- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
В современной хирургии наметилась тенденция к органосохраняющим операциям на селезенке в ситуациях, при которых ранее применялась спленэктомия [23,33,34,36,43,52,71,134,278,281].
При некоторых травматических повреждениях селезенки применяют консервативное лечение с интенсивным мониторингом [278].
Варианты органосохранения включают проведение топического гемостаза, спленорафию [1,32,43,67,81] и резекцию органа в различных модификациях [9,13,47,60,86,115,120,218,294].
Способом протезирования функций селезенки при вынужденной СЭ является аутоспленотрансплантация в одном из вариантов [16,39,90,117,234,299,315,331]. По данным иммунологических, инструментальных и морфологических исследований имплантированная ткань селезенки функционирует нормально [59,234,315,361].
Гистологические исследования, проведенные на экспериментальном материале, показали, что аутотрансплантаты через 4-5 месяцев приобретают типичное для селезеночной ткани строение. Эффективность аутотрансплантации можно объяснить тем, что небольшое количество имплантированной ткани с адекватным Т-клеточным ответом обеспечивает стимуляцию выработки антител, которые вызывают опсонизацию антигенов, и те элиминируются мононуклеарной системой печени [234].
Предполагают, что наиболее важна ретикулярная структура трансплантата, которая остается после некроза. Ретикулярная структура служит местом вторичного заселения клетками иммунной системы [234].
Положительно оценивая результаты аутотрансплантации селезенки, авторы, тем не менее, отмечают, что такие операции как спленорафия или резекция селезенки, обеспечивают лучшую макрофагальную функцию селезенки [11,25,131].
Наличие спленоза, также как и добавочных селезенок не вполне нормализует гуморальный иммунный ответ и, вероятно, не устраняет повышенного риска развития инфекции после спленэктомии [234].
Между тем, существуют клинические ситуации, когда невозможно ни выполнение органосохраняющей операции, ни АТС: тотальное поражение пульпы селезенки гнойно-деструктивным процессом, размозжение ткани органа при изолированных или сочетанных с панкреатическими травматических повреждениях [43,132,143].
Также существует довольно обширная категория пациентов, у которых СЭ является необходимым этапом комбинированных онкологических операций или проводится по поводу заболевания крови [4,11,43,44,50]. В этой связи вызывают интерес результаты аллотрансплантации селезенки, которая нашла применение для купирования реакции «трансплантат против хозяина» при трансплантации печени [107,248], а также в качестве адъювантного метода коррекции неоперабельной гепатоклеточной карциномы и гемофилии [106,238].
В качестве мер фармакологической профилактики отдаленных инфекционных осложнений при СПГ применяют вакцинацию [63,234,244,249,336,348 ] и длительную антибактериальную терапию [63,244]. Эти способы, широко распространенные за рубежом, не лишены недостатков и побочных эффектов [249,336]. К тому же существуют публикации, ставящие под сомнение действенность названных профилактических мероприятий [221,249,280,298], даже в условиях внедрения специальных образовательных программ для пациентов, перенесших СЭ [249].
Одним из новых экспериментально-клинических направлений является метаболическая коррекция СПГ путем назначения тафцина и его синтетических аналогов [229,231,333,349], а также селезеночных экстрактов [66,228] для предупреждения инфекционных осложнений.
Интересен выявленный на модели токсического гепатита факт равной терапевтической активности экстрактов из алло- и ксеногенной селезенки, что, вероятно, свидетельствует об отсутствии видовой специфичности активных компонентов этих препаратов [38,228].
Иммуностимуляторы, полученные из селезенки млекопитающих, повышают антимикробную резистентность организма, стимулируют гемопоэз и детоксикационную функцию печени, обладают противовоспалительным действием [88,104,125,127,129].
Ни один из названных препаратов, судя по данным литературы, не нашел до настоящего времени адресного применения для систематизированной патогенетической коррекции (а в раннем послеоперационном периоде – профилактики) СПГ, несмотря на их свойства, блокирующие те или иные гипоспленические нарушения. Если считать патогенетическим обоснованным возмещение дефицита биологически активных веществ, продуцентом которых являлась удаленная селезенка, то следует рассматривать и возможности трансплантации клеток, ответственных за их выработку. С этих позиций рассмотрим данные литературы, посвященные применению свиного материала для пересадки человеку.