- •Список сокращений
- •Оглавление
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 29
- •Глава 3. Получение криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Оценка эффективности ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток эмбриональной печени в коррекции острого токсического повреждения печени 54
- •Глава 5. Структурная оценка влияния ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени 69
- •Введение
- •Применение клеток печени для коррекции острой печеночной недостаточности (обзор литературы)
- •1.1 Способы клеточной метаболической поддержки в коррекции печеночной недостаточности
- •1.2. Способы коррекции острой печеночной недостаточности в эксперименте
- •1.2.1. Моделирование острой печеночной недостаточности
- •1.2.2. Механизмы острого токсического повреждения печени при введении сСl4
- •1.2.3.Критерии эффективности метаболической клеточной коррекции опн
- •1.3. Трансплантация гепатоцитов в коррекции острой печеночной недостаточности
- •1.3.1. Способы приготовления гепатоцитов для трансплантации
- •1.3.2. Криоконсервация
- •1.3.3.Приготовление препарата для ксенотрансплантации
- •1.3.4. Способы ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2.2.1. Культура клеток печени
- •2.2.2.2. Приготовление ткани плаценты для ксенотрансплантации
- •2.2.2.3.Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение массы печени
- •2.2.3.2.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3.Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.4.Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология получения культуры клеток печени
- •3.1.1 Дезагрегация печеночной ткани
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Очистка и культивирование эмбриональных клеток свиной печени
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.2.2. Сравнительная оценка эффективности криоконсервации культуры эмбриональных клеток свиной печени
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Оценка эффективности ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток эмбриональной печени в коррекции острого токсического повреждения печени
- •4.1.Течение острого токсического повреждения печени на фоне метаболической коррекции
- •4.1.1. Ход эксперимента
- •4.1.2. Летальность в экспериментальных группах
- •4.2. Динамика биохимических показателей при остром токсическом повреждении печени под влиянием ксенотрансплантации криоконсер-вированной культуры эмбриональных клеток печени
- •4.2.1. Уровень альбумина в сыворотке крови
- •4.2.2. Уровень холестерина
- •4.2.3. Уровень билирубина
- •4.2.4. Активность индикаторных ферментов
- •4.3. Динамические изменения некоторых показателей системы гемостаза
- •4.3.1. Уровень фибриногена в плазме крови
- •4.3.2. Вязкость крови
- •4.3.3. Гематокрит
- •4.3.4. Агрегация тромбоцитов
- •Глава 5. Структурная оценка влияния ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени
- •5.1. Морфологическое исследование зоны трансплантации
- •5.2. Макроскопическая характеристика печени животных
- •5.3. Характеристика строения печени при световой микроскопии
- •5.4. Ультраструктура гепатоцитов при остром токсическом повреждении печени, корригированном ксенотрансплантацией культуры эмбриональных клеток печени
- •5.5. Содержание днк в ядрах гепатоцитов
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
4.2.4. Активность индикаторных ферментов
Результаты этой части исследования свидетельствовали о разной активности цитолитических процессов в печени животных основной и контрольных групп. На 2-е сутки исследования активность обоих ферментов в крови была существенно повышена (р£0,004 по сравнению с нормой) без значимых различий между группами. В дальнейшем уровень выбранных маркеров цитолиза в основной группе отчетливо снижался (р£0,002 по сравнению с определением на 2-е сутки), оставаясь существенно выше нормы к четвертым суткам (р=0,001), и достигая нормальных (АЛТ) или стабильных гипернормальных (АСТ; р=0,006) величин к шестым суткам. В контроле отмечена противоположная динамика: активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови существенно увеличивалась (р£0,004 по сравнению с предыдущим сроком исследования) к 4 суткам эксперимента.
Представленные факты позволили нам сделать заключение о благотворном воздействии ККП, как фактора, лимитирующего цитолиз при ОТП.
4.3. Динамические изменения некоторых показателей системы гемостаза
При выборе анализированных показателей исходили из известных данных о влиянии ОТП на систему гемостаза. В связи с ожидаемой гибелью животных 2 и 3 групп сравнительное исследование оказалось возможным лишь до 4 суток эксперимента; на 6-е сутки судили об изменениях параметра лишь в основной группе. Рассмотрим полученные данные (табл. 4.5).
4.3.1. Уровень фибриногена в плазме крови
Уровень фибриногена на 2-е сутки эксперимента существенно отличался от нормы и между группами. Если у крыс основной группы манифестировала гиперфибриногенемия (р=0,002 по сравнению с нормой), то в группах 2 и 3 обнаружены субнормальные концентрации. К четвертым суткам выявлено достоверное значительное повышение этого показателя в основной группе (р£0,003 по сравнению с нормой и предыдущим значением), то в группах 2 и 3, напротив, уровень фибриногена в крови существенно снижался (р£0,004 по сравнению с нормой; р=0,01 и 0,06 по сравнению с предыдущими показателями соответственно). К окончанию эксперимента уровень фибриногена у крыс основной группы понижался (р=0,002 по сравнению с 4 сутками) до нормы..
Таким образом, ККП на фоне ОТП приводила в нашем исследовании к повышению уровня фибриногена с его последующей нормализацией на фоне прогрессирующего падения концентрации в группах контроля.
4.3.2. Вязкость крови
В группах 1 и 2 документировано достоверное повышение вязкости крови ко вторым суткам эксперимента (р£0,02 по сравнению с нормой); у животных
группы 3 в этом же временном интервале была тенденция к снижению вязкости. На протяжении следующих суток эксперимента у крыс основной группы отмечена постепенная нормализация этого показателя (к 6 суткам различий с нормой не было), тогда как в группах 2 и 3 выявлено существенное снижение вязкости крови (р£0,04 по сравнению с нормой) к четвертым суткам.
Здесь также получено подтверждение корригирующего воздействия ККП на гомеостатические нарушения, вызванные ОТП.
4.3.3. Гематокрит
Во всех группах гематокрит не имел существенных отличий от нормального показателя на 2-е сутки эксперимента. В дальнейшем гематокрит у крыс основной группы повышался до максимума (4-е сутки, р£0,003 по сравнению с нормой и предыдущим значением) и несколько снижался к шестым суткам, достоверно превышая нормальную величину (р=0,03). В группах 2-3 в изменения были противоположными: отмечено существенное снижение гематокрита к четвертым суткам (р£0,007).