2 курс / Нормальная физиология / Физиология бактерий

11

Метод Коха/метод серийных разведений

Готовят 10-кратные разведения исследуемого материала в стерильном физиологическом растворе.

Отбирают по 1 мл из каждого разведения, которые вносят в пробирки с расплавленным и охлажденным до 45град агаром.

После перемешивания содержимое пробирки выливают в стерильную чашку Петри.

12

Техника посева петлей по Голду/вариант метода штриха

Чашку Петри делят на 4-5 радиальных секторов. Взяв материал стерильной петлей, делают посев одной

петлей на всех секторах:

13

Техника посева тампоном

Проводят тампоном по диагонали дорожку, затем петлей через дорожку делают засев по обе стороны от нее.

Другой способ: тампон вносят к краю агара и круговыми движениями втирают материал с тампона.

14

Атмосфера культивирования

При использовании кислорода образуется две токсичные молекулы пероксида водорода, а также свободные радикалы. Следовательно, бактериям требуется два фермента для утилизации этих продуктов.

Первый – супероксиддисмутаза, который катализирует реакцию:

2О2 + 2Н+ = Н2О2 +

и второй фермент – каталаза, который катализирует реакцию:

2Н2O2 = 2H2O + О2

Отношение к кислороду – очень важный критерий для классификации бактерий и имеет большое практическое значение, потому что образцы биологического материала, полученные от пациентов, должны быть посеяны и выращиваться в определенных условиях.

Некоторые бактерии, например, M. tuberculosis – облигатный аэроб. Это значит, что им требуется кислород, чтобы расти, потому что их система генерации АТФ зависит от кислорода и они используют окислительный метаболизм (о нем чуть позже).

Другие, например, E. coli – факультативные анаэробы. Они утилизируют кислород для генерации энергии посредством дыхания, если он есть в окружающей среде. Также они могут использовать ферментативный способ синтеза АТФ, если кислорода в окружающей среде недостаточно.

15

Третья группа бактерий состоит из облигатных анаэробов, (например Cl. Tetani, которые не могут расти в присутствии кислорода из-за отсутствия или супероксиддисмутазы, или каталазы, или обоих ферментов сразу.

Облигатные анаэробы различаются по своему отношению к кислороду: некоторый могут выжить в его атмосфере, но не могут размножаться и расти, в то время как других кислород быстро убивает.

Обобщим на схеме:

Типы дыхания бактерий

			Факультативные		Облигатные
	Облигатные аэробы				анаэробы
			анаэробы
			Приспособлены к
			существованию в
	строгие	микроаэрофилы	кислородной и	строгие	аэротолерантные
			бескислородной среде
	нуждаются в	нуждаются в		погибают в	не используют
	высокой	пониженной		атмосфере	кислород в
	концентрации	концентрации		кислорода	метаболизме, но
	кислорода для	кислорода			выживают

жизнедеятельности

16

?БАКТЕРИЯ, ТЫ ОТКУДА?

Как узнать, к какой группе относится бактерия, не изучая ее ферментативный спектр? По характеру роста на жидких питательных средах!

Характер роста на жидких питательных средах отличается у аэробных и анаэробных бактерий:

Облигатные аэробы в основном собираются в верхней части пробирки, чтобы поглощать максимальное количество кислорода. Особый рост в этой группе бактерий: они растут в виде пленки на поверхности жидкой питательной среды из-за особого строения клеточной стенки.

Облигатные анаэробы собираются в нижней части, чтобы избежать кислорода (либо вообще не дают роста).

Факультативные анаэробы чаще всего равномерно распределяются по пробирке.

17

Температура культивирования

Отношение к t

Психрофилы	Мезофилы	Термофилы
живут и размножаются при	температурный диапазон роста	способны расти при
пониженных температурах	+10-+45оС	повышенных
(-10 – -20оС)	Оптимальная температура для их	температурах (42-50оС)
	культивирования 25-37оС

В общем, ПСИХИ любят холод

Для поддержания определенной температуры во время культивирования используют специальные приборы – термостаты.

Время культивирования

Время культивирования: зависит от времени генерации. Большинство бактерий культивируют для получения видимого роста в течение 18-48 часов.

Для культивирования возбудителей коклюша требуется 5 суток, для культивирования M. tuberculosis – 3-4 недели.

18

Освещение

Для выращивания фототрофных микроорганизмов необходим свет.

Некоторые условно-патогенные микобактерии в зависимости от освещенности образуют пигмент, что используется при их идентификации.

19

ВТОРОЙ ЭТАП БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение культуральных свойств бактерий

Культуральные свойства – это характерные особенности роста бактерий на плотных и жидких

питательных средах.

Характер роста бактерий

На жидких питательных средах o диффузное помутнение

o придонный и пристеночный рост в прозрачной среде

oповерхностная пленка

На полужидких средах

oдиффузный рост вокруг посева уколом (подвижные бактерии)

o рост по ходу укола (неподвижные бактерии)

oразрыв среды или образование пузырьков газа

На плотных средах

oрост отдельными колониями

o рост сплошным налетом

20

Рост

сплошным

налетом

Рост

отдельными

колониями