- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
Динамика активности индикаторных ферментов, характеризующих цитолитические процессы в печени, а именно - повреждение гепатоцитов и эпителия желчных протоков, представлена в табл. 5.1.
У животных всех экспериментальных групп преобладало повышение АсАТ (коэффициент де Ритиса во всех наблюдениях превышал 1,33). На 7-е сутки после операции уровень АсАТ у всех аспленизированных животных был существенно выше, чем в КГ-3 (pU=0,004). Отметим, что повышение уровня фермента в ОГ-1 было наименьшим и существенно отличалось от показателя в ОГ-2 (pU=0,006), КГ-1 (pU=0,001) и КГ-2 (pU=0,006). К 14 суткам происходило некоторое снижение уровня АсАТ в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 (в последней группе статистически значимое; pW=0,006). При этом сохранялась высокая значимость различий уровня АсАТ у всех аспленизированных животных по сравнению с КГ-3 (pU£0,02).
Таблица 5.1
Динамика активности индикаторных ферментов (МЕ/л) под влиянием ксенотрансплантации клеток селезенки (медиана, нижний и верхний квартили)
Фер-мент |
Сутки |
Экспериментальные группы |
||||
ОГ-1 |
ОГ-2 |
КГ-1 |
КГ-2 |
КГ-3 |
||
АсАТ |
7 |
108 ** ¨ (106-115) |
183 Ä · (175-258) |
210 Ä· ·· (210-210) |
242 * Ä (203-268) |
102 (98-107) |
14 |
106 ** ¨ Ä (104-108) |
181 ¨ Ä (171-184) |
133 Ä (129-135) |
- |
97,5 (96-100) |
|
21 |
98 ** (95-103) |
140 ¨ ·· (139-143) |
117 Ä (120-132) |
- |
102 (97-106) |
|
Норма |
101 (100-103) |
|||||
АлАТ |
7 |
65,5 ¨ Ä ·· (65,0-67,0) |
68,7 ¨ Ä· ·· (63,0-69,0) |
58,0 ¨¨ ·· (57,0-58,0) |
51,0 * Ä (50,0-52,0) |
57,0 (56,0-57,0) |
14 |
58,0** ¨ (57,0-58,0) |
99,0¨ Ä (91,0-107,0) |
69,5 Ä · (69,0-71,0) |
- |
56,0 (54,0-57,0) |
|
21 |
57,0 ** (55,0-59,0) |
91,0 ¨ (88,0-95,0) |
62,5 (56,0-66,0) |
- |
57,0 (56,0-57,0) |
|
Норма |
56 (55-57) |
|||||
ЛАП |
7 |
49,5 ** ¨ ·· (47,0-51,0) |
59,0 ¨ ¨¨ (58,0-60,0) |
42,5 ¨¨ · ·· (38,0-45,0) |
26,0 * Ä (25,0-31,0) |
50,0 ¨ (49,0-51,0) |
14 |
55,0 ** ¨ (54,0-56,0) |
60,0 Ä (59,0-62,0) |
60,3 Ä · (60,0-61,0) |
- |
53,5 (50-55) |
|
21 |
52,5** (51,0-57,0) |
60,0 ¨ (59,0-61,0) |
56,5 (55,0-58,0) |
- |
51,0 (49,0-55,0) |
|
Норма |
52,0 (52,0-53,0) |
Примечания: АсАТ – аспартатамионотрансфераза; АлАТ – аланинаминотрансфераза; ЛАП- лейцинаминопептидаза; * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (pU£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (pW£0,05); ·· - по сравнению с показателем в группе на 14 сутки (pW£0,05) .
В ОГ-1 уровень фермента был наименьшим по сравнению с ОГ-2 и КГ-1 (pU=0,004). На 21-е сутки анализируемый показатель в ОГ-1 достигал нормы, а в ОГ-2 и КГ-1 существенно снижался по сравнению с предыдущими значениями, оставаясь в последних группах достоверно более высоким по сравнению с нормой (pU£0,02). Отметим отсутствие значимости различий уровней АсАТ в КГ-3 на всех сроках исследования по сравнению с нормой.
Динамика уровня АлАТ была иной. Изначально высокий показатель в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 нормализовался к 21 суткам в ОГ-1 и напротив повышался в ОГ-2 и КГ-1. Отметим существенное снижение уровня АлАТ у животных КГ-2 по сравнению с другими группами. Содержание ЛАП в сыворотке крови на 7 сутки после аспленизации отличалось у животных с КТ ИКС и СЭ; при этом активность фермента в КГ-2 была существенно более низкой по сравнению с другими группами (pU£0,04). В КГ-1 она была сниженной по сравнению с ОГ-1 и ОГ-2 (pU£0,02), в ОГ-1 не отличалась от КГ-3 , а в ОГ-2 - существенно повышенной (pU£0,006). На 14-е сутки уровень фермента особенно резко повышался в КГ-1 и оставался высоким в ОГ-2 по сравнению с ОГ-1 и КГ-3 (pU£0,006). К 21-м суткам происходило достоверное повышение уровня ЛАП в ОГ-1 (без различий по сравнению с показателем КГ-3). В КГ-1 активность ЛАП оставалась на гипернормальных значениях, максимальным она был в ОГ-2, значимо отличаясь от показателей ОГ-1 и КГ-1 (pU£0,003).
Динамика активности АсАТ и ЛАП представлена на рис. 5.1
Рис. 5.1 Динамика активности аспартатаминотрансферазы и лейцинаминопептидазы (медиана, нижний и верхний квартили).
В связи с представленными результатами нас интересовала характеристика белково-синтетической функции печени у аспленизированных крыс под влиянием транспалантации ткани селезенки. Эти результаты представлены ниже.