3 курс / Фармакология / Диссертация_Куркин_Д_В_Противодиабетические_свойства_и_некоторые

151

увеличилась на 22,8% и была достоверно выше (р < 0,05), по сравнению с интактной (Рисунок 24). В опытной группе на фоне введения агониста

GPR119 прирост массы тела был незначительным (+2,9%), а в группе,

получавшей метформин и комбинацию ZB-16 с метформином, масса тела уменьшилась соответственно на 3,3% и 9,7% (Рисунок 24 А).

Рисунок 24. Масса тела (А), содержание общего холестерина (Б),

ЛПНП (В), ЛПВП (Г), триглицеридов (Д) в плазме и дислипидемический

152

индекс (Е) у животных, содержавшихся 12 недель в условиях

высокожировой и калорийной диеты

Примечание: # – различия достоверны по отношению к группе «Интакт» при p < 0,05; * – различия достоверны по отношению к группе «Диета+вода» при p < 0 ,05; стрелками показаны изменения средней массы животных за 12 недель диеты (%)

Через 12 недель после перевода на диету изменения липидного спектра у животных контрольной группы по сравнению с интактной заключались в значимом повышении содержания общего холестерина и ЛПНП, а также снижении уровня ЛПВП в плазме (р < 0,05) (рис.24Б, В, Г, Д). У крыс,

которым на протяжении 12 недель вводили ZB-16, препараты сравнения и их комбинации, уровень холестерина, триглицеридов, ЛПНП был статистически значимо ниже, а ЛПВП выше, чем в группе негативного контроля (р < 0,05) (рис.24Б, В, Г, Д). Дислипидемический индекс у животных, получавших

«лечение», был также ниже (р < 0,05) значений контрольной группы

(рис.24Е).

Избыточный вес, ожирение и эндотелиальная дисфункция являются неотъемлемыми спутниками и ведущей причиной сердечно-сосудистых осложнений практически у всех пациентов с диагнозом СД2 [Дедов И.И.,

2016а; Могильницькая Л.А., 2016; Стаценко М.Е., 2016].

В современных рекомендациях по лечению СД для пациентов с сопутствующим ожирением в дебюте заболевания отмечено предпочтительное назначение гипогликемических препаратов, которые снижают массу тела (аГПП-1 и ингибиторы натрий-глюкозного ко-

транспортера 2 типа) и корректирует нарушения липидного обмена

(бигуаниды) [Дедов И. И., 2017]. По ряду исследований некоторые препараты данных групп снижают риск развития сердечно-сосудистых осложнений СД и проявляют прямое эндотелиопротекторное действие в условиях гипергликемии [Дегтярь Н. И., 2016; Shigiyama F., 2017].

Учитывая ведущую роль эндотелиальной дисфункции в развитии сердечно-сосудистых осложнений СД, для целенаправленного поиска

153

препаратов, снижающих риск осложнений, целесообразно проводить оценку эндотелиопротективного потенциала новых соединений на стадии экспериментальных исследований.

У животных контрольной группы через 12 недель диеты наблюдалась тенденция к снижению скорости мозгового кровотока (р = 0,07), при этом во всех опытных группах мозговой кровоток был на уровне интактной

(рис.25А).

Рисунок 25. Мозговой кровоток (А), число десквамированных эндотелиоцитов (Б) и изменения мозгового кровотока при введении модификаторов синтеза оксида азота (В) у животных, содержавшихся в условиях высокожировой и калорийной диеты

154

Примечание: # – различия достоверны по отношению к группе «Интакт» при p < 0,05; * – различия достоверны по отношению к группе «Диета+вода» при p <ь0,05

Число десквамированных эндотелиоцитов незначимо повышалось у контрольных животных (р = 0,09), однако в группах, получавших комбинированную терапию, данный показатель был значимо ниже (р < 0,05)

(рис.25Б).

На последнем этапе исследования у животных оценивалась выраженность эндотелийзависимых реакций сосудов при введении модификаторов синтеза оксида азота. В контрольной группе наблюдалось статистически значимое уменьшение выраженности эндотелийзависимых реакций, отражающих снижение стимулированной (уменьшение реакции на введение ацетилхолина) и базальной (уменьшение реакции на введение L-

NAME) продукции оксида азота (p < 0,05) (рис.25В). При этом, во всех опытных группах, получавших «лечение», выраженность эндотелийзависимых реакций сосудов головного мозга была на сопоставимом с интактной группой уровне.

Пандемия СД2 в значительной мере обусловлена повышением потребления высококалорийных продуктов питания, что нередко сочетается с понижением физической активностью. Развитие СД2 сопровождается формированием эндотелиальной дисфункции, которая возникает вследствие гипергликемии, а в сочетании с дислипидемией приводит к развитию атеросклероза, микро- и макроангиопатий. Эффективная профилактика эндотелиальной дисфункции и дислипидемии является ключевым звеном в снижении риска развития сердечно-сосудистых осложнений у пациентов с СД2.

Не все применяющиеся гипогликемические препараты способны снижать массу тела, улучшать липидный профиль и оказывать эндотелиопозитивное действие, что необходимо учитывать при выборе гипогликемических препаратов или их комбинаций. Необходимо отметить,

что часто лекарственная терапия назначается пациентам не в начале

155

заболевания, а в более поздний период, когда появляется выраженная клиническая симптоматика на фоне развивающейся эндотелиальной дисфункции. При этом раннее начало лечения и использование рациональных комбинаций гипогликемических препаратов позволяет значительно снизить риск развития сердечно-сосудистых заболеваний [Дедов И. И., 2017].

Возникновение и развитие метаболических нарушений сопровождается дефектами в работе системы инкретинов, устранение которых является перспективным подходом для повышения эффективности лечения метаболических заболеваний, в т.ч. СД2 и ожирения. Так согласно клиническим рекомендациям по лечению СД от 2017 года [Дедов И. И.,

2017], гипогликемическим препаратам с инкретиновой активностью отдается приоритет при монотерапии СД2 в дебюте заболевания и для комбинированной терапии с низким риском гипогликемии.

В представленном исследовании терапия начиналась одновременно с переводом животных на высокожировую и калорийную диету, и было выявлено, что соединение ZB-16, метформин и более выраженно их комбинация предупреждает увеличение массы тела, что, очевидно, связано с характерным для инкретиномиметиков влиянием на аппетит и метаболизм углеводов, при этом у всех животных, получавших гипогликемическую

«терапию», было обнаружено снижение выраженности нарушений липидного обмена.

Отсутствие значимых различий между вариантами проводимой терапии может быть следствием нескольких факторов: соединение ZB-16,

референтные препараты и их комбинации в данном исследовании были сопоставимы по эффективности при длительности диеты 12 недель.

Исследуемое вещество и референтные препараты, при различных механизмах действия, сопоставимо влияют на липидный профиль и функциональное состояние эндотелия у животных в условиях высокожировой и калорийной диеты.

156

Нарушение эндотелийзависимой вазодилатации у животных контрольной группы позволяет предполагать снижение стимулированной

(уменьшение реакции на введение ацетилхолина) и базальной (уменьшение реакции на введение L-NAME) продукции оксида азота, что может быть следствием уменьшения активности эндотелиальной нитрооксидсинтазы.

Учитывая отсутствие статистически значимых различий в скорости локального мозгового кровотока и концентрации циркулирующих эндотелиоцитов в крови у животных интактной и контрольной группы,

можно предположить, что содержание молодых животных в условиях высокожировой и калорийной диеты в течение 12 недель не привело к выраженным проявлениям эндотелиальной дисфункции, признаки которой были выявлены при проведении провокационных проб. При этом у животных всех опытных групп, получавших терапию с началом диеты,

уровень мозгового кровотока и выраженность эндотелийзависимых реакций были на сопоставимом с интактной группой уровне.

5.3Заключение

Среди гипогликемических препаратов с доказанной способностью снижать вес тела находятся аГПП-1 и ингибиторы натрий-глюкозного ко-

транспортера 2 типа (иНГЛТ-2). В то же время остальные препараты либо не влияют (ингибиторы ДПП-4, ингибиторы α-глюкозидаз), либо увеличивают массу тела (тиазолидиндионы, препараты сульфонилмочевины и инсулина)

[Дедов И. И., 2017]. Для лечения ожирения, которое наблюдается у большинства пациентов с СД2 или с течением времени трансформируется в него [Дедов И. И., 2016а, 2017, Ткачук В. А., 2014], возможностей для проведения фармакотерапии значительно меньше. Многие из препаратов для снижения веса, получивших разрешение на использование, в последующем были запрещены или имеют существенные ограничения к применению

(сибутрамин, римонабант, лоркасерин и некоторые другие). Наиболее

157

длительно, эффективно и одновременно безопасно, с целью снижения лишнего веса, используется орлистат (Ксеникал), однако побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта ограничивают его применение большинством пациентов. Определенное влияние на массу тела у пациентов с СД2 и ожирением оказывает метформин, но его эффективность у лиц с избыточной массой тела без СД и инсулинрезистентности незначительная

[Seifarth C., 2013; Dong Z., 2017].

Споявлением информации о роли нарушений в инкретиновой системе

впатогенезе СД2 инкретиномиметики начали рассматриваться в качестве препаратов, способствующих снижению массы тела у пациентов с СД2.

Инкретинопосредованная терапия (иДПП-4, аГПП-1) СД признается одной из самых безопасных и эффективных, а в 2012 году препарат лираглутид,

рекомендованный для лечения СД2 в дозах 1,2 и 1,8 мг в сутки (Виктоза),

получил одобрение FDA в качестве средства для лечения ожирения (в дозе 3

мг, Саксенда) [Dong Z., 2017].

Средства, влияющие на систему инкретинов, активно используются для комбинированной терапии СД. Одной из рациональных комбинаций признано сочетание ингибиторов ДПП-4 с метформином, который улучшает функциональное состояние энтероэндокринных клеток (снижает апоптоз в условиях СД), что приводит к увеличению количества секретируемых инкретинов и повышению эффективности иДПП-4 [Bahne E., 2016].

Повышение секреции ГПП-1 и ГИП рассматривается как новый подход к фармакологической регуляции работы системы инкретинов. А соединения,

стимулирующие их секрецию (агонисты рецептора GPR119),

позиционируются как средства для моно- и комбинированной терапии СД2.

При этом, с учетом имеющихся клинических данных и теоретических предпосылок, наиболее целесообразными препаратами-кандидатами для создания рациональных комбинаций с агонистами GPR119 являются метформин [Al-Barazanji K., 2015] и ингибиторы ДПП-4 [Park Y. H., 2017].

158

В проведенных исследованиях соединение ZB-16 в монотерапии на модели экспериментального СД проявляло гипогликемическую активность, а

в условиях высококалорийной диеты способствовало снижению массы тела.

Поскольку для достижения эффективного контроля гликемии, в том числе при ожирении, активно используются рациональные комбинации гипогликемических препаратов, в настоящем исследовании была произведена оценка эффективности агониста GPR119 в комбинации с другими гипогликемическими лекарственными препаратами.

		159
ГЛАВА	6.	ИЗУЧЕНИЕ	МЕХАНИЗМОВ

ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ АГОНИСТА GPR119

Установление механизма гипогликемического действия является одной из важнейших задач, стоящих перед фармакологической наукой. Исходя из структуры соединения и данных, полученных in vitro на этапе первичного скрининга агонистов GPR119, мы предполагали, что пероральное введение соединения ZB-16 будет стимулировать секрецию инкретинов и инсулина, а

также снижать концентрацию глюкагона в плазме крови. Изучение влияния перорального введения соединения ZB-16 на концентрацию ГПП-1,

инсулина, глюкагона и глюкозы было выполнено на животных с экспериментальным СД.

Инкретины являются метаболическими гормонами, которые снижают уровень глюкозы в крови. Этот эффект обеспечивается увеличением количества инсулина, высвобождаемого из β-клеток поджелудочной железы.

Они также ингибируют высвобождение глюкагона из α-клеток островков Лангерганса. Кроме того, стоит упомянуть, что инкретины (ГИП и ГПП-1)

замедляют апоптоз панкреатических β-клеток, вызывают репарацию и рост островков поджелудочной железы [Ленская К.В., 2011; Yoshida S., 2011].

ГПП-1, а соответственно, и его миметики стимулируют секрецию инсулина. Мы предположили, что помимо увеличения секреции инсулина инкретины, возможно, продлевают его действие, поэтому нами был проведен тест на толерантность к инсулину на фоне предварительного перорального введения соединения ZB-16.

Поскольку известно, что инкретины способны влиять на процессы апоптоза и пролиферации, в том числе и в β-клетках поджелудочной железы,

а также поскольку гомеостаз глюкозы зависит от морфофункциональной целостности β-клеточного аппарата поджелудочной железы, нами была оценена выраженность повреждений этой ткани. С помощью ИГХ было оценено количество инсулинпозитивного материала в ткани поджелудочной

160

железы, содержание маркеров апоптоза и пролиферации. Дизайн

исследования представлен на рис.26.

Рисунок 26. Дизайн исследования влияния перорального введения соединения ZB-16 на секрецию ГПП-1, глюкозы и инсулина

6.1 Оценка влияния перорального введения соединения ZB-16 на секрецию ГПП-1, глюкагона и инсулина‡‡

Начальный уровень ГПП-1 у животных с экспериментальным СД был ниже, чем у интактных и тех, которым вместо воды 28 дней перорально давали соединение ZB-16 (рис.27А1, А2). Так, у животных с экспериментальным СД, получавших «терапию» агонистом GPR119,

начальный уровень ГПП-1 был выше на 121% (p < 0,001), чем в группе,

получавшей плацебо, в то же время пероральное введение соединения ZB-16

за 30 минут до измерения концентрации ГПП-1 приводило к увеличению

‡‡ Исследование выполнено совместно с к.м.н. Д.А. Бакулиным