2. Результатысерологическихметодов исследованияубольныххронической мигрирующейэритемойАфцелиуса-Липшутца

ВобследованнойгруппебольныхIgМ-антителакантигенамBorreliaburgdorferi(OspA,p41)былиобнаруженыу64,86%/24больных,у37,84%/14-кOspC.ВыявлениеантителкOspCупациентовсмигрирующейэритемойсвидетельствуетохорошейреактивности.Этотбелоквместесбелкомр41являетсяиммунодоминатнымдляIgMреактивности.OspCспецифичнеер41иможетбытьединственнымиммунодоминантныммаркеромраннегоиммунногоответа,антигеныp100,p39иp18выявляютсяприпозднемиммунномответе.IgG-антителакантигенамBorreliaburgdorferi(p100,p39иp18)обнаруженыуу24,32%/9больных,кантигенуVlsE‒у35,13%/13(табл.46).ПродукцияантителкVlsEв

основномдетектируетсяприIgG-ответе,частораньшетипичныхIgG-маркеров(p100,p39иp18).Первичныйиммунныйответнараннихстадияхразвитияболезнипроисходитнакомпонентфлагеллина(p41)ивнешнегоповерхностногобелка(OspA)исопровождаетсяпоявлениемиммуноглобулиновIgМиIgG.НараннихстадияхболезниЛаймачасторегистрируютсяложноотрицательныерезультаты.Уровеньантителнарастаетмедленно,чтоявляетсяхарактернойособенностьюборрелиознойинфекции.ВыявлениеIgМ,атакжеIgGкфлагеллину(p41)иOspCуказываютнараннююстадиюЛБ[39,42].

Таблица46

Результаты определенияантителкBorreliaburgdorferiвсывороткекровиубольныхмигрирующейэритемой методомИфа.

Антитела к Borrelia burgdorferi sensustricto, B. garinii, B. afzelii	Числопозитивныхреакций
	Абсолютноеколичество	%±m
IgМ-антитела(OspA, p41)	24	64,86±7,85
IgМ-антитела(OspC)	14	37,84±7,97
IgG-антитела(VlsE)	13	35,13±7,85
IgG-антитела(p100,p39иp18)	9	24,32±7,05

Примечание:m‒ ошибкасреднейарифметической.

Прианализеданных,полученныхвходевирусологическихибактериологическихисследований,ВПГ-1былидентифицированудвухбольных,уодногобольногообнаруженВЭБ,удвухбольныхобнаруженавысокаястепеньколонизацииносоглоткиS.aureus,уодногобольноготолькоKlebsiellapneumonia(табл.47).Такимобразом,убольшинствабольныхмигрирующейэритемойинфекционныхагентоввходеиследованиявыявленонебыло.

Таблица47

Идентификацияинфекционныхагентовубольныхмигрирующейэритемойвбиологическихжидкостях

Инфекционныйагент	n=37
	Абсолютноеколичество	(%±m)
ВПГ-1	2	5,4±3,7
ВЭБ	1	2,7±2,7
Klebsiellapneumonia	1	2,7±2,7
S.aureus	2	5,4±3,7

Примечание:позитивныйответДНКдиагностикипризначенияхболее3*10⁵

копий/млдлявирусови≥1200КОЕ/дм^2длябактерий.n-числобольных.m‒ошибкасреднейарифметической.

3. Результатыиммунологическихисследованийубольныххронической мигрирующей эритемойАфцелиуса-Липшутца

СледующимэтапомнашихисследованийбылоизучениеэкспрессииTLRsнамононуклеарныхлейкоцитахпериферическойкрови(МЛПК)убольныххроническоймигрирующейэритемой.

Врезультатепроведенногоисследованиявыявлено,чтоубольшинствабольныхсмигрирующейэритемойнаблюдаютсявысокиеуровнисодержанияклетоксэкспрессиейTLR2,превышаянормальныезначениявгруппездоровыхлицв4разаисоставляя25,1±4,6%.КоличествоTLR4-экспрессирующихклетокубольныхбылитакжевышенормальныхзначенийв3,5раза,исоставляли13,8±4,5%.ЧислоTLR3иTLR9-позитивныхклетокпревышалинормальныезначения,составляя59,9±5,8%и57,1±6,7%соответственно(рис.12).ВгруппебольныхМЭвыявленавысокаяобратнаякорреляционнаясвязьмеждудлительностьюзаболеванияиуровнямиэкспрессииTLR2,4,3,9.НаиболеевысокиезначенияэкспрессииTLR2,4(до85%)наМЛПКнаблюдалисьубольныхснаименьшейдлительностьюзаболевания(10-30дней).Отрицательнаякорреляционнаясвязьможетсвидетельствоватьоистощенииисниженииактивацииврожденныхмеханизмовприразвитиивоспалительногопроцесса.

Поврежденныеврезультатевоспаленияклеткимогутпродуцироватьадъювантныеэндогенныепродукты,которыеотличаютсяотэкзогенныхмикробныхадъювантов.Однимизтакихпродуктовявляютсябелкитепловогошока(БТШ),высвобождаемыеразрушеннымиклеткамивлокальноемикроокружение.Другиеэндогенныеэлементы,стимулирующиеиммунокомпетентныеклетки,включаютфибриноген,гиалуроновыекислоты,атакжепродуктдеградациипуриновыхоснований–мочевую кислоту.

Установлено,чтоTLR2играетключевуюрольвреагированиинапродуктыграмположительныхбактерий,микобактерийидрожжей[328,329].TLR4участвуетвраспознаванииЛПС.TLR3распознаютдвухцепочечнуюРНК,молекулярныеструктурывирусов,втовремякакTLR9отвечаетзараспознаваниенеметилированныхCpG-мотивовбактериальнойДНК.TLR7распознаетимидазольныесоединения,такиекакR848,обладающиеантивируснымисвойствами[29,315],асистемноевведениеагонистаTLR7обеспечиваетпротивовирусныйэффект[124,191].ДлительноеприсутствиеPAMPsиDAMPsворганизме,повсейвероятности,служиттриггеромдляпролиферацииклеток,несущихTLRs,которыепроводятсигналысклеточнойповерхностиспоследующейактивациейтранскрипционногофактораNF-κβисинтезомпровоспалительныхцитокинов(TNF-α,IL-6,IL-12,INF-β)ибелков(например,индуцибельнаяNO-синтетаза)[57],приводящихкактивациииммунокомпетентныхклеток.Мыпредполагаем,что,гиперэкспрессияTLR2,4,3,9убольныхмигрирующейэритемойможетявлятьсямаркеромактивностиинфекционногопроцесса,вызванногокакграмм-отрицательнымибактериямиBorreliaburgdorferi,такиметаболическимипродуктамиэндогенногопроисхождения.

100

^{%экспрессирующихклеток} Больныемигрирующейэритемой

Здоровыелица

50

25,1*

4,8*

0

13,8*

^59,9* 57,1*

^15,4* 11,2*

4,2*

TLR2 TLR4 TLR3 TLR9

Рис.12.ЭкспрессияTLRsнаМЛПКубольныххроническоймигрирующейэритемой

Примечание:*p<0,05-достоверностьразличиймеждугруппамибольныхмигрирующейэритемойиздоровыхлиц

ИзучениеэкспрессииTLRsвкожеизочаговмигрирующейэритемыбылопроведеноу 13больных.ПриисследованииэкспрессииTLRsклеткамикожинаблюдалисьдостоверныеразличиявэкспрессииTLR2,7,8.УровниэкспрессииTLR2иTLR4вочагахсдлительностьюсуществованиядо30дней(7больных)(19,4±4,3и13,6±3,8%соответственно)былидостоверновыше,чемвболеедлительносуществующихочагах(6больных)(5,8±1,6и6,8±2,5%соответственно)(табл.48).Известно,чтопервыйбарьерприпроникновенииэкзогенныхпатогеноввчеловеческойкожепредставляюткератиноциты,которыеформируютрезистентностькинфекцииблагодаряфункционированиюосуществляемыхимииммунныхмеханизмов.

Таблица48Уровни экспрессииTLRsвкожеубольныхмигрирующейэритемойдолечениявзависимости отдлительности существованияочагов

Группы, подгруппы

n

TLR2

TLR4

TLR3

TLR9

TLR7

TLR8

Количествоклетоксэкспрессией%,M±σ (Me)(LQ-UQ)

Груп

Все

13

12,6±2,9

10,2±3,2

4,8±1,5

9,5±2,4

12,5±2,1

16,1±3,5

па в

очаги

#

10,5(9,7-

4,4(4-

9,1(9-

12,4(12-

16,1(15,

целом

12,2(12-

10,9)

4,7)

9,8)

12,7)

5-16,7)

12,8)

Подгр уппа1

Очагидо30дней

7

19,4±4,3 *19,2(19- 19,6)

13,6±3,8 13,5(13, 2-13,8)

5,3±1,6 5,2(5;5, 3)

10,6±2, 1 11(10,4 ;11,3)

9,3±1,6* 9,2(9;10, 2)

11,2±2,4 *11(11;11 ,7)

Подгр уппа2

Очаги более30 дней

6

5,8±1,6* #5,4(4,8- 6,9)

6,8±2,5 6,6(6,2- 7,3)

4,2±1,5 3,9(3,8- 4,6)

8,3±1,7 8,3(8,1- 8,7)

16,4±2,5 *16,4(15, 2-17,5)

21±4,6* 20,9(18, 6-23,8)

Примечание:*p<0,05-достоверность различиймеждуподгруппами1и2.

#p<0,05-достоверностьразличиймеждугруппойбольныхМЭвцеломиподгруппами1и2потестуМанна-Уитни.n-числообразцов.М-средняяарифметическая.Ме–медиана.σ-стандартноеотклонение.LQ-UQ-25-75перцентили

ВобследуемойгруппебольныхмигрирующейэритемойвыявленавысокаяобратнаякорреляционнаязависимостьмеждудлительностьюсуществованияочаговэритемыиэкспрессиейнаклеткахкоживочагахTLR2(r=-0,946),TLR4(r=-0,944),(p<0,05)(табл.49).Какбылоотмеченовыше,TLR2иTLR4необходимыдляраспознаванияЛПС,TLR2,димеризуясьсTLR1,распознаеттриацилированныелипопротеины,такиекакBorreliaburgdorferiOspA.ПоэтомувисследуемойгруппебольныхмигрирующейэритемойвыявленнаягиперэкспрессияTLR2,4МЛПКивкожеуказываетнараспознаваниелипопротеиновборрелийиявляетсямаркеромактивностиинфекционногопроцесса,вызванногоBorreliaburgdorferi.СнижениеэкспрессииTLR2помереразвитиязаболеваниявдлительносуществующихочагахможетотражатьдисфункциивсистемеTLR,частичнообъясняяхронизациюи

рецидивированиеинфекцииврезультатенарушениякооперацииклетокврожденногоикакследствие-адаптивногоиммунитета.УбольныхмигрирующейэритемойвыявленавысокаяпрямаякорреляционнаясвязьмеждудлительностьюзаболеванияиэкспрессиейTLR7(r=0,937)иTLR8(r=0,956),(p<0,05),чтоподтверждаетполученныенамиданныевгруппебольныхМЭЭиЭКЦотом,чтогиперэкспрессияэтихрецепторовможетотражатьразвитиехроническоговоспалениявкожеиможетявлятьсяпрогностическиммаркеромразвитияхроническойформыэритемы.ТакжевыявленапрямаякорреляционнаясвязьмеждутяжестьютеченияэритемнойформыболезниЛаймаиуровнямиэкспрессииTLR2(r=0,587),TLR4(r=0,571),TLR9(0,680209)наклеткахкожи,(p<0,05)(табл.

49).ИндукциясигналовчерезToll-подобныерецепторыможетобеспечиватьнетолькозащитуорганизмаотразличныхинфекций.Нарушениефункциипроводимостиданныхсигналовприводиткразвитиюцелогорядапатологическихпроцессовворганизме[131].Например,чрезмернаяпродукцияпровоспалительныхцитокиновэндогеннымилигандамиможетстатьпричинойразвитияхроническоговоспаления,аутоиммунныхзаболеваний[354].TLRsнетольковыполняютфункциюсенсоровчужеродныхPAMPs,номогуттакженициироватьиммунныйответнаэндогенныестимулы,такиекакбелкитепловогошока(БТШ),некротическийдебрис,фибриноген,фрагментыфибронектина[36].Поэтому,TLRsмогутигратьключевуюрольвразвитиинеинфекционныхпатологий.Вчастности,агонистыTLRsучаствуютвиндукцииместногоисистемноговоспаления,впатогенезе аутоиммунных, онкологическихзаболеванийидругихпатологий,характеризующихсяхроническимвоспалением.

Следующимэтапомнашихисследованийявилосьизучениеспособностилейкоцитовкровикфагоцитозуубольныххроническоймигрирующейэритемой.ПроведениеисследованияфагоцитарнойактивностинейтрофиловпериферическойкровипоказалоубольныхМЭповышениецитологическогопоказателя(0,35±0,06

у.е.) по сравнению с нормальными значениями в отличие от показателейфагоцитозапридругихэритемах(табл.50).