VII. Дополнительные доказательства,

ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ РОЛЬ ПРОЦЕССА

РЕКОМБИНАЦИИ В ПРОИСХОЖДЕНИИ НОВЫХ

ПАНДЕМИЧЕСКИХ ВИРУСОВ ГРИППА

Приведенные биохимические данные не подтверждают теорию о том, что антиген НА вируса Гонконг произошел вследствие одиночной мутации из предыдущих штаммов Азии. Следовательно, можно задать вопрос, имеются ли какие-нибудь данные, полученные при лабораторных исследованиях in vitro или in vivo или особенно при наблюдениях

в естественных условиях, которые поддерживали бы теорию, предполагающую, что новые вирусы возникают путем рекомбинации.

А. ДАННЫЕ, ПОЛУЧЕННЫЕ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ В СИСТЕМЕ IN VITRO

Антигенные гибриды (рекомбинанты) многих вирусов ■гриппа А млекопитающих и птиц были выделены после смешанной инфекции куриных эмбрионов или культур клеток различными вирусами гриппа типа A (Tumova, Pereira, 1965; Kilbourne, Schulman, 1965; Kilbourne et al., 1967; Kilbourne,, 1968; Easterday et al., 1969). Эти исследования суммированы в обзорах Kilbourne и соавт. (1967), а также Webster и La-ver (1971). В настоящее время очевидно, что рекомбинантные вирусы гриппа А со смешанными поверхностными антигенами (Webster, 1970b) или потенциями к росту (Kilbourne, Murphy, 1960; Kilbourne et al., 1971) или другими биологическими характеристиками (McCahon, Schild, 1971) могут быть сделаны «по заказу».

Таким образом «новые» вирусы гриппа могут быть созданы в лаборатории, но лишь недавно были получены доказательства того, что рекомбинация и отбор «новых» вирусов могут происходить также in vivo в условиях, приближенных к природным (Webster et al., 1971).

Б. ДАННЫЕ, ПОЛУЧЕННЫЕ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ В СИСТЕМЕ IN VIVO

vivo

1. Демонстрация рекомбинации в системе in

Kilbourne (1970) отмечал, что рекомбинация между двумя различными штаммами вирусов гриппа типа А до сих пор не была показана в случае интактных животных, даже в экспериментальных условиях. Для того чтобы выяснить, (может ли происходить рекомбинация in vivo, использовали две системы. В первой лишь один из родительских вирусов размножался в животном-хозяине, а во второй размножались оба родительских вируса. Животным вводили большие дозы родительских вирусов и на 3-й день, когда оказывался размноженным хотя бы один из вирусов, животных забивали. Суспензии легких исследовали прямо в оболочках аллантоиса на наличие рекомбинантных (антигенно-гибрддных) вирусов;, родительские .вирусы подавляли специфическими антисыворотками (Webster, 1970b).

В первой системе свиньям вводили смесь вируса гриппа свиней — ВГ'С (А/свинья/Висконсин/1/67 [HswlNl]) и вируса чумы птиц типа А — ВЧП (Дания/27 [HavlNeql]) (43). Последний не дает выхода инфекционного вируса после введения свиньям. Суспензии легких, собранные через

3 дня, содержали родительские вирусы и рекамбинантные вирусы, несущие НА ВГС и NA ВЧП, ВГС (Н)-ВЧП (N) (A/Hswl-Neql), и вирусы, обладающие НА ВЧП и NA ВГС, ВЧП (Н)-В ГО (N) (Havl-Nl) (Webster et al., 1971).

Во второй системе, где реплицировались оба вируса, индеек заражали ВЧП и вирусом гриппа индюков — ВГИ (А/я'ндюк/Массачусетс/3740/65 [Hav6N2]). Как (было указано, в системе аллантоионых оболочек выделяли антигенные гибриды, имеющие ВГИ (Г)-ВЧП (N) (Hav6Neql) и ВЧП (Н)-ВГИ(1Ч) (Havl-N2).

Имеются два возможных возражения против того, что описанная рекомбинация происходит in vivo. Первое — рекомбинация может иметь место в системе культуры клеток, использованной для селекции вирусов; второе'—неизвестно, 'были ли эти антигенные гибриды генетически стабильными и не являлись ли просто фенотипически смешанными частицами.

Первое возражение можно не принимать во внимание, поскольку селекция антигенно гибридных вирусов проводилась непосредственно при очень высоких концентрациях антител, которые должны нейтрализовать родительские вирусы. Для получения (более строгих доказательств того, что анти-(гештснгибридные вирусы не возникают в процессе выделения вне инфицированного хозяина, было необходимо получить бляшки вирусов смешанного урожая из суспензии лепких, чтобы выделить отдельные бляшки и охарактеризовать образцы вирусов, полученные из отдельных бляшек. 25% бляшек, выделенных из суспензии легких индеек, смешанно инфицированных ВЧП + ВГИ, были рекомбинантными вирусами. Гибридные вирусы не выделялись из контрольных культур, зараженных искусственной смесью обоих родительских вирусов.

Генетическая стабильность рекомбинантных вирусов была установлена путем «ведения животным-хозяевам клонированных аятигенно-гибридных вирусов (Webster et al., 1971). Так, например, цыплята, зараженные антигенно-гибридным вирусом, несущим ВЧП(Н)-ВГИ(N), (HavliN2), погибали от скоротечной инфекции, а вирус, вновь выделенный из легких этих птиц через 3 дня, являлся чистой культурой вируса, обладающего B4n(H)-(Havl-N2). Также были вновь выделены от животных и оказались генетически стабильными и другие антигенно-тибридные вирусы.