|
|
|
|
|||||||||
|
резонансной томографии в |
|
- |
|
|
визуализация. – 2005. – № 5. – С. 22–31. |
|
||||||||||||
|
диагностике заболеваний |
19. |
Покровский А.В. Клиническая ангиология: Руководство в |
||||||||||||||||
|
поджелудочной железы: Автороеф. дис. ... канд. мед. |
||||||||||||||||||
|
|
2 томах. – Т. 2. – М.: Медицина, 2004. – С. 117–128. |
|||||||||||||||||
|
наук. – М., 2002. – 29 с. |
|
М |
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
20. |
Шалимов |
А.А., |
Грубник |
В.В., |
Горовиц Д. |
и др. |
|||||||||
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
6. |
Данилов М.В., Федоров В.Д. |
Хирургия поджелудоч- |
|||||||||||||||||
|
Хронический панкреатит. Современные концепции пато- |
||||||||||||||||||
|
ной железы: Руководство для врачей. – М.: Медицина, |
|
|||||||||||||||||
|
|
генеза, |
диагностики и |
лечения. – Киев: Здоровье, |
|||||||||||||||
|
1995. – 512 с. |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
2000. – 256 с. |
|
|
|
|
|
|
|||||
7. |
Зубарев А.В., |
Каленова И.В., Башилов В.П. и |
др. |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
21. |
Alamo J.M., Gomes M.A., Tamayo M.J. et al. Mycotic |
||||||||||||||||||
|
Современная |
ультразвуковая |
диагностика |
объемных |
|||||||||||||||
|
|
pseudoaneurysms after liver transplantation // Transplant. |
|||||||||||||||||
|
образований поджелудочной железы // Медицинская |
|
|||||||||||||||||
|
|
Proc. – 2005. – Vol. 37, N 3. – P. 1512–1514. |
|
||||||||||||||||
|
визуализация. – 2001. – № 1. – С. 12–17. |
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
22. |
Beteta-Chinchilla |
C.E., |
Flores-Calderon J., Ramirez- |
||||||||||||
8. |
Кармазановский Г.Г. Спиральная компьютерная томогра- |
||||||||||||||||||
|
Mayans J.A. et al. Pancreatic pseudocyst. A case report |
||||||||||||||||||
|
фия с болюсным контрастным усилением в абдоминаль- |
|
|||||||||||||||||
|
|
and review of the literature // Bull. Med. Hosp. Infant. |
|||||||||||||||||
|
ной хирургии. – Ч. I (Дооперационная диагностика) // |
|
|||||||||||||||||
|
|
Mex. – 1991. – Vol. 48, N 6. – P. 445–452. |
|
||||||||||||||||
|
Медицинская визуализация. – 2004. – № 2. – С. 17–25. |
|
|
||||||||||||||||
|
23. |
Bhattacharya |
D., Ammori B.S. |
Minimally |
invasive |
||||||||||||||
9. |
Кармазановский Г.Г., Козлов И.А., Яшина Н.И. и |
||||||||||||||||||
|
approaches to the management of pancreatic pseudocysts: |
||||||||||||||||||
|
др. Компьютерно-томографические критерии |
выбора |
|
||||||||||||||||
|
|
review |
of |
the |
literature |
// Surg. Laparosc. |
Endosc. |
||||||||||||
|
метода и оценки результатов |
хирургического |
лечения |
|
|||||||||||||||
|
|
Percutan. Tech. – 2003. – Vol. 13, N 3. – P. 141–146. |
|||||||||||||||||
|
хронического панкреатита // Медицинская визуализа- |
|
|||||||||||||||||
|
24. |
Boschmann H., Zimmermann H-B., Wiechmann T. et |
|||||||||||||||||
|
ция. – 2006. – № 3. – С. 75–87. |
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
al. |
Rupturiertes |
Milzarterienaneurysma – eine |
seltene |
|||||||||||
10. |
Кармазановский Г.Г., Фёдоров В.Д. Компьютерная |
|
|||||||||||||||||
|
Ursache |
rezidivierender gastrointestinaler Blutungen // |
|||||||||||||||||
|
томография поджелудочной железы и органов забрю- |
|
|||||||||||||||||
|
|
Med. Klin. – 2001. – Vol. 96. – P. 351–354 (Nr. 6). |
|||||||||||||||||
|
шинного пространства. – М.: Паганель, 2000. – 354 с. |
|
|||||||||||||||||
|
25. |
Buscail L., Escourrou J., Delvaux M. et al. Endoscopic |
|||||||||||||||||
11. |
Клименков А.А., Итин А.Б., |
Лабецкий И.И. и |
др. |
||||||||||||||||
|
ultrasonography in: comparative prospective study with |
||||||||||||||||||
|
Комплексная диагностика рака ПЖ // Хирургия. – |
|
|||||||||||||||||
|
|
conventional ultrasonography, computed tomography, and |
|||||||||||||||||
|
1987. – № 9. – С. 101–105. |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
ERCP // Pancreas. – 1995. – Vol. 10, N 3. – P. 251– |
||||||||||||
12. |
Клиническое руководство по ультразвуковой диагности- |
|
|||||||||||||||||
|
257. |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
ке / Под ред. В.В. Митькова. – Т. 1. – М.: Видар, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
26. |
Cao H.G. Ultrasonographic manifestation and evaluation |
|||||||||||||||||
|
1996. – 335 с. |
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
of imaging diagnosis of chronic pancreatitis // Zhonghua |
|||||||||||
13. |
Кузин В.С., Белова И.Б., Китаев В.М. Высокопольная |
|
|||||||||||||||||
|
Yi Xue Za Zhi. – 1989. – Vol. 69, N 9. – P. 468–488. |
||||||||||||||||||
|
магнитно-резонансная томография и спиральная компь- |
|
|||||||||||||||||
|
27. |
Catalano C., Laghi A., Fraioli F. et al. Pancreatic car- |
|||||||||||||||||
|
ютерная томография в диагностике острого панкреатита |
||||||||||||||||||
|
|
cinoma: the role of high |
resolution |
multislice spiral CT |
|||||||||||||||
|
// Медицинская визуализация. – 2007. – |
№ 2. – |
|
||||||||||||||||
|
|
in the diagnosis and assessment of respectability // Eur. |
С. 24–33. |
Radiol. – 2003. – Vol. 13. – P. 149–156. |
|
56
2, 2009 |
Оригинальные исследования |
|
|
28. |
Dolan R.V., ReMine W.H., Dockerthy M.B. The fate |
50. |
Parks R.W., Tzovaras C., Diamond T. et al. Management |
||
|
of heterotopicpancreatic tissue. A study of 212 cases // |
|
of pancreatic pseudocysts // Ann. R. Coll. Surg. Engl. – |
||
|
Arch. Surg. – 1974. – Vol. 109. – P. 762–765. |
|
2000. – Vol. 82, N 6. – P. 383–387. |
||
29. |
Gabelman A., Gorich J., Merkle E.M. Endovascular |
51. |
Pracacci C., Graziani R., Zamboni G., Rowlands B.J. |
||
|
treatment of a visceral artery aneurysms // J. Endovasc. |
|
Cystic dystrophy of the duodenal wall: radiologic findings |
||
|
Ther. – 2002. – Vol. 9, N 1. – P. 38–34. |
|
|
// Radiology. – 1997. – Vol. 205. – P. 741–747. |
|
30. |
Graziani R., Tapparelli M., Malago R. et al. The |
52. |
Reber P.U., Uhi W., Buchler M.W. Pancreatic pseudocysts |
||
|
various imaging aspects of chronic pancreatitis // J. |
|
in chronic pancreatitis. Differential diagnosis and therapy |
||
|
Pancreas. – 2005. – Vol. 6, N 1. – P. 73–88. |
|
|
// Chirurg. – 1997. – Vol. 68, N 9. – P. 881–887. |
|
31. |
Grego F.G. Lepidi S., Ragazzi R. et al. Visceral artery |
53. |
Roche C.J., Hughes M.L., Garvey C.J. et al. CT and |
||
|
aneurysms: a single center experience // Cardiovasc. |
|
Pathologic assessment of prospective nodal staging in |
||
|
Surg. – 2003. – Vol. 11, N 1. |
|
|
|
patients with ductal adenocarcinoma of the head of the |
32. |
Gumaste V.V., Pitehumoni C.S. Pankreatic pseudocyst // |
|
pancreas // AJR. Am. J. Roentgenol. – 2003. – Vol. |
||
|
Gastroenterologist. – 1996. – Vol. 4, N 1. – P. 33–43. |
|
180. – P. 475–480. |
||
33. |
Hanyu F., Imaizumi T. Pancreas / Eds. Rinsho Geka |
54. |
Sadat U., Jah A., Huguet E. Mediastinal extension of |
||
|
gaku 3, Shoukakigekagaku. – Tokyo: Asakura, 1999. – |
|
a complicated pancreatic pseudocysts: a case report and |
||
|
P. 389–432. |
|
|
|
literature review // J. Med. Case Rep. – 2007. – Vol. |
34. |
Hartel M., Tempia-Caliera A.A., |
Wente |
M.N. et |
|
25, N 1. – P. 12. |
|
al. Evidence-based surgery in chronic pancreatitis // |
55. |
Sakai H., Urasawa K., Oyama N., Kitabatake A. |
||
|
Langenbecks Arch. Surg. – 2003. – Vol. 388, N 3. – P. |
|
Successful covering of a hepatic artery aneurysm with |
||
|
132–139. |
|
|
|
a coronary stent graft // Cardiovasc. Interv. Radiol. – |
35. |
Ido K., Isobe K., Kimura K. et al. Case of hemorrhagic |
|
2004. – Vol. 27. – P. 274 – 277. |
||
|
pancreatic pseudocyst in which ultrasound imaging was |
56. |
Sand J., Nordback I. The differentiation between |
||
|
useful // J. Med. Ultrasonics. – 2004. – Vol. 31. – |
|
pancreatic neoplastic cysts and pancreatic pseudocysts // |
||
|
P. 41–45. |
|
|
|
Scand. J. Surg. – 2005. – Vol. 94, N 2. – P. 161–164. |
36. |
Indinnimeo M., Cicchini C., Stazi A. et al. Duodenal |
57. |
Scarpelli D.G. The pancreas. Pathology / Eds. E. Rubin, |
||
|
pancreatic heterotopy diagnosed by magnetic resonance |
|
J.L. Faber. – Philadelphia: Lippincott, 1988. |
||
|
cholangiopancreatography: report of a case // Surg. |
58. |
Seriki D.M., Abidia A., Butterfield J.S. et al. |
||
|
Today. – 2001. – Vol. 31. – P. 928–931. |
|
|
Endovascular stent graft: treatment of pseudoaneurysm |
|
37. |
Irie H., Honda H., Kuroiwa T. et al. MRI of groove |
|
of the superior mesenteric artery // Cardiovasc. Interv. |
||
|
pancreatitis // J. Comput. Assist. Tomogr. – 1998. – |
|
Radiol. – 2004. – Vol. 27. – P. 271–273. |
||
|
Vol. 22. – P. 651–655. |
|
|
59. |
Shima W., Fegger R. Evaluation of focal pancreatic |
38. |
Jibiki M., Inoue Y., Iwai T. et al. Treatment of three |
|
masses: comparison of mangafodipirenhanced MR imaging |
||
|
pancreaticoduodenal artery aneurysms associated with |
|
and contrast-enhanced helical CT // Eur. Radiol. – |
||
|
Intern. Med. – 1984. – Vol. 29. – P. 271–300.Вести62. Srinivas M., Kataria R., Bhatnagar V. et al. Intra- |
||||
|
coeliac artery occlusion and splenic artery aneurysm: a |
|
2002. – Vol. 12. – P. 2998–3008. |
||
|
case report and review of the literature // Eur. J. Vasc. |
60. |
Singh G., Lobo D.R.N., Jindal A. et al. Splenic arterial |
||
|
Endovasc. Surg. – 2005. – Vol. 29, N 2. – P. 213–217. |
|
hemorrhage in pancreatitis: report of three cases // Surg. |
||
39. |
Kaman L., Sanyal S., Menakuru S.R. et al. Pseudo |
|
Today. – 1994. – Vol. 24. – P. 752–755. |
||
|
aneurysm of the pancreaticoduodenal artery, a rare cause |
61. |
Skandalakis J.E., Grey S.W. Embriology for surgeons: |
||
|
|
- |
|
the embryological bases for treatment of congenitial |
|
|
of hemosuccus pancreaticus: report of a case // Surg. |
|
|||
|
Today. – 2004. – Vol. 34, N 2. – P. 181–184. |
|
|
anomalies. – 2nd ed. – Baltimore: Williams Wilkins, |
|
40. |
Kanc M.G., Krejs G.J. Pancreatic pseudocyst // Adv. |
|
1994. – P. 366–387. |
||
41. |
Kemmeter P., Bonnell B., VanderKolk W. et al. |
|
pancreatic splenic artery pseudoaneurysm. A rare |
||
|
Percutaneous thrombin injectionМof splanchnic artery |
|
complication of chronic calcic pancreatitis // Pediatr. |
||
|
aneurysms: two case reports // J. Vasc. Interv. Radiol. – |
|
Surg. Int. – 1998. – Vol. 13. – P. 171–174. |
||
|
2000. – Vol. 11, N 4. – P. 469–472. |
|
|
63. |
Sultan S., Molloy M., Evoy D. et al. Endovascular |
42. |
Lagana D., Carrafiello G., Mangini M. et al. Multimodal |
|
treatment of a pancreaticoduodenal aneurysm: a clinical |
||
|
approach to endovascular treatment of visceral artery |
|
dilemma // J. Endovasc. Ther. – 2002. – Vol. 9, N 2. – |
||
|
aneurysms and pseudoaneurysms // Eur. J. Radiol. – |
|
P. 225–228. |
||
|
2006. – Vol. 59, N 1. – P. 104–111. |
|
|
64. |
Teich N., Ockenga J., Keim V. et al. Genetic risk |
43. |
Lepanto L., Arzoumanian Y., Gianfelice D. et al. Heliac |
|
factors in chronic pancreatitis // J. Gastroenterol. – |
||
|
CT with CT angiography in assessing periampullary |
|
2002. – Vol. 37, N 1. – P. 1–9. |
||
|
neoplasms: identification of vascular invasion // |
65. |
The Pancreas / Eds. H.G. Beger et al. – Vol. 1. – |
||
|
Radiology. – 2002. – Vol. 222. – P. 347–352. |
|
|
Oxford: Blackwell science Ltd., 1998. – 885 p. |
|
44. |
Lin Y., Tamakoshi A., Matsuno S. et al. Nationwide |
66. |
Tio T.L., Luiken G.J., Tytgat G.N. Endosonography of |
||
|
epidemiological Survey of chronic pancreatits in Japan // |
|
groove pancreatitis // Endoscopy. – 1991. – Vol. 23. – |
||
|
J. Gastroenterol. – 2000. – Vol. 35. – P. 136–141. |
|
P. 291–293. |
||
45. |
Ly J.N., Miller F.H. MR imaging |
of the |
pancreas: |
67. |
Urakami A., Tsunoda T., Kubozoe T. et al. Rupture of |
|
a practical approach // Radiol. Clin. North Am. – |
|
a bleeding pancreatic pseudocyst into the stomach // |
||
|
2002. – Vol. 40. – P. 1289–1306. |
|
|
|
J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. – 2002. – Vol. 9. – |
46. |
Manferdi R., Brizi M.G., Masselli G. et al. Imaging |
|
P. 383–385. |
||
|
of chronic pancreatitis // Rays. – |
2001. – |
Vol. 26, |
68. |
Vulierme M.P., Vilgrain V., Flejou J.F. et al. Cystic |
|
N 2. – P. 143–149. |
|
|
|
dystrophy of the duodenal wall in the heterotopic pancre- |
47. |
Matos C., Cappeliez O., Winant C. et al. MR imaging |
|
as: radiopathological correlations // J. Comput. Assist. |
||
|
of the pancreas: a pictorial tour. // Radiographics. – |
|
Tomogr. – 2000. – Vol. 24. – P. 635–643. |
||
|
2002. – Vol. 22, N 1. – P. 2. |
|
|
69. |
Warshaw A.L. Pancreatic cysts and pseudocysts: new |
48. |
Mihara Y., Kubota K., Nemoto T. et al. Successful |
|
rules for a. new game // Br. J. Surg. – 1989. – |
||
|
treatment for rupture of pancreaticoduodenal artery |
|
Vol. 76. – P. 533–534. |
||
|
aneurysms: two case reports // Hepatogastroenterology. |
70. |
Yin W.Y. The role of surgery in pancreatic pseudo- |
||
|
– 2005. – Vol. 52. – P. 264–269. |
|
|
|
cysts // Hepatogastroenterology. – 2005. – Vol. 52. – |
49. |
Nemes R., Geprgescu I., Margaritescu D. et al. The |
|
P. 1266–1273. |
||
|
pancreatic pseudocyst – late complication of the severe |
|
|
||
|
acute pancreatitis. Therapeutic options // Chirurgia |
|
|
||
|
(Bucur). – 2006. – Vol. 101, N 3. – P. 259–265. |
|
|
57
Оригинальные исследования |
2, 2009 |
УДК 616.33/.34-009/.1-085
Оригинальный отечественный пробиотик аципол: молекулярно-биологические и метаболические характеристики
Н.Ю. Ивашкина1, С.Г. Ботина2
(1Московский государственный медико-стоматологический университет, 2Государственный научно-исследовательский институт «Генетика»)
Original Russian probiotic Acipol: molecular-biologic and metabolic characteristics
N.Yu. Ivashkina, S.G. Botina
|
|
Вести |
|
|
|||
Цель исследования. Изучить молекулярно-био- |
Aim of investigation. To study molecular-biologic |
||||||
логические и метаболические свойства препарата |
and metabolic properties of agent «Acipol» with account |
||||||
«Аципол» с учетом современных требований, предъ- |
to modern requirements to probiotic drugs. |
|
|
||||
являемых к пробиотическим средствам. |
- |
|
Materials and methods. To study quality proper- |
||||
|
|
|
1 |
2 |
|||
Материалиметоды.Дляизучениякачественных |
ties of Acipol investigation of strains of the agent by |
||||||
свойств аципола проведено исследование штаммов |
polymerase chain reaction (PCR) of DNA amplifica- |
||||||
препарата с помощью полимеразной цепной реак- |
tion and sequenation of 16S RNA gene of NK , NK , |
||||||
ции (ПЦР) амплификации ДНК и секвенирования |
NK5, NK12 strains of L. acidophilus was carried out. At |
||||||
гена 16S РНК штаммов L. acidophilusМNK , NK |
, NK |
, |
ultracentrifugation of bacterial cells with further elec- |
||||
|
1 |
2 |
5 |
|
|
|
|
NK12. Отсутствие мобильной геномной информации |
trophoretic separation and visualization of extrachro- |
||||||
установлено при ультрацентрифугировании кле- |
mosomal fraction in agarose gel absence of mobile |
||||||
ток бактерий с дальнейшим электрофоретическим |
genomic information was found. Metabolic properties of |
||||||
разделением и визуализацией экстрахромосомной |
Acipol strains were studied by standard biochemical and |
||||||
фракции в агарозном геле. Метаболические свойст- |
microbiologic procedures. |
|
|
||||
ва штаммов аципола изучены с помощью стандарт- |
Results. The original study proved specific belong- |
||||||
ных биохимических и микробиологических методик. |
ing of NK1, NK2, NK5, NK12 strains of L. acidophilus at |
||||||
Результаты. Проведенное исследование дока- |
genetic level, ability of strains to synthesize exopolysac- |
||||||
зало видовую принадлежность штаммов L. acidophi- |
charides, to tolerate low pH values and influence of bile. |
||||||
lus NK1, NK2, NK5, NK12 на генетическом уровне, |
Properties of lactobacilli to produce vitamins, to sup- |
||||||
установлена способность штаммов синтезировать |
press proliferation of saprophytic microflora, as well as |
||||||
экзополисахариды, переносить низкие значения pH |
metronidazole-resistance properties were revealed. |
|
|||||
и воздействие желчи, выявлены свойства лакто- |
Conclusions. The complex assessment of Acipol |
||||||
бактерий продуцировать витамины, подавлять рост |
testifies to its conformity to the up-to-date requirements |
||||||
условно-патогенной микрофлоры, проявлять устой- |
to biological preparations. |
|
|
||||
чивость к метронидазолу. |
|
|
|
|
Key words: acipol, biological preparations, PCR, |
||
Выводы. Комплексная оценка аципола свиде- |
specific belonging, metabolic properties. |
|
|
||||
тельствует о его соответствии современным требо- |
|
|
|
||||
ваниям, предъявляемым к биопрепаратам. |
|
|
|
|
|
|
Ключевые слова: аципол, биопрепараты, ПЦР, видовая принадлежность, метаболические свойства.
58
|
2, 2009 |
|
|
Оригинальные исследования |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
дним из наиболее активно развивающихся |
стерильных сред культивирования и исключение |
|||||
|
направлений в медицине является при- |
возможности контаминации). |
|
||||
Оменение пробиотических препаратов [6, |
Цель исследования состояла в уточнении соот- |
||||||
8, 11], представляющих сегодня особую область |
ветствия качественных |
параметров |
препарата |
||||
научных и клинических исследований [5, 12– |
«Аципол» современным требованиям, предъяв- |
||||||
14]. |
|
|
|
ляемым к пробиотическим средствам. |
|
||
Термин «пробиотики» появился в 1965 г., |
|
|
|
||||
когда |
под ними понимались |
вещества, секрети- |
Материал и методы исследования |
||||
руемые одними живыми микроорганизмами и |
|||||||
|
|
|
|||||
усиливающие рост других микроорганизмов [11]. |
Объектами исследования служили 4 штамма |
||||||
Согласно современному определению, пробиотики |
(NK1, NK2, NK5, NK12) молочнокислых лактоба- |
||||||
– это живые микроорганизмы, которые при упот- |
цилл, входящих в состав пробиотического препа- |
||||||
реблении в достаточном количестве оказывают |
рата «Аципол». Для выделения чистых культур |
||||||
позитивное воздействие на здоровье [8]. |
и их культивирования стерильным наконечником |
||||||
На данный момент пробиотики представляют |
или шпателем отбирали 50 мкл образца продукта, |
||||||
собой неуклонно увеличивающийся рынок сбыта |
который переносили в пробирку с 1 мл физиологи- |
||||||
кисломолочных продуктов. Во Франции в 1997 г. |
ческого раствора и тщательно ресуспензировали. |
||||||
рынок пробиотических йогуртов составил 219 млн |
Затем из этого раствора делали серию разведе- |
||||||
долларов [15]. В первой половине 2006 г. объем |
ний, после чего производили посев материала раз- |
||||||
рынка пробиотических йогуртов и кисломолоч- |
ного разведения на агаризованную питательную |
||||||
ных напитков в Великобритании составил 307 млн |
среду MRS. Чашки инкубировали в термостате |
||||||
фунтов стерлингов [2]. В России потребителю |
при температуре 42 °С в течение 48 ч. Отдельные |
||||||
также предлагается широкий выбор продуктов |
колонии применялись для получения чистой куль- |
||||||
кисломолочного брожения, при этом врачу неред- |
туры и дальнейшего исследования. Для выделе- |
||||||
ко приходится решать сложную задачу выбора |
ния препаратов ДНК использовали набор Wizard® |
||||||
того или иного пробиотического препарата. |
Genomic DNA Purification Kit фирмы «Promega» |
||||||
К настоящему времени сформулированы основ- |
согласно протоколу изготовителя. Полимеразную |
||||||
|
|
|
Вести |
|
|
||
ные требования, направленные на выбор штаммов |
цепную реакц ю (ПЦР) проводили с применени- |
||||||
для лекарственных препаратов, и доказательства |
м реак ивов фирмы «АмплиСенс» и праймеров, |
||||||
их клинической эффективности [1, 7–9]. По |
интезированных с помощью синтезатора ДНК |
||||||
|
|
|
- |
ASM-800 фирмы «Biosset». Использовались прай- |
|||
результатам работы круглых столов с участи м |
|||||||
ведущих экспертов были уточнены критерии для |
меры 8f: 5′-aga gtt tga tcc tgg ctc ag– 3′ и 1492r: |
||||||
микроорганизмов, входящих в состав пробиотика. |
5′-ggt tac ctt gtt acg act t– 3′ [16], позволяющие |
||||||
Это фенотипическая и генетическая характери- |
осуществлять амплификацию гена 16S рРНК. |
||||||
стики [3, 10], сведения о наличииМили отсутствии |
Температурно-временной профиль ПЦР был сле- |
||||||
мобильной генетической информации, о способ- |
дующим: 94° 5′ [94° 30′′ (денатурация ДНК); 55° |
||||||
ности подавлять условно-патогенную флору, об |
30′′ (отжиг праймеров); 72° 1′ (элонгация)] 35 |
||||||
антагонистической активности и чувствительности |
циклов; 72° 4′ (окончательная полимеризация); |
||||||
к антибиотикам. Такие характеристики штаммов, |
4° – хранение. Амплификацию проводили в тер- |
||||||
как устойчивость в кислой среде, к солям желчи, |
моциклерах «Терцик» фирмы «ДНК-Технология» |
||||||
полученные в ходе исследований in vitro, должны |
и «Master Cycler Gradient» фирмы «Eppendorf». |
||||||
подтвердить целесообразность дальнейшей разра- |
Продукты ПЦР анализировали при помощи |
||||||
ботки пробиотического препарата. Эффективность |
электрофореза в камере SE-2 фирмы «Helikon» |
||||||
применения необходимо доказать в ряде много- |
в 1% агарозном ТБЕ-геле фирмы «АмплиСенс». |
||||||
центровых сравнительных клинических исследо- |
Выделение и очистку амплифицированной ДНК |
||||||
ваний, по окончании которых можно сделать чет- |
проводили с использованием набора GenElute |
||||||
кие выводы о схемах лечения этим препаратом. |
Minus EtBr Spin Columns фирмы «Sigma» соглас- |
||||||
При обсуждении вопросов использования про- |
но протоколу изготовителя. Нуклеотидную после- |
||||||
биотиков нельзя упускать такую важную область, |
довательность генов 16S рРНК исследовали по |
||||||
как процесс их производства. Современные мето- |
методу Сэнгера. Секвенирование осуществляли |
||||||
дики (лиофилизация, микрокапсулирование, соз- |
с применением праймера 8f, позволяющего опре- |
||||||
дание |
таблетированных или |
капсулированных |
делять нуклеотидную последовательность про- |
||||
лекарственных форм) призваны обеспечить жиз- |
ксимального участка гена 16S рРНК, при помо- |
||||||
неспособность бактериальных клеток во время |
щи автоматического анализатора ДНК CEQ8000 |
||||||
всего срока хранения пробиотика и биодоступ- |
Beckman-Coulter фирмы «Beckman». |
|
|||||
ность при применении. О безопасности препарата |
Для анализа нуклеотидных последователь- |
||||||
следует судить по результатам исследований in |
ностей генов 16S рРНК использовали програм- |
||||||
vitro и клинических испытаний, а также с учетом |
мы Blast в Internet [http://www.ncbi.nlm.nih. |
||||||
условий производства (например, использование |
gov/blast]; для анализа |
результатов |
секвениро- |
59
Оригинальные исследования |
|
2, 2009 |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Таблица 1 |
|
Уровень гомологии с последовательностью исследуемых штаммов препарата «Аципол» |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
Номер рефе- |
|
|
Уровень гомологии, |
|
Штамм |
рентной после- |
Описание последовательности |
|||
% |
|||||
|
довательности |
|
|
||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
||
NK1 |
AY763430.1 |
L. acidophilus strain LH5 16S ribosomal RNA gene, |
99 |
||
NK2 |
EF533992.1 |
partial sequence |
|||
L. acidophilus strain IDCC 3301 16S ribosomal RNA |
100 |
||||
NK5 |
AB008203.1 |
gene, complete sequence |
|||
L. acidophilus gene for 16S rRNA, partial sequence, |
99 |
||||
NK12 |
AF429494.1 |
strain: YIT 0070 (= ATCC 4356) |
|||
L. acidophilus ATCC 521 16S ribosomal RNA gene, |
98 |
||||
|
|
partial sequence |
|||
|
|
|
|
|
вания – компьютерную программу Vector NTI: |
мин. Для обработки данных использовалась ком- |
||
ContigExpress. Для сравнения последовательно- |
пьютерная система «Empower Pro». |
||
стей генов рибосомальных РНК у ацидофильных |
Способность штаммов ферментировать угле- |
||
лактобацилл нами были использованы последо- |
воды тестировали в среде МRS с анализируемым |
||
вательности этого гена, характерные для разных |
углеводом (лактоза, галактоза) в концентрации |
||
видов Lactobacillus acidophilus, депонирован- |
10 г/л и красителем бромкрезоловым пурпурным |
||
ные в GenBank NCBI (данные представлены в |
в концентрации 32 мг/л. Об утилизации сахара |
||
табл. 1). |
судили по приобретению колониями и питатель- |
||
Способность штаммов синтезировать экзополи- |
ной средой желтой окраски. |
||
сахариды оценивали при росте бактерий на среде |
Свойство штаммов подавлять рост условно- |
||
следующего состава: сухое молоко с пониженным |
патогенной |
микрофлоры |
исследовали методом |
содержанием жира – 10%, дрожжевой экстракт |
нанесен я капли инокулята изучаемых штам- |
||
– 0,5%, агар – 1,5%, сахароза – 1%, рутениевый |
мов, нанесен я фильтров, смоченных в суспен- |
||
красный – 80 мг/л [4]. |
зии кле ок, |
внесения |
клеточной суспензии в |
О способности бактерий переносить низкие зна- |
лунки. В качестве тесторных культур использова- |
||
чения pH судили по росту на среде MRS pH 2,0 |
ли штаммы условно-патогенных микроорганизмов |
свежих ночных культур бактерий, выращенных в |
Micrococcus luteus В5389, Enterococcus faecalis |
|||
жидкой среде MRS при pH 6,2. Титры культур |
В4610, Bacillus subtilis В4537, Staphilococcus |
|||
|
|
Вести |
||
измеряли через 30, 60, 90 и 120 мин после посе- |
aureus В6646, Pseudomonas aeruginosa PAOI, пре- |
|||
|
|
- |
доставленных ГосНИИ «Генетика». Устойчивость |
|
ва. Контролем в опыте служили клетки бактерий, |
||||
внесенные в среду MRS с pHМ6,2, титр которых |
к антибиотикам тестировали методом определения |
|||
определяли через 120 мин после внесения. |
максимальной ингибирующей концентрации при |
|||
Устойчивость к желчи тестировали в присут- |
культивировании штаммов в среде с присутствием |
|||
ствии 20% и 40% желчи в среде культивирования |
ванкомицина и метронидазола. |
|||
бактерий. |
|
|
|
|
Способность |
бактерий |
продуцировать вита- |
Результаты исследования |
|
мины определяли методом |
высокоэффективной |
|||
и их обсуждение |
||||
жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с исполь- |
||||
|
||||
зованием колонки «Эликсис-1» С18-150×4,6 мм, |
Штаммы L. acidophilus NK1, NK2, NK5, NK12 |
|||
5,0 мм. Температура колонки – 50 °С, инжек- |
были выделены от здоровых лиц в ходе скрининго- |
|||
ция – 10 мкл, λ – 210 нм; градиент: А – аце- |
вых исследований в 1955 г. в Институте молочной |
|||
тонитрил, В – 0,1% трифторуксусная кислота, |
промышленности. Идентификация бактерий про- |
|||
С – метанол. Данные обрабатывали с помощью |
водилась с помощью фенотипических методов. |
|||
компьютерной системы «Empower Pro». |
В настоящее время видовая принадлежность |
|||
Количественное определение синтезируемых |
бактерий определяется секвенированием последо- |
|||
биогенных аминов проводили путем ВЭЖХ на |
вательности малой субчастицы рибосом 16S РНК, |
|||
хроматографе |
«Alliance» |
(Separations Module |
порядок нуклеотидов в которой идентичен для |
|
Waters 2695, Photodiode Array detector Waters |
представителей одного вида. Полученная после- |
|||
2996). Дериватизация исследуемых образцов, |
довательность сравнивается с уже известными, и |
|||
содержащих биогенные амины, осуществлялась |
высокий уровень гомологии (выше 97%) является |
|||
дансилхлоридом. Полученный раствор в количе- |
доказательным для идентификации. Проведенное |
|||
стве 5 мкл наносили на колонку С18 250×4,0 мм, |
нами секвенирование гена 16S РНК штаммов |
|||
5,0 мм и анализировали при длине волны λ=254 нм, |
L. acidophilus NK1, NK2, NK5, NK12 доказало их |
|||
t=40 °С. Тестировали способность бактерий проду- |
принадлежность к виду Lactobacillus acidophilus |
|||
цировать путресцин, кадаверин, гистамин, тира- |
(табл. 2) на генетическом уровне. |
60