4.2.1. Топический анализ субмикроскорической организации растущих сосудов

Для анализа ультраструктурной организации образующихся со­судов были проведены эксперименты по повреждению роговицы с помощью нитрата серебра. На третьи сутки после «ожога» рогови­цы вновь сформированные капилляры видны как самостоятель­ные образования, тянущиеся от сосудов лимба (рис.12В, 13А-Г). ЭК, формирующие растущие капилляры, утолщены. Отмечается неровность клеточной мембраны, она отдает многочисленные вы­росты как в просвет сосудов, так и в периваскулярную ткань. Эндотелиоциты полиморфны по ультраструктурной организации: в цитоплазме клеток скудное содержание микровезикул, гипертрофированмитохондрии и пластинчатый комплекс, расширены цистерны гладкой и гранулярной цитоплазматической сетей, повышено содержание свободных рибосом, постоянно встречаются тельца Вейбеля-Паладе. Значительного развития достигают эле­менты цитоскелета. Микротрубочки ориентированы преимущест­венно вдоль длинной оси клеток и определяются в цитоплазматических отростках, а микрофиламенты формируют плотные пучки в околоконтактной зоне клетки. БМ вокруг почек роста не определяется и соединения ЭК с перицитами отсутствуют. ЭК образуют цитоплазматические выросты (рис.12А). Следова­тельно, эндотелиоциты «почек» роста - это незрелые, мало диффе­ренцированные клетки. Нередко в стенках предсуществующих сосудов формируется просвет нового (рис.12Б).

Через 8 суток после инициации ангиогенеза трубка новообразо­ванных капилляров представлена ЭК, имеющими выраженный полиморфизм структурной организации и функциональных свойств на протяжении ростка. Мы выделили три зоны (рис.14): 1) участок недифференцированного эндотелия, верхушка роста (в пределах 50 - 100 мкм от верхушки) - зона, аналогичная по своим свойствам «почкам» роста; 2) переходная зона длиной 500-700 мкм (характерная особенность - максимальное развитие всех транспортных коммуникаций: микровезикул, трансэндотелиальных каналов, фенестр, открытых межклеточных соединений); 3) зона относительно дифференцированного эндотелия протяженно­стью 150-200 мкм (в месте отхождения ростка от родительского сосуда, структура эндотелиоцитов здесь близка к морфологии ЭК материнских сосудов).

В первой зоне ЭК отличаются слабой дифференцированностью, микровезикулы единичны, просвет сосуда составляет только 1/10 часть от площади сосудистого профиля, что обусловлено не только большой толщиной эндотелиоцитов, но и большим числом выро­стов (рис.14, 15).

Переходная зона характеризуется истончением эндотелиального пласта. Только одна четвертая часть от площади капиллярного профиля приходится на эндотелиоциты, все остальное занимает просвет сосуда (рис.15, 17). Отмечается появление фенестр. Меж­клеточные контакты не содержат замыкательных комплексов. Микровезикулы, связанные с плазмалеммой, формируют трансэндотелиальные каналы или образуют при слиянии вакуоли. Свобод­но расположенные везикулы в цитоплазме клеток крайне редки. Обилие транспортных каналов в этой зоне приводит к повышен­ной проницаемости сосудистой стенки для белка. Растительная пероксидаза, введенная в сосудистое русло, проникает в интерстиций в этой зоне роста через открытые межклеточные щели, трансэндотелиальные каналы, фенестры (рис.16А). Наличие прерывистой, рыхлой базальной мембраны и перицитов не является препятст­вием для раннего обнаружения маркера в периваскулярных тканях (рис.16).

В области третьей зоны стенка микрососуда полностью окруже­на БМ, в растеплениях которой лежат перициты, местами вступа­ющие в контакты с ЭК. В цитоплазме ЭК увеличивается содержание микровезикул, число их приближается к показателю, характерному для дефинитивных капилляров данной зоны. Тол­щина эндотелия здесь несколько больше, чем в дефинитивных ка­пиллярах, и существенно ниже, чем во второй зоне. Фенестры в ЭК уже не встречаются. Транспорт макромолекул осуществляется пре­имущественно с помощью микровезикул, как и в дефинитивных капиллярах (рис.14,15В,16Б).

На 8-е сутки одновременно с ростом кровеносных отмечается и рост лимфатических капилляров. Обычно растущие лимфатиче­ские сосуды расположены в непосредственной близости от расту­щих кровеносных капилляров. В отличие от ЭК дефинитивных лимфатических капилляров, ЭК, формирующие стенку лимфати­ческого ростка, утолщены, содержат в цитоплазме мало везикул. Межклеточные контакты - открытого типа, что приводит к попада­нию инъецируемой в кровоток растительной пероксидазы в про­свет лимфатических капилляров. Регистрируется гипертрофии митохондрий и цитоплазматической сети, пластинчатого комп­лекса.

В поздние сроки ожога (на 20-24-е сутки) наблюдается ремоделирование и соединение растущих сосудов в сети: формируются вторичная, третичная, иногда четвертичная сети микрососудов по отношению к капиллярам сосудистой сети лимба глаза (рис.14Д). При этом происходят два сопряженных процесса: дифференцировка артериол, капилляров и венул, в которых наблюдается специализация эндотелиоцитов, выстилающих эти сосуды. Капил­ляры, которые кровоснабжаются плохо, со временем исчезают.