- •Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток
- •4. Специфические реакции подлинности
- •Чистота
- •5. Температура плавления, удельное вращение.
- •6. Потеря в массе при высушивании.
- •Количественное определение
- •1. Методы кислотно-основного титрования.
- •2. Методы окислительно- восстановительного титрования.
- •3. Метод Кьельдаля (в настоящее время не является фармакопейным для аминокислот за исключением пирацетама – видоизмененный метод Кьельдаля).
- •4. Инструментальные методы. Спектрофотометрия.
- •Хранение
- •Применение, формы выпуска
- •Самостоятельно изучить:
- •Производные пролина
- •Производные l–фенилаланина
Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток
4. Специфические реакции подлинности
4.1. Пирацетам. Реакция щелочного гидролиза. Нагревают ЛС в присутствии 10% раствора натрия гидроксида. Выделяется аммиак, обнаруживаемый по запаху или посинению влажной красной лакмусовой бумаги.
4.2. ЛС, содержащие серу: цистеин, ацетилцистеин, пеницилламин, метионин, содержащие меркапто-группу (-SH), или метилтиогруппу (-СH3SH).
Реакция Легаля. При взаимодействии с нитропруссидом натрия
(Na2[Fe(CN)5NO]) в щелочой среде образуютcя продукты, окрашенные в красный или красно-фиолетовый цвет (цистеин). При подкислении хлороводородной или уксусной кислотой окраска продуктов реакции изменяется. Например, при подкислении продукта реакции метионина серной кислотой окраска из красной переходит в красно-фиолетовую.
Доказательство восстановительных свойств - реакции с окислителями. Продукт окисления – дисульфид (бесцветный).
2 R-SH → R-S-S-R + 2 H+
ЛС + CuSO4 → черное окрашивание
ЛС + FeCl3 → быстро исчезающее синее окрашивание
ЛС + H3PO4 12 WO3 → W2O5 (вольфрамовая синь)
Реакция отличия ацетилцистеина от цистеина. Проводят кислотный гидролиз ЛС в присутствии калия дихромата, при добавлении этанола и концентрированной серной кислоты протекает реакция этерификации, образуется сложный эфир этилацетат, имеющий характерный запах.
4.3. Кислота глутаминовая.
Реакция с резорцином в присутствии концентрированной серной кислоты.
Реакция основана на свойстве кислоты глутаминовой образовывать при нагревании, в присутствии концентрированной серной кислоты (водоотнимающего средства), устойчивый пятичленный лактам (внутренний амид), который вступает в реакцию конденсации с резорцином (красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией).
Нагревают кислоту глутаминовую с резорцином до зелено-коричневого окрашивания, после охлаждения прибавляют воду и раствор аммиака. Появляется красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией.
4.4. Кислота аминокапроновая. Реакция окислительного дезаминирования. Проводят нагревание с хлорамином Б и фенолом. Выделившийся аммиак доказывают по образованию индофенола (синее окрашивание).
Чистота
1. Прозрачность и цветность водных растворов. 2. pH водных растворов (соответствует значению изоэлектрической точки аминокислоты – значения pH, при котором одинаковы концентрации положительно и отрицательно заряженных форм).
ЛС |
pH водного раствора |
Аминалон (ГАМК ) |
(5%) 6,5-7,5 |
Кислота аминокапроновая |
(20%) 7,5-8,0 |
Метионин |
(2,5%) 5,5-6,0 |
Кислота глутаминовая |
(5%) 3,1-3,7 |
Цистеин |
(2,5%) 4,5-5,5 |
Ацетилцистеин |
(20%) 7,0-7,5 |
Пирацетам |
(20%) 5,0-7,0 |
3. Предельное содержание общих примесей – хлоридов, сульфатов, железа; сульфатная зола и тяжелые металлы.
4. Посторонние примеси определяются методом ТСХ (кислота глутаминовая) или ВЭЖХ (пирацетам). Более подробно характеристка методов ТСХ и ВЭЖХ приведена в ГФXI издания.
ТСХ:
Пятно любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности окрашивания не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (0,25 мкг) (не более 0,5 %).
ВЭЖХ:
Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика любой примеси должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %); суммарная площадь пиков примесей должна быть не более трехкратной площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3 %).