19. Кампилобактерии, хеликобактерии. Особенности биологии и патогенеза, вызываемых ими заболеваний. Лабораторная диагностика, лечение.

Вводные замечания:

Грамотрицательные бактерии родов Campylobacter и Helicobacter являются микроаэрофилами, так как не растут в строго аэробных или анаэробных условиях. Для их роста необходимы газовые смеси с пониженным содержанием кислорода (5-7%) и повышенным – углекислого газа (5-10%). Это мелкие, подвижные, споронеобразующие, S-образные или образующие «крыло чайки» бактерии. Заболевания, которые вызывают эти бактерии, получили название, соответственно, кампилобактериозы и хеликобактериозы. Кампилобактериозы характеризуются в первую очередь поражением гастроинтестинального тракта человека с развитием диарейного синдрома, а в ряде случаев в инфекционный процесс вовлекаются другие органы и системы. Ведущую этиологическую роль в инфекционной патологии человека среди прочих кампилобактериозов играют Campilobacter jejuni и C.coli. Сред патогенных хеликобактерий наиболее изучен Н.pylori. Этот микроб имеет тропизм к тканям слизистой желудочно-кишечного тракта, локализуясь преимущественно в пристеночном слое слизи. Колонизация может длиться бессимптомно многие годы. При определенных условиях в зависимости от состояния макроорганизма и особенностей самого микроба может активироваться воспалительный процесс, приводящий к возникновению гастритов, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Основные факторы патогенности возбудителя – уреаза, цитотоксины, муциназа, липаза, адгезины и гемолизины.

Этиология кампидлбактериоза:

Возбудители — бактерии рода Campilobacter, главным образом C. jejuni, Campilobacteriaceae. Род Campilobacter включает девять видов. Кампилобактеры — подвижные грамотрицательные палочки, имеют жгутик. Растут на агаровых средах с добавлением эритроцитов и антибиотиков (ванкомицин, амфотерицин В) для подавления сопутствующей флоры, образуют мелкие колонии. Оптимальная температура роста — 42 °С, рН 7. Бактерии образуют сероводород, дают положительную реакцию на каталазу. Имеют термостабильные О-антигены и термолабильные Н-антигены. Важнейшие поверхностные антигены — ЛПС и кислоторастворимая белковая фракция.

Факторы патогенности — жгутики, поверхностные специфические адгезины, энтеротоксины, термолабильный диареегенный и термостабильный эндотоксин. C. jejuni и другие виды кампилобактеров обитают в ЖКТ индеек, кур, овец, крупного рогатого скота, а также кошек, собак и других животных.

Кампилобактеры быстро погибают при нагревании, при комнатной температуре сохраняются до 2 нед, в сене, воде, навозе — до 3 нед, а в замороженных тушах животных — до нескольких месяцев. Они чувствительны к эритромицину, хлорамфениколу, стрептомицину, канамицину, тетрациклинам, гентамицину, малочувствительны к пенициллину, нечувствительны к сульфаниламидным препаратам, триметоприму.

Патогенез.

Основной путь передачи возбудителей кампилобактериоза — пищевой. Чаще всего заражение происходит при употреблении в пищу инфицированного мяса: говядины, свинины, мяса птицы. Существенную роль как фактор передачи возбудителей играет молоко.

Выделяют следующие этапы проникновения бактерий в организм:

• адгезия (прикрепление к поверхности энтероцитов);

• инвазия (при помощи жгутика повреждается клеточная мембрана энтероцита и возбудитель проникает в клетку);

• бактериемия (быстрое проникновение бактерий в кровь);

• токсинообразование (при попадании микробов в кровь высвобождаются токсины, обусловливающие развитие общей интоксикации);

• гематогенное обсеменение органов и тканей.

У беременных женщин возможна трансплацентарная передача инфекции, что приводит к абортам или заражению плода. Кроме энтеритов и энтероколитов, значительно реже встречаются септицемии, эндокардиты, перикардиты, менингиты, поражения мочеполовой системы.

Микробиологическая диагностика.

Проводят исследования испражнений, крови, с помощью бактериологического метода. Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод (РСК, РНГА с исследованием парных сывороток).

Лечение. Назначают антибиотики. (эритромицином, тетрациклином, хлорамфениколом)

С занятия:

кампилобактериозами болеют дети, старики и беременные. Шоколадный агар ( креазный тест, гиппурин)

Методика ПЦР

Род Helicobacter

Морфология и физиология.H.pylori представляют собой мелкие грамотрицательные палочки, лофотрихи, микроаэрофилы. Растут на сложных питательных средах. Продуцируют каталазу и оксидазу, которые используют для идентификации этих бактерий.

Патогенность и патогенез.К факторам вирулентности хеликобактеров относят их способность к движению и участие в проникновении в слизистую оболочку. Фермент уреаза при разрушении мочевины до аммиака и СO2 приводит к образованию газовой оболочки, защищающей от кишечного сока. Хеликобактеры продуцируют фосфолипазы, разрушающие фосфолипиды. Их токсичность связана с цитотоксином, действующим на эпителиальные клетки, токсином, нарушающим межклеточные контакты, и с ЛПС. Кроме того, на поверхности клеток образуются белки теплового шока, которые рассматривают как реакцию на стресс. Это приводит к аутоиммунному воспалению и образованию язв в желудке и двенадцатиперстной кишке. Н. pylori выделяются в 80% случаев язвенных гастритов.

С занятия:

Развитие заболевания зависит от R-генов, которые контролируют HLA,

Лабораторная диагностика:

Золотой стандарт – бактериоскопия, бактериологический метод., среда Загса- тест на уреазу, но 1 место молекулярно-генетическое исследование.

Бактериоскопический метод используется для быстрой идентификации кампило-и хеликобактерий. Тонкие мазки из фекалий и других клинических материалов фиксируют на огне, окрашивают фуксином Пфейфера течение 10-20 с и промывают водой. Поскольку для окраски других бактерий требуется 3-5 мин, то в течение 10-20 сек успевают зафарбуватись только кампилобактерии. Особенно четко их типовые формы обнаруживают при окраске кристаллическим фиолетовым. Под обычным световым микроскопом они выглядят как тонкие, спирально изогнутые бактерии, имеющие один полный завиток, С-и S-образную форму или напоминают крылья чайки. Helicobacter pylori имеет несколько большие размеры. Можно также использовать фазово-контрастную микроскопию суспензии стула в бульоне для культивирования бруцелл или жидкой среде Мюллера-Хинтон (МПБ с крахмалом и казеином). При этом выявляют не только типичные особенности морфологии кампилобактерий, но и очень характерную их подвижность.

Бактериологический метод

Оптимальные результаты получают, когда материал берут в транспортное тиогликолевой среду и в нем доставляют в лабораторию. Если посевы делают не позднее 24 ч, транспортную среду не используют.Для выделения кампило-и геликобактерий чаще применяют среду Бутцлера (до кровяного агара добавляют цефоперазон - ЗО мг / л, рифампицин - 10 мг / л и амфотерицин В - 2 мг / л). Антибиотики подавляют рост сопутствующей микрофлоры. Посевы атмосфере 10% С02пры температуре 25 ° С, 37 ° С и 42 ° С в течение 24-72 час.Кампилобактерии образуют два типа колоний: 1) правильной круглой формы с ровными краями диаметром 1-2 мм, блестящей выпуклой поверхностью, прозрачные, гомогенные, 2) неправильной округлой формы диаметром 2-8 мм, бесцветные или светло-серого цвета, прозрачные, напоминают капли воды. При посеве количественным методом рост колоний, как правило, обнаруживают на третьем и четвертом квадрантах, но нужно тщательно осматривать всю чашку, поскольку они могут вырасти только на первом квадранте в окружении колоний сопутствующей фекальной микрофлоры.Идентификация колоний кампило-и геликобактерий не вызывает трудностей для опытного бактериолога. Типичные колонии исследуют микроскопически, окрашивая препараты по Граму. В мазках возбудители имеют вид тонких, изогнутых, чаще спиралевидных клеток, могут иметь один и более витков и достигать в длину до 8 мкм. Затем выделяют чистую культуру, которую идентифицируют по ряду признаков: выделение оксидазы, каталазы, уреазы, рост при температуре 25 ° С , 37 ° С и 42 ° С, гидролиз гиппурат, восстановления нитратов, чувствительность к цефалотину. Для серотипирования кампило - и геликобактерий используют реакцию агглютинации со стандартными диагностическими сыворотками и суспензией прогретых культур. Хорошие результаты типирования получены также в

реакциях коаглютинации, латекс-агглютинации и непрямой гемагглютинации.