4 курс / Дерматовенерология / Клиническая_дерматология_и_венерология_2020_04

Эпидемиология

Epidemiology

Таблица 5. Динамика первичной заболеваемости БК и ПК, в том числе АД, детей в возрасте 15—17 лет в Удмуртской Республике в 2000—2018 гг.

Table 5. Dynamics of the primary incidence of SD and ST, including AD, among children aged 15—17 years in the Udmurt Republic in 2000—2018

			БК и ПК					АД
	Год	Число случаев		Темп	Динамика	Число случаев		Темп	Динамика
		на 1000 детей	Темп роста			на 1000 детей	Темп роста
				прироста	по отношению			прироста	по отношению
		аналогичного	(убыли), %			аналогичного	(убыли), %
		возраста		(убыли), %	к 2000 г.*	возраста		(убыли), %,	к 2000 г.*
	2000	74,3				3,4
	2001	72,8	97,98	–2,02	—2,02	3,9	114,71	+14,71	+14,71
	2004	112,4	151,28	+51,28	+51,28	5,7	146,15	+46,15	+67,65
	2005	109,8	97,69	–2,31	+47,78	5,4	94,74	–5,26	+58,82
	2006	110,0	100,18	+0,18	+48,05	9,5	175,93	+75,93	+179,41
	2007	107,7	97,9	–2,09	+44,95	6,6	69,47	–30,53	+94,12
	2008	109,0	101,2	+1,2	+46,7	7,7	116,67	+16,67	+126,47
	2009	111,4	102,2	+2,2	+49,9	6,4	83,12	–16,88	+88,24
	2010	104,2	93,53	–6,46	+40,24	6,6	103,13	+3,13	+94,12
	2011	108,1	103,74	+3,74	+45,49	5,1	77,27	–22,73	+50,0
	2012	104,1	96,29	–3,7	+40,11	4,4	86,27	–13,73	+29,41
	2013	94,9	91,16	–8,84	+27,73	7,0	159,09	+59,09	+105,88
	2014	95,0	100,1	+0,1	+27,86	4,6	65,71	–34,29	+33,29
	2015	82,58	86,93	–13,07	+11,14	4,5	97,83	–2,17	+32,35
	2016	99,4	120,4	–20,4	+33,8	4,02	89,3	–10,7	+18,2
	2017	95,0	95,6	–4,4	+27,9	3,5	87,3	–12,7	+3,2
	2018	91,7	96,5	–3,4	+23,4	3,1	87,7	–12,2	+0,6

Примечание. * — динамика интенсивного показателя.

тель первичной заболеваемости АД оказался более лабильным, максимальная убыль в 2014 г. составила 34,3%. Тенденция к снижению уровня первичной заболеваемости АД отмечена в периоды с 2007 по 2012 г. и с 2014 по 2018 г. По отношению к 2000 г. динамика показателя первичной заболеваемости БК и ПК в 2018 г. составила +23,4%, АД — +0,6%.

Заключение

В Удмуртской Республике с 2000 по 2018 г. выявлен рост заболеваемости БК и ПК, в том числе АД, в возрастной группе детей 15—17 лет. Уровень

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Н.И. Пенкина, М.А. Иванова Сбор и обработка материала — С.А. Вострикова

Статистическая обработка данных — Н.М. Попова, В.В. Люцко Написание текста — М.А. Иванова

Редактирование — М.А. Иванова

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

заболеваемости БК и ПК, а также АД характеризовался нестабильными показателями. Анализ официальных статистических форм заболеваемости, формируемых по обращаемости в медицинские организации, не отражает истинной картины распространенности БК и ПК, в том числе АД. Об этом свидетельствуют нестабильность и выраженные колебания темпов роста (убыли) интенсивных показателей общей и первичной заболеваемости, а также доли АД в структуре БК и ПК. Полученные данные обосновывают необходимость совершенствования учета общей и первичной заболеваемости детей БК и ПК, в том числе АД.

Authors’ contributions:

The concept and design of the study — N.I. Penkina, M.A. Ivanova

Collecting and interpreting the data — S.A. Vostrikova Statistical analysis — N.M. Popova, V.V. Lyutsko Drafting the manuscript — M.A. Ivanova

Revising the manuscript — M.A. Ivanova

The authors declare no conflict of interest.

Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2020, Vol. 19, No. 4

463

Эпидемиология

Epidemiology

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

1.Жидкова О.И. Медицинская статистика. 2007. Zhidkova OI. Medical statistics. 2007. (In Russ.)

2.Баранов А.А., Кучма В.Р., Сухарева Л.М. Состояние здоровья современных детей и подростков и роль медико-социальных факторов в его формировании. Вестник РАМН. 2011;5:6-11.

Baranov AA, Kuchma VR, Sukhareva LM. The state of health of modern children and adolescents and the role of medical and social factors in its formation. Bulletin of the RAMS. 2011;5:6-11. (In Russ.)

3.Кубанова А.А., Кубанов А.А., Мелехина Л.Е., Богданова Е.В. Дерматовенерология в Российской Федерации. Итоги 2014 г. Успехи, достижения, основные пути развития. Вестник дерматологии и венерологии. 2015;4:13-26.

Kubanova AA, Kubanov AA, Melekhina LE, Bogdanova EV. Dermatovenerology in the Russian Federation. The results of the 2014. Progress, achievements, the basic ways of development. Bulletin of Dermatology and Venereology. 2015;4:13-26. (In Russ.)

4.Кубанова А.А., Мелехина Л.Е., Кубанов А.А. Основные задачи развития дерматовенерологической помощи населению Российской Федерации на период до 2024 года. Результаты деятельности медицинских организаций по оказанию дерматовенерологической помощи населению Российской Федерации в 2017 году. Вестник дерматологии и венерологии. 2018;94(5):9-25.

Kubanova AA, Melekhina LE, Kubanov AA. Key objectives of dermatovenerological assistance to the Russian Federation population for the period up to 2024. Results of the activities of medical organizations in providing dermatovenerological assistance to the Russian Federation population in 2017.

Bulletin of Dermatology and Venereology. 2018;94(5):9-25. (In Russ.)

5.Перламутров Ю.Н., Ольховская К.Б., Ляпон А.О., Айвазова Т.В. Новые возможности в фармакотерапии атопического дерматита. Вестник дерматологии и венерологии. 2017;3:68-75.

Perlamutrov YuN, Olkhovskaya KB, Lyapon AO, Ajvazova TV. New opportunities in the pharmacotherapy of atopic dermatitis. Bulletin of Dermatology and Venereology. 2017;3:68-75. (In Russ.)

6.Мурашкин Н.Н., Амбарчан Э.Т., Материкин А.И. Принципы терапии атопического дерматита в детском возрасте в аспекте современных

представлений о патогенезе заболевания. Вестник дерматологии и венерологии. 2017;34:85-88.

Murashkin NN, Ambarchan ET, Materikin AI. Principles of therapy of atopic dermatitis in childhood in the aspect of modern ideas about the pathogenesis of the disease. Bulletin of Dermatology and Venereology. 2017;34:85-88. (In Russ.)

7.Потекаев Н.Н., Серов Д.Н., Михайлова И.А., Анохина Л.С., Федотова К.Ю., Георгадзе Н.Г. Современные аспекты патогенеза и терапии атопического дерматита. Клиническая дерматология и венерология. 2019;18(3):259-263.

Potekaev NN, Serov DN, Mikhailova IA, Anokhina LS, Fedotova KYu, Georgadze NG. Current aspects of pathogenesis and treatment of atopic dermatitis. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = Klinichaskaya dermatologiya i venerologiya. 2019;18(3):259-263. (In Russ.) https://doi.org/10.17116/klinderma201918031259

8.Пенкина Н.И., Бочкарева М.В., Ожегов А.М., Балаболкин И.И. Распространенность атопического дерматита у детей в Удмуртской Республике. Педиатрия. 2006;4:105-107.

Penkina NI, Bochkareva MV, Ozhegov AM, Balabolkin II. Prevalence of atopic dermatitis in children in the Udmurt Republic. Pediatrics. 2006;4:105107. (In Russ.)

9.Мерков А.М., Поляков Л.Е. Санитарная статистика. М.: Медицина; 1974.

Merkov AM, Polyakov LE. Sanitary statistics. M.: Meditsina; 1974. (In Russ.)

10.Иванова М.А., Николаева Т.В., Воронина Л.Г., Пострелко М.Д. Частота распространения болезней кожи и подкожной клетчатки в Оренбургской области в 2001—2009 гг. Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. 2011;1(14):73-76.

Ivanova MA, Nikolaeva TV, Voronina LG, Postrelko MD. Frequency of spread of diseases of skin and subcutaneous tissue in the Orenburg region in 2001-2009. Modern problems of dermatovenerology, immunology and medical cosmetology. 2011;1(14):73-76. (In Russ.)

Поступила 26.11.19

Received 26.11.19

Принята к печати 09.06.20

Accepted 09.06.20

464	Клиническая дерматология и венерология 2020, Т. 19, № 4

Лабораторная диагностика	Laboratory diagnosis
Клиническая дерматология и венерология	Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology =
2020, Т. 19, № 4, с. 465-469	Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya 2020, Vol. 19, No. 4, pp. 465-469
https://doi.org/10.17116/klinderma202019041465	https://doi.org/10.17116/klinderma202019041465

Разработка иммуноферментной тест-системы для подтверждения наличия в сыворотке, плазме крови и спинномозговой жидкости иммуноглобулинов класса G к Treponema pallidum методом иммунного блоттинга (формат Western blot)

© А.С. АВДОНИНА1, С.Г. МАРДАНЛЫ1, 2

1ЗАО «ЭКОлаб», Электрогорск, Московская область, Россия;

2ГОУ ВО «Государственный гуманитарно-технологический университет», Орехово-Зуево, Московская область, Россия

РЕЗЮМЕ Актуальность. В лабораторной диагностике сифилиса наиболее эффективным подтверждающим методом исследования является им-

мунный блоттинг. В Российской Федерации зарегистрированы наборы реагентов для этих исследований только в формате Line blot с использованием рекомбинантных аналогов антигенов Treponema pallidum.

Цель исследования. Разработать набор реагентов для диагностики сифилиса методом иммунного блоттинга в формате Western blot

с использованием нативных антигенов Treponema pallidum.

Материал и методы. Для приготовления иммуносорбента использован нативный лизат T. pallidum (штамм Nichols) собственного про-

изводства и коммерческие препараты, необходимые для электрофореза и электропереноса белков возбудителя на нитроцеллюлоз-

ную мембрану. Выбран оптимальный режим проведения этих процедур. Для оценки чувствительности и специфичности новой тест-

системы использованы коммерческие панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к T. pallidum, а также клинические материалы — образцы сыворотки, плазмы крови, спинномозговой жидкости.

Результаты. Разработана новая тест-система для оценки наличия в крови и спинномозговой жидкости антител класса G к отдельным ан-

тигенам T. pallidum методом иммунного блоттинга в формате Western blot, не уступающая по эффективности импортному аналогу.

Ключевые слова: диагностика, сифилис, иммуноблот.

Авдонина А.С. — https://orcid.org/0000-0002-2990-4930 Марданлы С.Г. — https://orcid.org/0000-0002-4556-135X

Автор, ответственный за переписку: Авдонина А.С. — e-mail: [e-mail]

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Авдонина А.С., Марданлы С.Г. Разработка иммуноферментной тест-системы для подтверждения наличия в сыворотке, плазме крови и спинномозговой жидкости иммуноглобулинов класса G к Treponema pallidum методом иммунного блоттинга (формат Western blot). Клиническая дерматология и венерология. 2020;19(4):465–469. https://doi.org/10.17116/klinderma202019041465

Development of an enzyme-linked immunosorbent assay system to confirm the presence

of immunoglobulins of class G to Treponema pallidum in serum, plasma and cerebrospinal fluid by immune blotting (Western blot format)

© A.S. AVDONINA1, S.G. MARDANLY1, 2

1Ecolab, CJCS, Elektrogorsk, Moscow region, Russia;

2State University of Humanities and Technology, Orekhovo-Zuevo, Moscow region, Russia

ABSTRACT

Relevance. In laboratory diagnostics of syphilis, the most effective confirmatory diagnostic technique is immune blotting. In the Russian Federation, reagent kits for these diagnostic techniques were registered only in the Line blot format using the recombinant analogues of Treponema pallidum antigens.

Objective. To develop a reagent kit for the diagnosis of syphilis by immune blotting in Western blot format using native Treponema pallidum antigens.

Material and methods. The immunosorbent was prepared using native T. pallidum lysate (Nichols strain) of our own production and commercial preparations necessary for electrophoresis and electrotransfer of pathogen proteins to the nitrocellulose membrane. The optimal mode of conducting these procedures was selected. To assess the sensitivity and specificity of the new test system, commercial panels of serums containing and not containing antibodies to T. pallidum were used, as well as clinical materials - samples of serum, blood plasma, and cerebrospinal fluid.

Results. A new test system has been developed to assess the presence of antibodies of class G in the blood and cerebrospinal fluid against specific T. pallidum antigens by Western blot immune blotting, which is not inferior in effectiveness to the imported counterpart.

Keywords: diagnostics, syphilis, immune blotting.

Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2020, Vol. 19, No. 4

465

Лабораторная диагностика

Laboratory diagnosis

Avdonina A.S. — https://orcid.org/0000-0002-2990-4930

Mardanly S.G. — https://orcid.org/0000-0002-4556-135X

Corresponding author: Avdonina A.S. — e-mail: [e-mail]

TO CITE THIS ARTICLE:

Avdonina AS, Mardanly SG. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay system to confirm the presence of immunoglobulins of class G to Treponema pallidum in serum, plasma and cerebrospinal fluid by immune blotting (Western blot format). Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya. 2020;19(4):465–469. (In Russ.) https://doi.org/10.17116/ klinderma202019041465

Введение	Материал и методы
Согласно статистическим данным Роспотреб-	В процессе разработки использованы следующие
надзора [1] заболеваемость сифилисом в Российской	основные материалы:
Федерации имеет тенденцию к снижению. Несмо-	— нативный лизат T. pallidum (штамм Nichols)
тря на это, сифилис остается социально значимым	фирмы ЗАО «ЭКОлаб» (Россия);
заболеванием, требующим пристального внимания	— белковый маркер молекулярной массы фир-
со стороны как лечащих врачей, так и специалистов	мы Bio-Rad (США);
лабораторной службы.	— акриламид и бис-акриламид фирмы Appli-
Спектр методов, применяемых в лаборатор-	Chem (Германия);
ной диагностике сифилиса, довольно широк [2—4].	— нитроцеллюлозная мембрана с диаметром пор
При обследовании разных групп пациентов приме-	0,45 мкм фирмы Sartorius (Германия);
няются разные комбинации этих методов и различ-	— конъюгат козьих антител к IgG человека с ще-
ные алгоритмы лабораторной диагностики сифи-	лочной фосфатазой фирмы Jakson ImmunoResearch
лиса, которые, помимо скрининговых, обязатель-	(США);
но включают различные подтверждающие методы	— субстратный раствор, содержащий 5-бром-1-
исследования [5— 7]. Наиболее эффективным под-	хлор-3-индолилфосфат и нитроголубой тетразолий
тверждающим методом в настоящее время считает-	фирмы Kem-En-Tec (Дания).
ся иммунный блоттинг (ИБ) — выявление специфи-	В работе применяли следующие методы:
ческих антител к отдельным антигенам возбудителя.	1. Культивирование T. pallidum in vivo на кроли-
Из основных антигенов T. pallidum диагностически	ках-самцах породы шиншилла. Для этого животным
значимыми считаются TpN15, TpN17, TmpA и TpN47	интратестикулярно вводили взвесь T. pallidum из рас-
с молекулярной массой 15, 17, 45 и 47 кДа соответ-	чета 5×107 спирохет на яичко. Затем отбирали кро-
ственно [5, 8—12].	ликов с 7—10-дневным специфическим орхитом,
В практике отечественного здравоохранения ши-	фиксировали их в станке и производили тотальное
роко применяются наборы реагентов для ИБ фор-	обескровливание перед удалением яичек. Вскрывали
мата Line blot (лайн-блот, линейный иммуноблот), в	мошонку и отделяли семенники. Из каждого семен-
которых используются рекомбинантные аналоги ан-	ника извлекали трепонемы, для этого сначала каж-
тигенов TpN15, TpN17, TmpA и TpN47 [13, 14]. В то	дый семенник держали над пламенем спиртовки не-
же время опыт серологической диагностики инфек-	сколько секунд, затем измельчали инфицированную
ционной патологии показывает, что наиболее эф-	ткань ножницами в кашицеобразную массу. Измель-
фективными являются подтверждающие исследо-	ченную ткань заливали стерильным 0,9% раствором
вания с использованием как рекомбинантных ана-	натрия хлорида и встряхивали на орбитальном шей-
логов, так и нативных антигенов возбудителей, т.е.	кере. После встряхивания полученную взвесь слива-
применительно к ИБ его обоих форматов — Line blot	ли в стерильные центрифужные пробирки и центри-
и Western blot.	фугировали. Надосадочную жидкость (взвесь T. pal-
Поскольку в настоящее время в нашей стране от-	lidum) сливали в стерильный флакон. Все процедуры
сутствуют зарегистрированные тест-системы для ди-	проводили согласно Правилам проведения лабора-
агностики сифилиса в формате Western blot, их разра-	торных исследований в области ветеринарии [15] в
ботка и внедрение в практику российского здравоох-	соответствии с Законом Российской Федерации от
ранения представляется актуальной задачей.	14.05.1993 №4979-1 «О ветеринарии» [16].
Цель исследования — разработка иммунофер-	2. Получение нативного лизата из культуральной
ментной тест-системы для подтверждения наличия	массы. Полученный супернатант подвергали обра-
в сыворотке, плазме крови и спинномозговой жид-	ботке ультразвуком, центрифугировали, удаляли на-
кости IgG к T. pallidum методом ИБ (формат Wes-	досадочную жидкость и ресуспендировали осадок в
tern blot).	фосфатно-солевом буферном растворе.

466	Клиническая дерматология и венерология 2020, Т. 19, № 4

Лабораторная диагностика Laboratory diagnosis

3. Электрофорез нативного лизата T. pallidum в	4) проведение электропереноса в течение 3 ч при
полиакриламидном геле (ПААГ) в восстановленных	температуре 15 °С и постоянном напряжении 100 В;
условиях с целью разделения белков в соответствии	5) инкубирование мембран после электропере-
с их молекулярной массой проводили по методике,	носа в течение 15 мин в трис-солевом буферном рас-
предложенной U.K. Laemmli [17].	творе с целью блокирования сайтов неспецифиче-
4. Электроперенос (блоттинг) разделенных бел-	ского связывания.
ков из ПААГ на нитроцеллюлозную мембрану прово-	Анализ антигенного состава нативного лизата
дили с использованием оборудования фирмы Hoefer	T. pallidum показал наличие в нем всех диагностиче-
Scientific (США).	ски важных антигенов с молекулярными массами 47,
В качестве референсного материала при оценке	45, 17 и 15 кДа (см. рисунок).
чувствительности и специфичности разработанной	В качестве оптимальной выбрана следующая
тест-системы использовали международный стан-	процедура проведения анализа:
дарт ВОЗ WHO International Standard 1st IS for hu-	— разведение образца в буферном растворе 1:100;
man syphilitic plasma IgG фирмы NIBSC (Великобри-	— инкубация стрипов иммуносорбента с образ-
тания); сероконверсионную панель Syphilis Serocon-	цом в течение 30 мин при комнатной температуре на
version Panel фирмы SeraCare (США) и смешанную	шейкере-качалке;
панель Syphilis Mixed Titer AccuSet Performance Panel	— 3 промывки буферным раствором по 5 мин;
Modified фирмы SeraCare (США).	— инкубация стрипов иммуносорбента с конъю-
В качестве клинического материала при оцен-	гатом в течение 30 мин при комнатной температуре
ке чувствительности и специфичности разработан-	на шейкере-качалке;
ной тест-системы использовали образцы сыворотки,	— 3 промывки буферным раствором по 5 мин;
плазмы крови и спинномозговой жидкости челове-
ка, полученные в диагностическом центре El Clinic
(Электрогорск), в кожно-венерологическом диспан-
сере г. Орехово-Зуево и на станции переливания кро-
ви г. Владимира. Все образцы предварительно были
охарактеризованы на наличие или отсутствие IgG
к T. pallidum в следующих тест-системах производ-
ства фирмы ЗАО «ЭКОлаб»: ИФА-Антипаллидум-
IgG (РУ № ФСР 2008/03536 от 30.05.2018), Лайн-Блот
Сифилис-IgG (РУ № РЗН 2014/1657 от 26.04.2018) и
Антипаллидум-Флюороген-IgG (РУ № РЗН 2013/247
от 23.07.2018).
В качестве набора сравнения использовали на-
бор реагентов Anti-T.pallidum WESTERNBLOT (IgG)
фирмы EUROIMMUN AG (Германия).

Результаты и обсуждение

При разработке новой тест-системы использован опыт разработки аналогичных наборов, в частности тест-системы для выявления IgG к цитомегаловирусу [18]. При этом отработаны оптимальные условия получения иммуносорбента, процедуры анализа, регистрации, учета и интерпретации полученных данных.

По результатам проведенных экспериментов выбраны следующие условия получения иммуносорбента:

1)ПААГ с концентрацией акриламида 16% и бис-акриламида 4%;

2)загрузка нативного лизата T. pallidum на поверхность ПААГ из расчета 2 мкг на 1 мм2;

3)проведение электрофореза в течение 4 ч при температуре 7°С и меняющемся напряжении (250 В

вначале процесса, 150 В через 1 ч от начала процесса и 100 В через 2 ч от начала процесса);

Антигенный состав лизата T. pallidum.

1 — результат электрофоретического разделения белкового маркера молекулярной массы; 2 — результат исследования сыворотки, положительной по наличию IgG к T. pallidum, при инкубации с мембраной, на которую нанесены электрофоретические разделенные антигены нативного лизата T. pallidum и контрольная линия (анти-IgG).

Antigenic composition of T. pallidum lysate.

1 — the result of electrophoretic separation of a protein marker of molecular weight; 2 — the result of the study of serum which is positive for the presence of IgG to T. pallidum, when incubated with a membrane, on which the electrophoretic separated antigens of the native lysate of T. pallidum are applied, and the control line (anti-IgG).

Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2020, Vol. 19, No. 4

467

Лабораторная диагностика

Laboratory diagnosis

—инкубация с субстратным раствором в течение 10 мин в темноте при комнатной температуре на шейкере-качалке;

—остановка реакции водой очищенной. Итогом разработки стала тест-система ИФА-Блот-

Сифилис-IgG следующего состава:

1)иммуносорбент — 24 полоски (стрипа) из нитроцеллюлозной мембраны с нанесенными на них методом электропереноса белками T. pallidum (антигены р47, р45, р17, р15) и контрольной линией (козьи антитела к IgG человека);

2)конъюгат — козьи антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой;

3)окрашивающий раствор — 5-бром-4-хлор-3- индолилфосфат и нитроголубой тетразолий;

4)10-кратный концентрат трис-солевого буфера [ТСБ(×10)];

5)фотография референс-стрипа с проявленным белковым профилем антигенов T. pallidum (р47, р45, р17, р15).

Результаты анализа интерпретировали с учетом окрашивания зон, соответствующих только специфическим антигенам, при этом учету подлежали только четко окрашенные полосы. Наличие слабо окрашенных полос, соответствующих специфическим антигенам, а также окрашенных полос, соответствующих неспецифическим антигенам, не учитывали.

Положительным результатом анализа считали наличие не менее 2 полос, соответствующих специфическим антигенам T. pallidum; наличие только одной полосы, соответствующей одному из специфических антигенов, оценивали как неопределенный результат, отсутствие окрашивания в области полос, соответствующих специфическим антигенам, — как отрицательный результат.

Чувствительность и специфичность разработанной тест-системы вначале исследовали на референсных материалах — на 9 сыворотках сероконверсионной панели Syphilis Seroconversion Panel фирмы SeraCare (5 отрицательных, 3 неопределенных и 1 положительный) и на 20 сыворотках панели Syphilis Mixed Titer AccuSetTM Performance Panel Modified фирмы SeraCare (2 отрицательных и 18 положительных).

Полученные оценки исследованных образцов полностью совпали с их паспортными характеристиками, т.е. была показана 100% диагностическая чувствительность и специфичность разработанной тест-системы. Аналитическая чувствительность тестсистемы оценена с использованием международного стандарта ВОЗ WHO International Standard 1st IS for human syphilitic plasma IgG фирмы NIBSC и составила 0,001 МЕ/мл.

В заключение исследовали чувствительность

испецифичность разработанной тест-системы на клиническом материале по сравнению с аналогом —

набором реагентов Anti-T.pallidum WESTERNBLOT (IgG) фирмы EUROIMMUN AG. Исследовано по 10 образцов сыворотки и плазмы крови человека, а также спинномозговой жидкости, содержащих IgG к T. pallidum по результатам их предварительного обследования, и по 10 образцов сыворотки, плазмы и спинномозговой жидкости, не содержащих этих антител (всего 60 образцов). Оценки всех исследованных образцов, полученных в обеих тестсистемах, полностью совпали, что подтверждает высокую чувствительность и специфичность новой тест-системы.

Кроме полного совпадения общих оценок клинических материалов, в обеих тест-системах получено практическое совпадение профилей антител, выявленных этими тест-системами в исследованных образцах, о чем свидетельствуют коэффициенты корреляции оценок наличия антител к антигенам р47, р45, р17, р15 — 0,93—1,00.

Следует отметить, что разработанная тестсистема имеет преимущество перед набором-анало- гом по времени проведения анализа — оно короче на 15 мин, поскольку блокировка стрипов, предусмотренная постановкой ИБ с помощью набора-ана- лога, при использовании ИФА-Блот-Сифилис-IgG не требуется — она уже выполнена при изготовлении иммуносорбента. Кроме того, стоимость новой тест-системы будет значительно ниже стоимости на- бора-аналога, поскольку ее основной компонент — нативный лизат T. pallidum — производится на базе ЗАО «ЭКОлаб». Так, в апреле 2020 г. коммерческая цена набора Anti-Treponema pallidum WESTERNBLOT (IgG) составила 12 552 руб., тогда как ориентировочная себестоимость набора ИФА-Блот-Сифилис- IgG равна 5000 руб.

Выводы

1.Разработана отечественная иммуноферментная тест-система ИФА-Блот-Сифилис-IgG, предназначенная для подтверждения наличия в сыворотке, плазме крови и спинномозговой жидкости IgG к T. pallidum методом ИБ (формат Western blot).

2.Разработанная тест-система характеризуется высокими показателями чувствительности и специфичности и имеет аналитическую чувствительность 0,001 МЕ/мл.

3.ИФА-Блот-Сифилис-IgG выгодно отличается по техническим характеристикам и стоимости от своего импортного аналога — набора реагентов An- ti-T.pallidum WESTERNBLOT (IgG) фирмы EUROIMMUN AG (Германия).

4.После прохождения процедуры государственной регистрации медицинского изделия новая тестсистема может быть рекомендована учреждениям здравоохранения в качестве подтверждающего теста на сифилис.

468	Клиническая дерматология и венерология 2020, Т. 19, № 4

Лабораторная диагностика

Laboratory diagnosis

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — С.Г. Марданлы Сбор, обработка материала, написание текста — А.С. Авдонина Редактирование — С.Г. Марданлы

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

Authors’ contributions:

The concept and design of the study — S.G. Mardanly Collecting and interpreting the data — A.S. Avdonina Drafting the manuscript — A.S. Avdonina

Revising the manuscript — S.G. Mardanly

The authors declare no conflict of interest.

1.Роспотребнадзор. Статистические материалы. Ссылка активна на 11. Иванов А.М. Совершенствование диагностики сифилиса на основе

16.04.2020.

Rospotrebnadzor.-Statisticheskie-materialy. Accessed April 16, 2020 (In Russ.) https://www.rospotrebnadzor.ru/activities/statistical-materials

2.Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. 5-е изд., перераб. и доп. М.: Деловой экспресс; 2016.

Federal clinical guidelines. Dermatology: Diseases of the skin. Sexually transmitted infections. 5-e izd., pererab. i dop. M.: Delovoj ekspress; 2016. (In Russ.)

3.Марданлы С.Г., Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика сифилиса. Электрогорск: ЗАО «ЭКОлаб»; 2011.

Mardanly SG, Dmitriev GA. Laboratory diagnostics of syphilis. Elektrogorsk: ZAO «EKOlab»; 2011. (In Russ.)

4.Потекаев Н.Н., Ротанов С.В., Фриго Н.В., Дмитриев Г.А., Доля О.В., Китаева Н.В., Круглова Л.С., Марданлы С.Г. Лабораторные методы диагностики сифилиса: пособие для врачей. М.: Московский научнопрактический центр дерматовенерологии и косметологии, Центральная государственная медицинская академия Управления делами Президента Российской Федерации, Государственный гуманитарно-тех- нический университет; 2020.

Potekaev NN, Rotanov SV, Frigo NV, Dmitriev GA, Dolya OV, Kitaeva NV, Kruglova LS, Mardanly SG. Laboratory methods of syphilis diagnosis: manual for doctors. M.: Moskovskij nauchno-prakticheskij tsentr dermatovenerologii i kosmetologii, Tsentralnaya gosudarstvennaya meditsinskaya akademiya Upravleniya delami Prezidenta Rossijskoj Federatsii, Gosudarstvennyj gumanitarno-tehnicheskij universitet; 2020. (In Russ.)

5.Потекаев Н.Н., Фриго Н.В., Ротанов С.В. Диагностика сифилиса: от Вассермана до наших дней. Владимир: Транзит-ИКС; 2018. Potekaev NN, Frigo NV, Rotanov SV. Diagnosis of syphilis: from Wasserman to the present day. Vladimir: Tranzit-IKS; 2018. (In Russ.)

6.Janier M, Unemo M, Dupin N, Tiplica GS, Potočnik M, Patel R. European Guideline on the Management of Syphilis. Accessed April 16, 2020 [electhrone resource]. https://iusti.org/regions/Europe/pdf/2020/2020SyphilisGuidelineProposed.pdf

7.Sambri V, Marangoni A, Eyer C, Reichhuber C, Soutschek E, Negosanti M, D’Antuono A, Cevenini R. Western Immunoblotting with Five Treponema pallidum Recombinant Antigens for Serologic Diagnosis of Syphilis. Clin Diagn Lab Immunol. 2001;8(3):534-539.

8.Кочанова М.В. Повышение информативности серологической диагностики сифилиса на основе комплексного изучения специфических факторов иммунитета: автореф. дисс. ... канд. мед. наук. СПб; 2002.

Kochanova MV. Increasing the information content of serological diagnostics of syphilis based on a comprehensive study of specific immune factors: abstr. diss.

... cand. med. sciences. SPb; 2002. (In Russ.)

9.Ijsselmuiden OE, Schouls LM, Stolz E, Aelbers GN, Agterberg CM, Top J, Van Embden JD. Sensitivity and specificity of an enzyme-linked immunosorbent assay using the recombinant DNA-derived Treponema pallidum protein TmpA for serodiagnosis of syphilis and the potential use of TmpA for assessing the effect of antibiotic therapy. J Clin Microbiol. 1989;(27):152-157.

10.Гражданцева А.А., Кочнева Р.В., Сиволобова Г.Ф. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов. Иммунология. 1998; (4):20-23.

Grazhdantseva AA, Kochneva RV, Sivolobova GF. Study of sera of syphilis patients by enzyme immunoassay using recombinant antigens. Immunologiya. 1998;(4):20-23. (In Russ.)

модифицированного иммуноферментного анализа: автореф. дисс. ...

канд. мед. наук. Санкт-Петербургская гос. мед. академия им. И.И. Мечникова. СПб; 2000.

Ivanov AM. Improving the diagnosis of syphilis is based on a modified enzyme immunoassay: Avtoref. diss. ... cand. med. sciences. Sankt-Peterburg- skaya gos. med. akademiya im. I.I. Mechnikova. SPb; 2000. (In Russ.)

12.Каур С., Сильм X., Виндиревских Г., Шевчук О. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя. Заболевания, передаваемые половым путем. 1998;(4):21-22.

Kaur S, Silm Kh, Vindirevskikh G, Shevchuk O. Improved methods of diagnosis of syphilis using the detection of antibodies to specific proteins of the pathogen. Zabolevaniya, peredavaemye polovym putem. 1998;(4):21-22. (In Russ.)

13.Марданлы C.Г., Арсеньева В.А. Новая тест-система «Лайн-Блот Сифилис-IgM» для определения IgM-антител к Treponema pallidum методом линейного иммуноблоттинга. Вестник службы крови России. 2014;(1):44-47.

Mardanly SG, Arsenieva VA. New test system “Line-Blot Syphilis-IgM” for determining IgM antibodies to Treponema pallidum by linear immunoblotting. Vestnik sluzhby krovi Rossii. 2014;(1):44-47. (In Russ.)

14.Марданлы C.Г., Арсеньева В.А., Фриго Н.В., Ротанов С.В., Амелина Е.А., Захаров М.В. Применение тест-системы «Лайн-Блот Сифилис» в диагностике сифилиса методом линейного иммуноблотинга. Вестник дерматологии и венерологии. 2011;(3):80-87.

Mardanly SG, Arsenieva VA, Frigo NV, Rotanov SV, Amelina EA, Zakharov MV. Application of the “Line-Blot Syphilis” test system in the diagnosis of syphilis by linear immunoblotting. Vestnik dermatologii i venerologii. 2011;(3):80-87. (In Russ.)

15.Приказ Минсельхоза РФ от 05.11.2008 № 490 «Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований в области ветеринарии».

Ссылка активна на 23.04.2020.

Prikaz Minselkhoza RF ot 05.11.2008 No. 490 “About the approval of the Rules for laboratory research in the field of veterinary medicine”. Accessed April 23, 2020. (In Russ.) https://legalacts.ru/doc/prikaz-minselkhoza-rf-ot-05112008-n-490

16.Закон РФ от 14.05.1993 №4979-1 (ред. от 27.12.2019) «О ветеринарии». Ссылка активна на 23.04.2020.

Zakon RF ot 14.05.1993 No. 4979-1 (red. ot 27.12.2019) “About veterinary medicine”. Accessed April 23, 2020. (In Russ.) https://base.garant.ru/10108225/

17.Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;(227):680-685. https://doi.org/10.1038/227680a0

18.Марданлы С.Г., Авдонина А.С. Разработка набора реагентов для выявления антител класса G к отдельным антигенам цитомегаловируса методом иммунного блоттинга в формате Western Blot. Клиническая дерматология и венерология. 2014;(1):18-24.

Mardanly SG, Avdonina AS. Development of a set of reagents for the detection of class G antibodies to individual cytomegalovirus antigens by immune blotting in Western Blot format. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya. 2014;(1):18-24. (In Russ.)

Поступила 24.04.20

Received 24.04.20

Принята к печати 25.05.20

Accepted 25.05.20

Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2020, Vol. 19, No. 4

469

Случай из практики	Case study
Клиническая дерматология и венерология	Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology =
2020, Т. 19, № 4, с. 470-475	Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya 2020, Vol. 19, No. 4, pp. 470-475
https://doi.org/10.17116/klinderma202019041470	https://doi.org/10.17116/klinderma202019041470

Клинические признаки множественной саркомы Капоши на коже и на слизистой оболочке полости рта: случаи из практики

© В.Н. ЗАВАДСКИЙ, Н.В. РОМАНОВА

ФГБОУ ВО «Ярославский государственный медицинский университет» Минздрава России, Ярославль, Россия

РЕЗЮМЕ

Распознавание саркомы Капоши (СК), которая значительно чаще наблюдается у ВИЧ-инфицированных лиц, — актуальная задача. Цель исследования. Рассмотреть клинические признаки СК на коже и на слизистой оболочке рта, которые могут встретиться при об-

щем осмотре пациента.

Материал и методы. Под наблюдением находились 9 больных с множественной СК, из них 6 ВИЧ-инфицированных и 3 с идиопати-

ческой («классической») СК. Все больные обследованы клинически и серологически на ВИЧ-инфекцию в областном кожно-венеро- логическом диспансере Ярославля. Гистологическое подтверждение диагноза СК и консультация онколога проведены в областном

онкологическом диспансере Ярославля. Все пациенты обследованы также в Центре профилактики СПИД.

Результаты. Клинические признаки ВИЧ-ассоциированной СК и идиопатической СК могут быть сходными: множественные, геморра-

гические, фиолетово-багровые пятна и бляшки на коже и слизистых оболочках; лимфэдема. Однако симптомы ВИЧ-ассоциированной

СК появляются раньше, быстрее и локализуются на любом участке тела (формируется СПИД). Идиопатическая СК первоначально чаще всего локализуется на стопах и голенях, но далее диссеминирует неограниченно.

Заключение. При обнаружении клинических признаков СК следует, не дожидаясь гистологического подтверждения диагноза, назна-

чить анализ на ВИЧ. СК выявляется клинически, но диагноз верифицируется гистологически (требуется направленный поиск гисто-

логического подтверждения диагноза, особенно в начальной стадии заболевания).

Ключевые слова: саркома Капоши множественная, ВИЧ-ассоциированная, саркома Капоши идиопатическая.

Завадский В.Н. — http://orcid.org/0000-0001-5498-5771 Романова Н.В. — https://orcid.org/0000-0003-3831-0912

Автор, ответственный за переписку: Завадский В.Н. — e-mail: [e-mail]

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Завадский В.Н., Романова Н.В. Клинические признаки множественной саркомы Капоши на коже и на слизистой оболочке рта: случаи из практики. Клиническая дерматология и венерология. 2020;19(4):470–475. https://doi.org/10.17116/klinderma202019041470

Clinical signs of Kaposi’s multiple sarcoma on skin and on oral mucosa: cases from practice

© V.N. ZAVADSKY, N.V. ROMANOVA

Yaroslavl State Medical University, Yaroslavl, Russia

ABSTRACT

Recognition of Kaposi’s sarcoma (KS), which is much more often observed in HIV-infected individuals, is an urgent task.

Objective. Consider the clinical signs of KS on the skin and on the oral mucosa, which may occur during a general examination of the patient.

Material and methods. Nine patients with multiple KS were under observation, of which 6 were HIV-infected and 3 were with idiopathic

(“classic”) KS. All patients were examined clinically and serologically for HIV infection in the regional Dermatovenerologic Dispensary of Yaroslavl. Histological confirmation of the diagnosis of KS and oncologist consultation were carried out in the regional oncology clinic of Yaroslavl. All patients were also examined at the AIDS Prevention Center.

Results. Clinical signs of HIV-associated KS and idiopathic KS may be similar: multiple, hemorrhagic, purple spots and plaques on the skin and mucous membranes; lymphadenoma. However, the symptoms of HIV-associated KS appear earlier, faster, and are localized on any part of the body (AIDS is formed). Idiopathic KS is initially most often localized on the feet and legs, but then disseminates indefinitely.

Conclusion. If clinical signs of KS are detected, an HIV test should be prescribed without waiting for histological confirmation of the diagnosis. KS is detected clinically, but the diagnosis is verified histologically (a directed search for histological confirmation of the diagnosis is required, especially in the initial stage of the disease).

Keywords: multiple Kaposi’s sarcoma, HIV-associated, idiopathic Kaposi’s sarcoma.

Zavadsky V.N. — http://orcid.org/0000-0001-5498-5771

Romanova N.V. — https://orcid.org/0000-0003-3831-0912

Corresponding author: Zavadsky V.N. — e-mail: [e-mail]

TO CITE THIS ARTICLE:

Zavadsky VN, Romanova NV. Clinical signs of Kaposi’s multiple sarcoma on skin and on oral mucosa: cases from practice. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya. 2020;19(4):470–475. (In Russ.) https://doi.org/10.17116/ klinderma202019041470

470	Клиническая дерматология и венерология 2020, Т. 19, № 4

Случай из практики Case study

Своевременное распознавание саркомы Капоши	сультации онколога проводили в областном онко-
(СК), которая значительно чаще наблюдается у ВИЧ-	диспансере. Все пациенты также проконсультиро-
инфицированных лиц, является актуальной задачей.	ваны с проведением анализа на ВИЧ методом имму-
Эпидемиологическая ситуация по ВИЧ-инфекции	ноблота в областном Центре профилактики СПИД.
остается неустойчивой в мире, и в том числе в Рос-
сии [1], при этом у ВИЧ-инфицированных лиц СК	Результаты
встречается в несколько тысяч раз чаще, чем у насе-
ления в целом [2]. Больные с ранними, «доопухоле-	Наблюдение 1. Больная М., 81 год (рис. 1). За год
выми» признаками СК в виде пятен, поверхностных	до обращения лечилась у дерматолога с диагнозом
бляшек, естественно, обращаются к дерматологу.	«микробная экзема голеней и стоп». Двумя неде-
Прежде всего их надо обследовать на ВИЧ. Получа-	лями ранее обследовалась в терапевтическом от-
ется, что СК как бы играет роль «индикаторного» за-	делении больницы по месту жительства. Диагноз
болевания. Этиология СК связана с герпесвирусом	при выписке: васкулит. Обратилась к дерматологу в
человека 8-го типа (HIV-8) [3]. СК развивается из эн-	ОКВД. Очаги поражения обнаружены на коже (см.
дотелия кровеносных капилляров — венозных и ар-	рис. 1, а—г) и на слизистой оболочке рта. Назначе-
териальных, а также лимфатических мелких сосудов.	но исследование на ВИЧ. Анализы на ВИЧ, вклю-
Соответственно при поражении кровеносных капил-	чая иммуноблот, отрицательные. Отрицательный ре-
ляров узелки, бляшки и геморрагические пятна бу-	зультат подтвержден в Центре профилактики СПИД.
дут от синюшного и фиолетового до багрового и бу-	С клиническим диагнозом «множественная идиопа-
рого цвета, при поражении лимфатических сосудов	тическая СК» больная направлена в областной онко-
возникает лимфатический отек тканей или образует-	диспансер на консультацию онколога и для гистоло-
ся лимфатическая киста. После спонтанного регрес-	гического исследования. Диагноз СК подтвержден
са некоторых элементов и за счет отложения гемо-	гистологически в онкодиспансере. Лечение назна-
сидерина появляется пигментация; после бугорков	чено симптоматическое с учетом общего состояния
остаются рубцы. Субъективные ощущения часто от-	и преклонного возраста.
сутствуют или незначительные. СК, согласно клас-	Наблюдение 2. Больная Л., 23 года (рис. 2). Заме-
сическому описанию, «множественная, геморраги-	тила темно-фиолетовый узелок у себя на предпле-
ческая, пигментная» (Капоши, 1872) [4]. Она может	чье и синюшное уплотненное пятно на бедре (см.
локализоваться на любых участках кожи и слизистых	рис. 2, а). Обратилась к дерматологу в ОКВД. Наз-
оболочек. Поверхность образований гладкая, но бы-	начено исследование на ВИЧ. Результат оказался
вает, особенно на нижних конечностях, бугристая и	положительным. При осмотре выявлены не только
бородавчатая. Метастазы во внутренних органах по-	поражения кожи, но и слизистой оболочки рта (см.
являются в основном в финале болезни.	рис. 2, б). С диагнозом «СК (?). ВИЧ-инфекция» на-
Своеобразная и довольно характерная клиниче-	правлена в областной онкологический диспансер на
ская картина СК [2, 3, 5, 6] позволяет заподозрить	консультацию онколога и для гистологического ис-
это заболевание еще на ранней стадии, но подтвер-	следования. Диагноз СК подтвержден гистологиче-
дить диагноз надо гистологически [5, 7, 8]. Между	ски. Пациентка зарегистрирована в Центре профи-
тем в ранней стадии СК гистологическая картина не	лактики СПИД. Назначена антиретровирусная те-
всегда характерна [9] и, видимо, требуется направ-	рапия.
ленный поиск гистопатологических признаков СК.	Наблюдение 3. Больной Т. (рис. 3). Лечился амбу-
Цель исследования — рассмотреть характерные	латорно с диагнозом «пиодермия». Поступил для об-
клинические признаки множественной СК на коже и	следования в стационар ОКВД. При осмотре наряду
на слизистой оболочке рта (которые могут встретить-	с единичными фурункулами обнаружены на ниж-
ся при обычном общем осмотре пациента).	них конечностях многочисленные пигментные пятна
	(рис. 3, а), которые не укладываются только в карти-
Материал и методы	ну последствий пиодермии. На коже головы выявле-
	на небольшая киста, плотная, гладкая как бы полу-
Под наблюдением находились 9 больных (4 муж-	прозрачная (см. рис. 3, б). На лице геморрагические
чины и 5 женщин) с множественной СК (диагноз	пятна, узелки, поверхностные бляшки (см. рис. 3, в).
подтвержден гистологически в областном онколо-	Результат серологического исследования на ВИЧ
гическом диспансере г. Ярославля), из них 6 с ВИЧ-	положительный. Больного с диагнозом «Саркома
ассоциированной СК и 3 с идиопатической («клас-	Капоши (?). ВИЧ-инфекция» направили в област-
сической») СК. Все больные находились в областном	ной онкодиспансер на консультацию онколога и для
кожно-венерологическом диспансере (ОКВД) и бы-	гистологического исследования, где СК подтверж-
ли обследованы клинически, с серологическим ис-	ден гистологически. Дальнейшее наблюдение, а так-
следованием на ВИЧ-инфекцию. Гистологические	же антиретровирусная терапия проводятся в Центре
исследования, подтвердившие диагноз СК, и кон-	профилактики СПИД.

Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2020, Vol. 19, No. 4

471

Случай из практики

Case study

а/a

б/b

в/c

г/d

Рис. 1. Больная М., 81 год (идиопатическая, «классическая» саркома Капоши).

а — на стопе множественные темно-фиолетовые округлые узлы с неровной бугристой поверхностью (напоминающие ежевику) величиной до 1 см, субъективные ощущения незначительные; б — на голени множественные темно-фиолетовые бугристые узлы величиной до 1 см; в — на бедре багрово-фио- летовая, полукольцевидная массивная бляшка, состоящая из тесно сгруппированых бляшек, рядом несколько буро-лиловых, резко очерченных поверхностных бляшек разного размера; г — темно-фиолетовый («пигментный»), слегка возвышающийся узел над локтем.

Fig. 1. Patient M., 81 years old (idiopathic, “classical” Kaposi’s sarcoma).

a — on the foot, multiple dark purple rounded nodes with an uneven tuberous surface (resembling a blackberry) up to 1 cm in size, subjective felings are insignificant; b — multiple dark purple tuberous nodes up to 1 cm in size on the lower leg; c — a purple, semicircular massive plaque on the thigh, consisting of closely grouped plaques, several brown-purple, sharply defined surface plaques of different sizes nearby; d — dark purple (“pigmented”), a slightly elevated node above the elbow.

а/a	б/b

Рис. 2. Больная Л., 23 года (ВИЧ-ассоциированная саркома Капоши).

а — на бедре красновато-лиловая круглая бляшка размером 1×1 см, резко очерченная, гладкая (безболезненная), ниже ее розовато-лиловое пятно (начинающееся поражение); б — 3 темно-фиолетовых линейных пятна на твердом небе (параллельно небному шву), резко ограниченных, гладких, асимптомных.

Fig. 2. Patient L., 23 years old (HIV-associated Kaposi’s sarcoma).

a — on the thigh, a reddish-purple round plaque 1×1 cm in size, sharply defined, smooth (painless), below it there is a mauve spot (beginning lesion); b — 3 dark purple linear spots on a hard palate (parallel to the palatine suture), sharply bounded, smooth, asymptomatic.

472	Клиническая дерматология и венерология 2020, Т. 19, № 4