- •Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток
- •3. Общие реакции подлинности
- •3.2. Реакция доказательства принадлежности лс к группе аминокислот.
- •4. Специфические реакции подлинности
- •Чистота
- •5. Температура плавления, удельное вращение.
- •6. Потеря в массе при высушивании.
- •Количественное определение
- •1. Методы кислотно-основного титрования.
- •2. Методы окислительно- восстановительного титрования.
- •3. Метод Кьельдаля (в настоящее время не является фармакопейным для аминокислот за исключением пирацетама – видоизмененный метод Кьельдаля).
- •4. Инструментальные методы. Спектрофотометрия.
- •Хранение
- •Применение, формы выпуска
- •Самостоятельно изучить:
- •Производные пролина
- •Производные l–фенилаланина
Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток
3. Общие реакции подлинности
3.2. Реакция доказательства принадлежности лс к группе аминокислот.
ЛС растворяют в воде, прибавляют раствор фенолфталеина и несколько капель раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л). Появляется розовое окрашивание. Затем прибавляют раствор формальдегида, раствор обесцвечивается.
Розовое окрашивание обусловлено тем, что в связи со слабыми кислотными свойствами аминокислоты, натриевая соль со щелочью не образуется, щелочь присутствует в растворе в свободном виде и дает розовую окраску с фенолфталеином. При блокировании аминогруппы (добавление раствора формальдегида) усиливаются кислотные свойства аминокислоты, образуется натриевая соль по карбоксильной группе, щелочь в свободном виде в растворе не присутствует и розовая окраска исчезает.
3.3. Реакция с солями меди (II) (не фармакопейная).
Применяется в экспресс-анализе (внутриаптечный контроль) α-аминокислот с свободной -NH2 группой. Ацетилцистеин – после кислотного гидролиза.
В качестве реагентов используют:
CuSO4 в среде CH3COONa;
Cu(CH3COO)2 в среде CH3COONa.
Кислота глутаминовая – компл. соед. синего цвета, р. в Н2О.
Метионин – компл. соед. сиренево-синего цвета, мало р. в Н2О (↓)
Цистеин – осадок черного цвета (за счет -SH группы дополнительно происходят процессы окисления-восстановления и разложения ЛC).
4. Специфические реакции подлинности
4.1. Пирацетам. Реакция щелочного гидролиза. Нагревают ЛС в присутствии 10% раствора натрия гидроксида. Выделяется аммиак, обнаруживаемый по запаху или посинению влажной красной лакмусовой бумаги.
4.2. ЛС, содержащие серу: цистеин, ацетилцистеин, пеницилламин, метионин, содержащие меркапто-группу (-SH), или метилтиогруппу (-СH3SH).
Реакция Легаля. При взаимодействии с нитропруссидом натрия
(Na2[Fe(CN)5NO]) в щелочой среде образуютcя продукты, окрашенные в красный или красно-фиолетовый цвет (цистеин). При подкислении хлороводородной или уксусной кислотой окраска продуктов реакции изменяется. Например, при подкислении продукта реакции метионина серной кислотой окраска из красной переходит в красно-фиолетовую.
Доказательство восстановительных свойств - реакции с окислителями. Продукт окисления – дисульфид (бесцветный).
2 R-SH → R-S-S-R + 2 H+
ЛС + CuSO4 → черное окрашивание
ЛС + FeCl3 → быстро исчезающее синее окрашивание
ЛС + H3PO4 12 WO3 → W2O5 (вольфрамовая синь)
Реакция отличия ацетилцистеина от цистеина. Проводят кислотный гидролиз ЛС в присутствии калия дихромата, при добавлении этанола и концентрированной серной кислоты протекает реакция этерификации, образуется сложный эфир этилацетат, имеющий характерный запах.
4.3. Кислота глутаминовая.
Реакция с резорцином в присутствии концентрированной серной кислоты.
Реакция основана на свойстве кислоты глутаминовой образовывать при нагревании, в присутствии концентрированной серной кислоты (водоотнимающего средства), устойчивый пятичленный лактам (внутренний амид), который вступает в реакцию конденсации с резорцином (красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией).
Нагревают кислоту глутаминовую с резорцином до зелено-коричневого окрашивания, после охлаждения прибавляют воду и раствор аммиака. Появляется красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией.
4.4. Кислота аминокапроновая. Реакция окислительного дезаминирования. Проводят нагревание с хлорамином Б и фенолом. Выделившийся аммиак доказывают по образованию индофенола (синее окрашивание).