3 курс / Фармакология / Миронов_А_Н_,_Бунатян_Н_Д_и_др_Руководство_по_проведению_доклинических

Список литературы.

Приложение: таблицы индивидуальных показателей и результаты их статистической обработки по всем изученным тестам, индивидуальное описание гистологических изменений органов и тканей лабораторных животных.

	Приложение 1
Перечень рекомендуемых тестов
Рекомендуемые исследования	Рекомендуемые тесты и показатели
Интегральные показатели	Внешний вид, поведение, симптомы интоксикации,
	масса тела (еженедельно), суточное потребление кор-
	ма и воды (еженедельно)
Гематологические исследования	Содержание в периферической крови эритроцитов,
	тромбоцитов, ретикулоцитов, лейкоцитов, лейкоци-
	тарная формула, гемоглобин, гематокрит, коагуло-
	грамма, резистентность эритроцитов
Биохимические исследования	В сыворотке крови: общий белок, белковые фракции,
	общий холестерин, общие липиды, глюкоза триглице-
	риды, активность основных ферментов, имеющих диа-
	гностическое значение (ЩФ, АЛТ, АСТ, ЛДГ и др.)
	В моче: концентрация мочевины, креатинина, глюко-
	зы, белка
Физиологические исследования	Частота сердечных сокращений, параметры ЭКГ во
	втором отведении.
	Диурез, рН, относительная плотность мочи, мочевой
	осадок.
	Ритм и глубина дыхания.
	Поведение в тесте «открытое поле»
Патоморфологические	Вскрытие, макроскопическое описание картины
исследования	органов и тканей, места введения, определение отно-
	сительной массы органов, гистологические исследо-
	вания головного мозга, сердца, печени, почек, легких,
	селезенки, тимуса, надпочечников, желудка, кишеч-
	ника, мочевого пузыря, поджелудочной железы,
	щитовидной железы, лимфоузлов, костного мозга,
	семенников, яичников и места введения

							Приложение 2
	Максимально допустимые объемы введения жидкостей (в мл)
для некоторых видов лабораторных животных в зависимости от пути введения
Вид	Масса			Путь введения
							в брюшную
животного	тела (г)	в желудок	под кожу	в мышцу		в вену
							полость
Мышь	20–24	0,5	1,0	0,5		0,5	1,0
	25–30	0,8	1,0	0,5		0,5	1,0
	> 30	1,0	1,0	0,5		0,5	1,0
Крыса	100–200	3,0	10	5,0		2,0	5,0
	200–240	5,0	10	5,0		2,0	5,0
	240–300	6,0	10	5,0		2,0	5,0
	> 300	8,0	10	5,0		2,0	5,0
Морская	250–300	5,0	15	5,0		8,0	5,0
свинка

21

Вид

Масса

Путь введения

в брюшную

животного

тела (г)

в желудок

под кожу

в мышцу

в вену

полость

Кролик

2000–

2400

100

30

15

20

30

2400–

3000

150

30

15

20

30

> 3000

300

30

15

20

30

Соотношение между массой и площадью

Приложение 3

поверхности тела человека и лабораторных животных

Объект

Масса

Поверхность

Соотношение

Коэффициент пересчета доз

тела (г)

тела (см2)

(см2/кг)

(мг/кг) с животных на человека

Человек

70 000

18 000

257

–

Кролик

1 500

1 240

826

3,2

Морская

свинка

400

480

1200

4,7

Крыса

200

304

1517

5,9

Мышь

20

61

3050

11,8

Приложение 4

Основные физиологические параметры животных, использующихся

при исследовании острой и хронической токсичности

Морские

Собаки

Параметр

Мыши

Крысы

Кролики

(лабораторные

свинки

породы)

Продолжительность жизни

1–2,5

2–3

4–6

5–7

12–14

(годы)

Масса взрослых самцов (г)

20–35

350–400

1000–1200

3000–5500

6–25

Масса взрослых самок (г)

20–35

180–200

850–900

3000–5500

6–25

Масса при рождении (г)

1–1,5

5–6

90–120

40–60

300–500

Потребление корма (г/

5–10

15–20

20–30

75–100

250–1200

сутки)

Потребление воды (мл/

3–7

20–30

12–15

80–100 мл/

100–400

сутки)

кг

Половое созревание самцов

1,5–2–

2,5–3/300

2,5–3/600

4–7/2,5–4

9–12

(мес/вес)

8/20

Половое созревание самок

1,5–

2–3/200

7–8/350

4–7/2,5–4

10–12

(мес/вес)

2/20

Эстральный цикл (дни)

4–5

4–5

16–18

Полиэструс

Дважды в год

Продолжительность бере-

19–21

20–22

65–70

30–32

56–58

менности (дни)

Прекращение подсосного

21/8–12

21/35–44

7–14/

8–30/1–1,5

6–8/15–45

периода (день/вес)

150–200

Средний размер помета

10–12

8–12

2–5

4–12

4–8

(особи)

22

				Морские		Собаки
	Параметр	Мыши	Крысы		Кролики	(лабораторные
				свинки
						породы)
	Рекомендуемая схема спа-	1:1 или	1:1 или	1:1 или	1:1	1:1 или 1:n
	ривания	1:n	1:n	1:10
	Объем крови (от массы тела)	6–7%	6–7%	6–7%	6%	8–9%
	Максимальный объем за-	7–8	6–7	7–8	6,5–7,5	8–10
	бора крови (мл/кг)
	Эритроциты (×1012/л)	7–12×	6–10×	4,5–7×	4,5–7×	5,5–8,5×
	Лейкоциты (×109/л)	3–12×	7–14×	5–15×	5–12×	6–14×
	Гемоглобин (г/л)	130–170	110–180	110–170	110–140	130–180
	Гематокрит	40–54%	34–48%	39–47%	32–48%	38–52%
	Частота сердечных сокра-	300–600	250–500	230–300	250–330	80–140
	щений (мин)
	Частота дыхания (мин)	90–160	80–150	60–110	35–55	10–30
	Ректальная температура	37,5 °С	37,5 °С	39,5 °С	39,5 °С	38,5 °С
	(максимальное значение
	нормы)
	рH мочи	6.0–7,5	6.0–7,5	8,0–9,0	8,2	7,0–7,8
	Объем мочи (мл/день)	1–3	10–15	15–75	50–130	25–45 (на кг)
					(на кг)
	Число хромосом (2n)	40	42	64	44	78

Литература

1.Беленький М.Л. — В кн.: Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. — Л., 1968. — 151 с.

2.Березовская И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения // Хим.-фарм. журн. — 2003. — Т. 37. — № 3. — С. 32–34.

3.Березовская И.В., Иванова В.М. Актуальные проблемы безопасности дженериков //Бюллетень ВНЦ БАВ. — Старая Купавна, 2002. — С. 37–52.

4.Березовская И.В., Митрохин Н.М // Экспресс-методы определения острой токсичности // Бюллетень ВНЦ БАВ. — М., 1990. — С. 45–67.

5.Балынина Е.С, Березовская И.В. Сравнительная оценка методов определения ориентировочной реакции крыс в токсикологическом эксперименте // Фарм. и токсикол. — 1976. — № 5. —

С.635–638.

6.Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсикологического действия. — Л.: Медицина, 1986. — С. 279.

7.Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. — Москва, 2008. — 196 с.

8.Куценко С.А. // Основы токсикологии. — СПб.: Фолиант, 2004. — 720 с.

9.Липперт Г. Международная система единиц в медицине. — М.: Медицина, 1980. —С. 208.

10.Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. проф. В.В. Меньшикова. — М.: Медицина, 1987.

11.Методы определения токсичности и опасности химических веществ (токсикометрия) / Под ред. проф. И.В. Саноцкого. — М.: Медицина, 1970. — С. 343.

12.Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского и В.А. Филова. — М.: Медицина, 2002. — С. 606.

13.Проблема нормы в токсикологии / Под ред. проф. И.М. Трахтенберга. — М.: Медицина, 1991. —

С.204.

14.European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986.

15.Freireich E., Gehan E.A., Rail D.E, et al. Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey and man // Cancer Chemother. Res. 1966. — Vol. 50 — № 4. — P. 219–244.

16.Handbook of Toxicology, Second Edition, Ed. by M.J. Derelanko, M.A. Hollinger, CRC Press, 2002.

23

17.Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers./ Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER), 2005.

18.ICH Guideline M3: Non-clinical safety studies for the conduct of human clinical trials for pharmaceuticals (CPMP/ICH/286/95).

19.ICH Guideline S4: Duration of chronic toxicity testing in animals (rodent and non-rodent toxicity testing) (CPMP/ICH/300/95).

20.Lim R.K., Rink K.G., Glass H.G., Soaje-Echague E. // A method for the evaluation of cumulation and tolerance by the determination of acute and subchronic median e ective doses / Arch Int Pharmacodyn Ther. 1961; 130: 336–353.

Особенности исследования общей токсичности нанопрепаратов, воспроизведенных ЛП, ЛП природного происхождения, препаратов для педиатрической практики даны в дополнениях к настоящему документу.

ДОПОЛНЕНИЕ 1

ОСОБЕННОСТИ ИЗУЧЕНИЯ ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И СРЕДСТВ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИХ НАНОЧАСТИЦЫ

Составители: д. м. н., проф., член-корр. РАМН А.Д. Дурнев; д. м. н., проф. Е.В. Арзамасцев;

д.м. н., проф. В.М. Бухман; д. м. н., проф. И.А. Дятлов; к. б. н. В.В. Фирстова;

д.м. н., проф. В.П. Холоденко; д. б. н. В.Н. Герасимов; к. м. н. А.С. Соломина;

к.б. н. В.Д. Потапов, д. м. н., проф. А.А. Чурин

Введение

Вещества в наноформе могут обладать иным токсическим действием, чем в обычном физико-химическом состоянии. В этой связи характеристика потенциального риска для здоровья человека фармакологических веществ и средств медицинского применения, содержащих наночастицы, является обязательной.

Современная система доклинической токсикологической оценки ЛС, ориентированная на тестирование химических соединений, не вполне адекватна для оценки лекарственных нанопрепаратов в силу различий в характере распределения и выведения, времени экспозиции тестируемых агентов, сроках проявления возможных токсических эффектов и т.п.

Имеющиеся в настоящее время фундаментальные исследования по нанотоксикологии скудны и не дают научно обоснованной базы для создания всеобъемлющего документа, регламентирующего исследование общетоксического действия фармакологических веществ и средств медицинского назначения, в состав которых входят наночастицы. Настоящий документ имеет промежуточный характер и предложен в качестве дополнения к «Методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия ЛС». Он отражает специфические особенности исследований токсического действия нанолекарств и других средств медицинского назначения, в состав которых входят наночастицы с акцентом на прогностическую оценку возможных отдаленных последствий.

1. Понятия и термины

Наночастицы – высокодисперсные, гомогенные по структуре частицы размером менее 100 нм хотя бы в одном измерении, характеризующиеся физико-химическими свойствами, отсутствующими у исходных материалов (измененные термодинамические характеристики (температура, фазовые переходы, форма «кривых плавления»); каталитическая активность; химическая реакционная способность; «квантовые» эффекты (оптический, электрический, магнитный, кристаллографический) и т.д.).

Нанопрепараты – лекарственные формы или средства медицинского назначения, содержащие наночастицы.

2. Нормативный материал

Экспериментальная оценка общетоксического действия фармакологических веществ и средств медицинского назначения, содержащих наночастицы, базируется на общих принципах доклинической лабораторной практики в соответствии с приказом Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н.

25

Основными документами, регламентирующими объем, схему и процедуру проведения экспериментов по исследованию безопасности фармакологических веществ, полученных на основе нанотехнологии, являются:

1.Федеральный Закон № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств».

2.Федеральный Закон № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

3.Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 224 от 19.07.2007 г. «О санитарно-эпидемиологических экспертизах, обследованиях, исследованиях, испытаниях и токсикологических, гигиенических и иных видах оценок».

4.Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 23 июля 2007 года № 54 «О надзоре за продукцией, полученной с использованием нанотехнологий и содержащей наноматериалы».

5.Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31 октября 2007 года № 79 «Об утверждении Концепции токсикологических исследований, методологии оценки риска, методов идентификации и количественного определения наноматериалов».

6.Методические рекомндации (МР) 1.2.2566-09. Оценка безопасности наноматериалов in vitro и в модельных системах in vivo: Методические рекомендации. — М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. — 69 с.

7.МР 1.2.2522-09. Методические рекомендации по выявлению наноматериалов, представляющих потенциальную опасность для здоровья человека. Методические рекомендации. — М.: Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. — 35 с.

8.МР 1.2.2639-10. Использование методов количественного определения наноматериалов на предприятиях наноиндустрии.– М.: Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. — 79 с.

По мере накопления новых сведений, раскрывающих особенности тестирования токсичности наночастиц, несомненна необходимость гармонизации с международными стандартами International Organization for Standardization — ISO, группой международной Организации экономического сотрудничества и развития (ОЭСР) и научным комитетом — The Scientific Committee on Emerging and Newly Identified Health Risks (SCENIHR).

3. Условия проведения исследований

Работа с фармакологическими веществами, имеющими в своем составе наночастицы, должна проводиться высококвалифицированными специалистами в вытяжных шкафах, оборудованных ULPA фильтрами. Условия проведения работы должны соответствовать требованиям, указанным в Приказе Роспотребнадзора от 19.07.2007 г. № 224 «О санитарно-эпидемиологических экспертизах, обследованиях, исследованиях, испытаниях и токсикологических, гигиенических и иных видах оценок».

3.1. Общие положения

Токсикологические исследования обязательны для всех нанопрепаратов, независимо от того, оригинальное или известное фармакологическое вещество или какой-то иной материал использованы в их составе.

Если лекарственный нанопрепарат содержит наночастицы и/или вспомогательные вещества (стабилизаторы, растворители и т. п.), не разрешенные для применения в медицинской практике, то каждое из них подвергают отдельному токсикологическому исследованию. При комбинации нескольких фармакологических веществ в одной лекарственной форме (фиксированная комбинация) изучают токсичность комбинации в целом и каждого ингредиента в отдельности, если он не был ранее разрешен для приме-

26

нения в медицинской практике. При изменении способа получения фармакологического вещества или лекарственной формы проводится повторная токсикологическая оценка на одном наиболее чувствительном виде животных, который определяется исходя из данных первоначальных исследований. Недопустимо измельчать лекарственные формы, предназначенные для регулируемого высвобождения вещества, если это специально не предусмотрено разработчиком.

При изменении количественного соотношения ингредиентов в лекарственной форме или увеличении дозировки действующего вещества, ведущих к изменению фармакодинамики и фармакокинетики нанопрепарата, следует провести повторную оценку его токсичности на одном наиболее чувствительном виде животных, который определяется исходя из данных первичных исследований.

3.2. Сведения о лекарственном нанопрепарате

Для проведения токсикологического изучения необходимо иметь характеристику субстанции (предварительную нормативную документацию; проект ФС) фармакологического вещества (Приложение 1), согласно которой оно идентифицируется, устанавливаются пределы содержания примесей, определяется его стабильность. Дается также характеристика (проект ФСП) лекарственного нанопрепарата и вспомогательных веществ, использованных при ее получении (наночастицы, растворители, наполнители, стабилизаторы и др.).

Следует иметь данные о способе приготовления раствора для введения, растворимости, гидрофобности или липофильности фармакологического вещества, наночастиц, а также данные о химическом составе, адгезивности, размере, форме, поверхностных характеристиках (заряд), химической реактивности наночастиц, их биодеградации и порядка их организации в ЛП. Желательно иметь данные об изменении свойств наночастиц под действием температуры, магнитного поля, облучения и при попадании в биологические жидкости.

Сведения о структуре, физико-химических свойствах, растворимости, условиях хранения, фармакологической активности с представлением данных экспериментальных исследований, предполагаемых дозах и путях введения в клинике, а также другая значимая для проведения исследования информация о свойствах субстанции фармакологического вещества или его лекарственной формы предоставляются разработчиком.

Дополнительно к обычно употребляемым размерностям в мг на 1 кг массы (мг/кг) или мг на 1 м2 (мг/м2) поверхности тела животного дозы лекарственного нанопрепарата целесообразно выражать как отношение количества наночастиц к массе препарата (1012 мг-1) и отношение площади поверхности наночастиц к массе препарата (см2/мг).

3.3.Количественная и качественная оценка наночастиц

влекарственном препарате

Гигиеническое нормирование содержания искусственных наночастиц в ЛП требует наличия методов, выявления, идентификации и количественного определения наночастиц. В числе методов, существующих в настоящее время, наиболее разработанным и надежным применительно к идентификации и выявлению искусственных наночастиц является электронная микроскопия. Она позволяет определять число, размер, форму, кристаллическую структуру, химический состав электроноплотных веществ в диапазоне размеров 1–100 нм.

Лекарственное вещество в порошкообразной форме растворяют в соответствии с указаниями в инструкции по применению препарата, в жидкой форме − суспензируют. Проводят электронно-микроскопические исследования, анализируя структурные и морфометрические характеристики фармакологического вещества (Приложение 2).

Токсические свойства наночастиц зависят от их размеров и структурной организации. Чем меньше размер наночастицы, тем больше вероятность индукции воспаления,

27

активации синтеза цитокинов, усиления цитотоксичности. Образование конгломератов наночастиц приводит к изменению физико-химических свойств препарата.

Результаты и заключение электронно-микроскопической визуализации и идентификации наночастиц в ЛП содержат информацию о форме и размерах наночастиц, данные о степени агрегированности наночастиц, сведения о характере распределения наночастиц в образцах, данные степени загруженности препарата наночастицами, информацию о характере структурного взаимодействия наночастиц с остальными водонерастворимыми компонентами препарата и электронно-микроскопические изображения наночастиц и других компонентов ЛП.

4. Особенности оценки «острой» токсичности нанопрепаратов

Исследуется «острая» токсичность как самого фармакологического вещества или средств медицинского назначения, содержащих наночастицы, так и его составляющих по отдельности: наночастиц, активного вещества и других компонентов лекарственной формы, если они не были ранее разрешены к использованию в составе ЛС.

Результаты исследований показывают, что проявление токсических свойств наночастиц в значительной мере зависит от пути их поступления в организм. Это означает, что суждение об острой токсичности нанопрепаратов может базироваться исключительно на результатах, полученных в исследованиях, обеспечивающих тот путь введения, который будет использоваться в клинике.

Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании острой токсичности нанопрепаратов должна составлять не менее 30 дней после последнего случая гибели животного. В первый день после введения животные должны находиться под непрерывным наблюдением.

Остальные параметры и процедуры оценки острой токсичности, а также рекомендуемая форма представления результатов не отличаются от типичных, описанных в базовом документе «Методические рекомендации по изучению общетоксического действия ЛС».

5. Исследование кумуляции нанопрепаратов

Исследование кумулятивного действия фармакологического вещества или средств медицинского назначения, содержащих наночастицы, является проблемой, не получившей должного освещения в современной литературе. Очевидно, что применение традиционных подходов, основанных на повторяющихся введениях 0,1 ЛД50 (Lim et al (1961), Ю.С. Коган, В.В. Станкевич (1964), не может быть адекватным в связи с принципиально иной динамикой манифестации токсических эффектов нанопрепаратов по сравнению с химическими соединениями в макродисперсной форме. В то же время кумуляция токсических эффектов неизбежно будут выявляться в ходе проведения исследований хронической токсичности, что позволяет временно отложить вопрос о специальном изучении кумулятивного действия нанопрепарата.

6.Особенности оценки токсичности нанопрепаратов

вхроническом эксперименте

Вэкспериментах по изучению хронической токсичности используют три дозы нанопрепарата. Дозы рассчитываются по количеству действующего вещества в составе лекарственной формы. Путь введения аналогичен клиническому; если рекомендуется несколько путей введения, то следует провести оценку при введении нанопрепарата всеми используемыми способами.

Введение максимальной дозы предполагает выявление возможных токсических эффектов и гибель части животных. Эта доза может быть определена из данных по острой токсичности. Минимальная доза должна быть близка к терапевтической дозе, рекомендуемой для клинического изучения. Третья доза является промежуточной.

28

Основные изучаемые группы:

1.Контроль.

2.Группа животных, получающая нанопрепарат в минимальной дозе, включающая «отставленную», или, при необходимости изучения динамики, несколько «отставленных» подгрупп.

3.Группа животных, получающая нанопрепарат в максимальной дозе, включающая «отставленную», или, при необходимости изучения динамики, несколько «отставленных» подгрупп.

4.Группа животных, получающая нанопрепарат в дозе промежуточной между минимальной и максимальной дозами, включающая «отставленную», или, при необходимости изучения динамики, несколько «отставленных» подгрупп.

Постановка соответствующих контролей обязательна. При наличии в лекарственной форме наночастиц, не разрешенных к применению, обязательно проведение параллельного исследования их токсичности в тех же дозах, в которых они были использованы при исследовании лекарственной формы.

В качестве «положительного» контроля необходимо использовать наночастицы в дозе, эквивалентной дозе лекарственной формы нанопрепарата, если в обоих вариантах физико-химические характеристики (заряд, структура) наночастиц аналогичны.

Фармакологические вещества, предназначенные для ежедневного применения у человека, вводят лабораторным животным 7 дней в неделю.

В связи с предполагаемым разнообразием возможных нанолекарств, их различных вариантов фармакокинетических характеристик и проявления токсических эффектов определение длительности введения нанолекарств является сложной задачей, не имеющей удовлетворительного научного решения из-за отсутствия достаточных фундаментальных знаний по общей токсикологии наночастиц. По аналогии с правилами, действующими при определении продолжительности введения фармакологически активных химических соединений в макродисперсной форме, представляется целесообразным связать в исследовании продолжительность введения фармакологического вещества или средств медицинского назначения, содержащих наночастицы, с длительностью планируемого клинического курса применения в соответствии с таблицей, приведенной ниже, при условии обязательной постановки «отставленных» групп и срока наблюдения

в«отставленных» группах не менее 60 дней.

Таблица

Продолжительность введения фармакологического вещества или средств медицинского назначения, содержащих наночастицы, в хроническом токсикологическом исследовании

Планируемая продолжительность	Продолжительность введения
применения в клинике	в доклиническом исследовании
Однократное введение	14 дней
2–14 дней	Не менее 30 дней
15–30 дней	Не менее 60 дней
Свыше 30 дней	Не менее 180 дней (6 мес.)

Еще одной особенностью лекарственных нанопрепаратов могут явиться изменения функциональной активности системы мононуклеарных фагоцитов, индукция окислительного стресса и воспаления, как это было показано для большинства исследованных наночастиц различного происхождения. Это делает необходимым расширение спектра параметров, оцениваемых в токсикологическом исследовании, принятом для химических веществ, за счет тестов, позволяющих оценить функциональное состояние фагоцитов и антиоксидантной системы, экспрессию маркеров воспаления и уровень окислительных

29

процессов и связанных с ним повреждений, а также структуры и функции центральной нервной системы (ЦНС) и почек как возможных основных мишеней токсического действия нанопрепаратов.

Способность некоторых наночастиц взаимодействовать с ДНК определяет возможное проявление лекарственным нанопрепаратом генотоксических и мутагенных свойств. В связи с этим необходимо расширить оценку мутагенной активности нанопрепаратов, т.е. проводить ее не только в рамках стандартной оценки специфических видов токсичности, но также в группах животных по окончанию хронического введения с использованием метода учета цитогенетических повреждений в клетках костного мозга и методом учета «ДНК-комет» в клетках печени, крови, головного и костного мозга.

Для анализа накопления, перемещения и биоустойчивости лекарственных нанопрепаратов, в зависимости от их состава, следует использовать методы магнитнорезонансной томографии (например, с применением полиамидомина/полипропиленамина дендример-гадолиниевых хелатов для выявления дендримеров), электронной микроскопии (для выявления металлических наночастиц, углеродных нанотрубок), флюоресцентной спектроскопии (для выявления нанокристаллов) или радиометки (обнаружение фуллеренов, углеродных нанотрубок).

Список рекомендуемых тестов с использованием лабораторных животных приведен в Приложении 3. Остальные параметры и процедуры оценки хронической токсичности, а также рекомендуемая форма представления результатов не отличаются от типичных, описанных в базовом документе «Методические рекомендации по изучению общетоксического действия ЛС» настоящего Руководства.

Заключение должно содержать мнение исследователей о степени опасности острого и хронического отравления на основании проведенных исследований, прогноз возможных побочных реакций и необходимых ограничений использования лекарственной формы нанопрепарата при КИ.

7. Схема отчета об исследовании общетоксического действия нанопрепарата

Отчет должен содержать следующие разделы: титульный лист, список исполнителей, оглавление, реферат, введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты проведенных исследований, заключение, список литературы, приложение.

Титульный лист: содержит название организации-исполнителя, утверждение отчета, заверенное подписью руководителя учреждения и печатью организации, название отчета, должность, фамилию, имя, отчество и подпись руководителя проведенных исследований.

Список исполнителей: ответственный исполнитель, исполнители — фамилия, имя, отчество, должность, степень, звание, подпись.

Оглавление: перечень разделов с указанием страниц отчета. Введение: цели и задачи исследования.

Обзор литературы: информация об оригинальном препарате, нанопрепарате или литературные сведения о воспроизведенном препарате.

Материалы и методы: физико-химическая характеристика субстанции и лекарственной формы, их соответствие проекту нормативной документации (ФСП, ФС или количественный и качественный состав лекарственной формы воспроизведенного ЛП, серия, соответствие проекту ФСП).

Характеристика использованных лабораторных животных (источник получения, масса, возраст, пол, условия содержания).

Схема эксперимента, обоснование выбранных доз.

Описание методов исследования и метода статистической обработки данных.

Результаты проведенных исследований: описание острой токсичности и хронической токсичности в соответствии с полученными достоверными изменениями изучен-

30