Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Бласттрансформация лимфоцитов - фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.

Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.

Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл содержался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.

Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласттрансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.

Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.

Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного при контакте с аллергеном (по Шульцу-Дейлу)

Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки. Препарат длинной 3-4см готовят из проксимального отдела тощей кишки морской свинки, сенсибилизированной лошадиной сывороткой. С обоих концов на кишку накладывают лигатуру, одну из которых закрепляют на стеклянном крючке, опущенном в сосуд, заполненный раствором Тироде. Другую лигатуру соединяют с миографом для записи сокращений кишки на кимографе. Включают кимограф и в раствор Тироде добавляют сыворотку крови собаки (неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений отрезка кишки. Раствор Тироде заменяют свежим, вводят в него 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический аллерген), отмечают резкое сокращение отрезка кишки.

Реакция Овери.

Морскую свинку наркотизируют, фиксируют на препаровальном столике на спине, тщательно выстригают шерсть на животе. Пассивную сенсибилизацию кожи осуществляют путем внутрикожного введения кроличьей антисыворотки по 0,1 мл в разведениях 1:1; 1:10; 1:100 с интервалом в 1 см по средней линии живота. Для контроля отдельно в ту же область вводят 0,1 мл физиологического раствора. Через 1-2 часа после этого животному вводят внутривенно 1 мл лошадиной сыворотки (антиген) вместе с 1 мл 2% раствора синего Эванса. Спустя 10-20 мин после инъекции иссекают кожу на животе, на внутренней поверхности отмечают появление окрашенных в синий цвет пятен разной величины. Реакция считается положительной, если диаметр окрашенного пятна в месте инъекции сыворотки состав­ляет не менее 5 мм.

Стадии нарушения микроциркуляции при остром воспалении (опыт Конгейма)

Лягушку обездвиживают и фиксируют ее к дощечке на спине. Кожу и мышцы в нижней половине брюшной стенки справа разрезают ножницами, пинцетом ос­торожно захватывают петлю кишечника и растягивают брыжейку над круглым отверстием дощеч­ки. Петлю кишечника закрепляют булавками. Под малым увеличени­ем в брыжейке наблюдают кровоток. Через 5-10 мин в результате подсыхания в брыжейке развивается острый воспалитель­ный процесс, характеризующийся вначале артериальной гиперемией. Артериальная гиперемия через 30-40 мин после извлечения брыжейки сме­няется венозной гиперемией. Продолжают наблюдать прогрессирующее за­медление кровотока, которое переходит в стаз.

Прикрыв брыжейку, рассматривают ее при большом увеличении. В венах и капиллярах, в которых хорошо выражено пристеночное стояние лейкоцитов, они постепенно проникают сквозь сосудистую стенку, отделяются от нее, принимают амебовидную форму и оказываются за пределами сосуда (эмиграция лейкоцитов). В капиллярах удается также наблюдать и выход эритроцитов наружу (диапедез эритроцитов). В не­которых участках, в связи с разрывом сосудов, наблюдаются кровоизлияния с массовым выходом крови в окружающую ткань. В других участках можно обнаружить полную остановку движения крови - стаз.

Экспериментальное воспроизведение аморфного типа сладжа

Обездвиженную лягушку помещают на препаровальную дощечку, вскрывают грудную полость и обнажают сердце. Вскрывают брюшную полость и готовят препарат брыжейки тонкого кишечника. Под малым увеличением микроскопа наблюдают картину нормального кровотока. Затем в полость желудочка сердца медленно вводят 0,2— 0,3 мл раствора этилового спирта. В течение 20— 30 мин наблюдают за постепенным образованием в сосудах большого количества мелких агрегатов, похожих на гранулы, характерных для аморфного типа сладжа. Кровоток постепенно замедляется, развивается маятникообразное движение крови, стаз.

Экспериментальный кариес у крыс.

Для получения экспериментального кариеса крыс 20—30 дневного возраста переводят на кариесогенную сахарозо-казеиновую диетe. В различные сроки от 3 недель до 4 мес. животных декапитируют, выделяют нижние и верхние челюсти и готовят шлифы или полушлифы, которые окрашивают 2% раствором азотнокислого серебра.

Полученные препараты изучают и делают выводы..

Экспериментальный пародонтоз у крыс

Под бинокулярным микроскопом или лупой изучают скелетированные препараты нижней челюсти крыс с различными моделями экспериментального пародонтоза:

1. Спонтанный пародонтоз (старые животные, возраст более 24 мес).

2. Алиментарная модель пародонтоза (длительное содержание животных на мягкой пародонтозогенной диете).

3. Пародонтоз при гипокинезии (длительное,60 —100 суток, пребывание животных в условиях ограничения подвижности в специальных клетках).

Для контроля и сравнения состояния альвеолярных отростков используют скелетированные нижние челюсти молодых интактных крыс (контроль).

Сравнивают степень атрофии альвеолярных отростков.