Раздел 5. Инсулин в растворе

В настоящем разделе представлены биологические методы определения инсулина в надосадочной жидкости для лекарственных препаратов пролонгированного действия, представляющих собой аморфную или кристаллическую суспензию инсулина, а также их смесь, и содержащих не более 1,0 МЕ/мл инсулина в растворе.

Метод с использованием кроликов (метод А₁)

В основе метода определения инсулина в надосадочной жидкости лежит метод А со следующими изменениями:

1. В опыт берут 8 животных, которых распределяют на две равные группы способом случайного отбора.

2. Непосредственно перед экспериментом готовят рабочий раствор СО инсулина соответствующей видовой специфичности, используя в качестве растворителя раствор № 2. Концентрация рабочего раствора – 1,0 МЕ/мл.

3. Надосадочную жидкость ИП получают его центрифугированием в течение 10 мин при величине относительного центробежного ускорения (ОЦУ), равной 1500 g (примечание к разделу 6). Ожидаемая активность надосадочной жидкости – 1,0 МЕ/мл.

Первой группе подкожно вводят рабочий раствор СО инсулина в объеме 0,5 мл/кг, второй группе – такой же объем неразведенной надосадочной жидкости ИП. Взятие крови из краевой вены уха проводят, как описано в методе А.

Метод с использованием мышей (метод B₁)

В эксперимент берут 20 мышей. Животных распределяют на 2 равные группы способом случайного отбора.

Надосадочную жидкость ИП получают, как указано в методе А₁. Непосредственно перед опытом готовят рабочий раствор СО инсулина соответствующей видовой специфичности, используя в качестве растворителя раствор № 2 (примечание 3 к общей части). Концентрация рабочего раствора СО – 0,3 МЕ/мл.

Первой группе подкожно вводят рабочий раствор СО инсулина в объеме 0,1 мл/10 г, а второй группе – такой же объем неразведенной надосадочной жидкости ИП.

Возможны два варианта проведения опыта.

Вариант 1

Взятие крови из орбитального венозного синуса осуществляют два раза: непосредственно перед инъекцией и через (40  1) мин после нее, как описано в методе В.

Содержание инсулина в растворе (МЕ/мл) вычисляют по формуле:

,

где: Т – средний процент снижения концентрации глюкозы в группе, получившей надосадочную жидкость;

S – средний процент снижения концентрации глюкозы в группе, получившей рабочий раствор СО;

0,3 – количество МЕ в 1 мл рабочего раствора СО.

Вариант 2

Взятие крови из венозного орбитального синуса осуществляют однократно: через (40  1) мин после инъекции, как описано в методе В. Через 24 ч после первой постановки проводят перекрест.

Содержание инсулина в растворе (МЕ/мл) вычисляют по формуле:

,

где: S – средняя концентрация глюкозы (мг%) в группе, получившей рабочий раствор СО;

T – средняя концентрация глюкозы (мг%) в группе, получившей надосадочную жидкость;

0,3 – количество МЕ в 1 мл рабочего раствора СО.

Интерпретация результатов

ИП считают прошедшим испытание, если содержание инсулина в растворе не превышает 1,0 МЕ/мл.

Если содержание инсулина в растворе, полученное в результате испытания, составляет более 1,0 МЕ/мл, то для получения более точного результата следует провести дополнительный опыт по методу B₁ (вариант 2).

Примечания

1. Для лекарственных препаратов, в которых предусмотрено содержание более 1,0 МЕ/мл инсулина в растворе (смесь растворимого инсулина и суспензии), следует проводить определение биологической активности надосадочной жидкости согласно разделу 2 (метод B), а не определение инсулина в растворе.

2. Определение содержания инсулина в надосадочной жидкости лекарственных препаратов в картриджах для шприц-ручек, ввиду их малого объема, рекомендуется проводить методом с использованием мышей (метод B₁).