ЭНЗИМОДИАГНОСТИКА

Энзимодиагностика – это исследование активности ферментов плазмы крови, мочи, слюны с целью диагностики тех или иных заболеваний.

Примером может служить фермент лактатдегидрогеназа. Кто хорошо готовился к прошлому занятию и внимательно читал файл, тот помнит, что ЛДГ имеет 5 изоформ – ферментов, катализирующих одни и те же реакции, но отличающиеся первичной структурой белка. Изоформы чаще всего являются органоспецифичными. Продублирую некоторые моменты из прошлого файла.

ЛДГ состоит из 4х субъединиц двух типов –

М(muscule – мышца) и H(heart – сердце). Определённая комбинация этих субъединиц как

раз и приводит к появлению

изоформ.

ЛДГ1 и ЛДГ2 наиболее активны в сердечной мышце и почках. Значит, они состоят преимущественно из субъединиц H(сердце)

ЛДГ4 и ЛДГ5 – в скелетных мышцах и печени. Значит, больше субъединиц М.

На еду моим общажным тараканам: 5469

При инфаркте миокарда происходит разрушение кардиомиоцитов, а их содержимое поступает в плазму крови. Исследуя плазму методом электрофореза, мы обнаружим ЛДГ, да не абы какой, а ЛДГ1 и ЛДГ2, так как они являются специфичными для сердечной мышцы. Аналогично и разрушением клеток скелетных мышц(может быть, травма),

гепатитом – при электрофорезе плазмы мы обнаружим изоформы ЛДГ4 и ЛДГ5.

Фермент α-амилаза участвует в расщеплении крахмала и гликогена до моно и дисахаридов. Увеличение активности α-амилазы в плазме крови и моче наблюдается при

воспалительных процессах в поджелудочной и слюнных железах. При воспалении или закупорке протоков поджелудочной железы, в кровь поступает большое количество фермента, при этом усиливается его выведение с мочой. В моче в основном содержится

панкреатическая амилаза.

Такая же ситуация и с креатинкиназой (КК), катализирующей реакцию образования креатинфосфата.

Она уже состоит из 2х субъединиц – М (muscle - мышцы) и В(brain - мозг). Итого мы получаем три возможные изоформы: ВВ, ВМ, ММ.

ВВ - находится преимущественно в головном мозге

ММ – в скелетных мышцах, ВМ – в сердечной мышце.

На еду моим общажным тараканам: 5469

Они, как и изоформы ЛДГ, имеют разную электрофоретическую активность.

Определение активности КК в плазме крови имеет значение при диагностике инфаркта миокарда (повышение уровня МВ изоформы). При травмах мышц – ММ формы, а вот уже ВВ не может проникнуть через гематоэнцефалический барьер (мы, конечно, все знаем, что это), поэтому даже при инсультах в крови не определяется.

Инфаркт миокарда так же сопровождается увеличением активности

аспартатаминотрансферазы – фермента, главным образом находящимся в клетках сердца и печени.

На еду моим общажным тараканам: 5469

ОБЩИЕПРИНЦИПЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АКТИВНОСТИФЕРМЕНТОВ.ЕДИНИЦЫАКТИВНОСТИ

ФЕРМЕНТОВ

Это ты тоже уже знаешь из прошлой темы. Вспоминаем кинетику! да не ругайся, это не я придумала….

Как мы можем охарактеризовать активность фермента в цифрах? Для этого нужно понять, от чего же эта самая активность зависит, и на прошлой неделе мы с тобой выяснили что это…

*барабанная дробь*

Скорость ферментативной реакции! Она является мерой каталитической активности

фермента и обозначается как активность фермента.

ТО ЕСТЬ – чем более активный фермент, тем быстрее протекает реакция, то есть увеличивается её скорость.

Эта самая скорость определяется уменьшением количества молекул субстрата или

увеличением количества молекул продукта за единицу времени.

ТО ЕСТЬ – чем активнее протекает реакция под действием фермента, тем быстрее субстрат превращается в продукт.

На еду моим общажным тараканам: 5469

ТО ЕСТЬ – концентрация субстрата уменьшается (он же превращается в продукт, он исчезает), а

концентрация продукта растёт (он же образуется, значит, накапливается в клетке)

На еду моим общажным тараканам: 5469

Донельзя логично, так ведь?)

На практике пользуются условными величинами, характеризующими активность фермента(скорость ферментативной реакции): международная единица активности (ME) соответствует такому количеству фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата за 1 минуту при оптимальных условиях (температура 37°С, оптимальное значение pH раствора) проведения ферментативной реакции. Эти единицы активности используют в медицинской и фармацевтической практике для оценки активности ферментов:

Для оценки количества молекул фермента среди других белков данной ткани определяют

удельную активность (Уд.Ак.) фермента, численно равную количеству превращенного субстрата (в мкмолях) за единицу времени одним миллиграммом (мг) белка (фермента, выделенного из ткани):

По удельной активности судят о степени очистки фермента: чем меньше посторонних

На еду моим общажным тараканам: 5469

белков, тем выше удельная активность.

На еду моим общажным тараканам: 5469