2.2.2 Диагностика генитальной и экстрагенитальной патологии
Фоновую генитальную и экстрагенитальную патологию диагностировали общепринятыми лабораторными и инструментальными методами: использовали клинический анализ крови, общий анализ мочи, биохимические анализы крови, эндоскопические методы и лучевую диагностику (ультрасонография, рентгено- графия, компьютерная и магнитно-резонансная томография), определяли уровни тропных, яичниковых, тиреоидных, надпочечниковых гормонов в сыворотке кро- ви, Для исключения заболеваний шейки матки проводили цитологическое иссле- дование мазков из эндо- и эктоцервикса с оценкой по двухуровневой системе Be- thesda (2001 г.) и кольпоскопию.
2.2.3 Иммунологические методы
Объектами для иммунологического исследования служили образцы крови, сыворотки и вагинальные смывы больных и женщин из контрольной группы.
Кровь и сыворотку использовали для оценки общей иммунореактивности следующими методами:
– иммуноцитохимический метод с использованием моноклональных анти- тел фирмы «DАКО» для иммунофенотипирование субпопуляций лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, CD16, соотношение CD4/CD8);
– спонтанный и активированный тест восстановления нитросинего тетразо- лия (НСТ-тест) для изучения функциональной активности нейтрофилов: опреде- ление фагоцитарного числа, коэффициента киллинга;
– метод радиальной диффузии по Манчини для определения уровня имму- ноглобулинов (Ig) класса G, А, М;
– иммуноферментный анализ с использованием коммерческих наборов
«Цитокин» для определения спонтанной и индуцированной фитогемагглютини- ном продукции ИФН-γ и индуцированной вирусом болезни Ньюкастла продукции ИФН-α в супернатантах цельной крови.
Для оценки местного иммунитета слизистой оболочки влагалища материа- лом для исследования был выбран вагинальный секрет – вагинальные смывы.
Вагинальные смывы (ВС) собирали после орошения влагалища 5 мл сте- рильного физиологического раствора. После центрифугирования лаважа при
1000 об/мин в течение 5 мин, отделяли надосадочную жидкость, образцы которой хранили до момента постановки при – 20С0. В собранных биосубстатах определя- ли уровни различных цитокинов методом твердофазного иммуноферментного анализа: α-ИФН и γ-ИФН, С5а, интерлейкины ИЛ-1β, ИЛ-4, ИЛ-8 и ИЛ-10 (ООО
«Цитокин», Россия), лейкоцитарной эластазы (ЛЭ), ТФР-β (Bender Med systems,
Австрия).
2.3 Статистическая обработка полученных результатов
Для статистического анализа полученных результатов создана компьютер- ная база данных в пакете Microsoft Office Excel 2007. Разработана карта обследо- вания больного, состоящая из одиннадцати блоков и 83 признаков:
первый
блок
–
паспортные
данные
(фамилия,
имя,
отчество,
возраст),
номер
амбулаторной
карты
и/или
истории
болезни,
дата
первичного
осмотра;
второй блок – данные анамнеза заболевания (длительность заболевания в месяцах, количество рецидивов заболевания в течение последнего го- да, характер проводимого ранее лечения и длительность периодов ре- миссии после того или иного вида лечения);
третий блок – данные анамнеза жизни (возраст наступления менархе, особенности менструальной функции, количество половых партнеров, характер полового поведения, количество беременностей, родов, арти- фициальных и самопроизвольных абортов, использование различных методов контрацепции);
четвертый блок – характеристика жалоб больных: жалобы оценивали качественно (по наличию или отсутствию) и количественно – по интен- сивности проявления (в баллах);
пятый блок – фоновая гинекологическая патология (воспалительные и гормонозависимые заболевания внутренних гениталий, патология шейки матки, нарушения менструального цикла, сведения о перенесенных ги- некологических операциях и консервативном лечении);
шестой блок – экстрагенитальная патология (заболевания щитовидной железы, патология верхних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной системы). Оценка признаков – качественно (да, нет);
седьмой блок – данные объективного осмотра (наличие признаков вос- паления слизистых оболочек вульвы, влагалища, эктоцервикса, уретры,
кожи перигенитальной и перианальной области), уровень рН вагиналь- ного содержимого. Оценка результатов – в баллах и качественная;
восьмой и девятый блоки – результаты цитологического, бактериологи- ческого и микологического исследования; данные этих блоков формиро- вали этиологический компонент клинического диагноза;
десятый блок – результаты иммунологического обследования (показате- ли общего и локального иммунитета);
одиннадцатый блок – результаты лечения больных ХРКГ с использова- нием антимикотических и иммунологических препаратов (жалобы и объективные проявления воспаления, результаты микроскопии и посе- вов, данные иммунологического исследования вагинальных смывов по-
сле проведенного лечения).
Для анализа распределений изучаемых показателей использовался критерий Колмогорова-Смирнова. Для малых групп распределение считалось близким к нормальному при близости средних значений и медиан, а также при условии, что стандартизованные значения коэффициентов асимметрии и эксцесса по абсолют- ному значению не превышали число 2. В качестве статистических характеристик групп для количественных показателей приведены средние и стандартные ошиб- ки средних – при близости распределений изучаемых показателей к нормальному закону, в противном случае – медианы и межквартильный размах (МКР). Для ка- чественных и порядковых показателей приведены частоты значений. В связи с тем, что большинство количественных показатели имело распределение, не соот- ветствующее нормальному закону, для сравнения групп использовали непарамет- рические критерии: тест Краскала-Уоллиса для сравнения по всем группам и тест Манна-Уитни для попарных сравнений между группами.
уровне значимости р < 0,05. Статистическая обработка данных была проведена с использованием программы SPSS Statistics (Statistical Package for the Social Sci- ences), версия 17.0.