14. Принципы и методы выделения чистой культуры аэробных бактерий и факультативноанаэробных бактерий.

Методы выделения чистой культуры аэробов:

1)Механическое разделение микроорганизмов:

а)механическое разобщение бактериальных клеток на поверхности пит. сред шпателем (по Дригальскому), рассев штрихами калиброванной петлей (по Гольду) или тампоном после забора им материала

б)метод фильтрации-основан на пропускании материала через фильтры с определенным диаметром пор (организмы разделяются по величине-часто используется для очистки вирусов от бактерий)

2)Получение серийных разведений в жидкой среде с последующим высевом на чашки с агаром (метод пластинчаты разводок по Коху)

3)По биологическим свойствам организма:

а)избирательное подавление роста сопутствующей микрофлоры низкими температурами (т.е для получения культур психрофильных бактерий)

б)метод Шукевича-клетки характеризующиеся скользящим движением , засевают в конденсационную жидкость свежприготовленного косого агара, поднимаются на поверхность среды и активно разрастаются

в)метод прогревания-позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм, путем прогревания материала на водяной бане при 80°С 10-15 мин.

г)бактериостатический метод (метод ингибирования)-основан на различном действии различных веществ и антибиотиков на микроорганизмы (одни-угнетают рост одних бактерий, а другие не оказывают никакого влияния)

д)метод заражения лаб. животных и растений-основан на способности бактерий интенсивно размножаться в организме чувствительных к ним животных (применяют для идентификации и выделения микроорганизмов и отделения их от сапрофитов)

Культивирование аэробных микроорганизмов проводят следующим образом:

• на поверхности плотных сред или в тонком слое жидких сред, когда микроорганизмы получают кислород непосредственно из воздуха;

• в жидких средах. В этом случае микроорганизмы используют растворенный в среде кислород. В связи с низкой растворимостью кислорода, для обеспечения роста аэробных бактерий в толще среды, требуется постоянное аэрирование.

Методы культивирования строгих анаэробов:

1) Посев уколом в высокий столбик сахарного агара, который сверху заливается слоем вазелинового масла.

2) Посев на среду Китта-Тароцци (МПБ, глюкоза, кусочки печени или мяса в качестве редуцирующих веществ, сверху среда залита слоем вазелинового масла).

3) Удаление воздуха из среды механическим путем. Используют анаэростаты, из которых выкачивается воздух.

4) Замена воздуха другим индифферентным газом, например азотом, аргоном, водородом.

5) Механическая защита от кислорода воздуха (метод Виньяль-Вейона). Берут стеклянную трубку, один конец которой вытягивают в капилляр, расплавляют агар, в него засевают культуру и затем насасывают агар в стерилизованную трубку, затем капилляр запаивают и трубку помещают в термостат. В среде вырастают колонии, которые можно извлечь, распилив трубку.

6) Химическое поглощение кислорода воздуха, например щелочным раствором пирогаллола.

7) комбинированный посев культур анаэробов и аэробов. Посев производят на чашку с толстым слоем кровяного агара с глюкозой, разделенную пополам небольшой дорожкой, вырезанной посередине чашки прокаленным скальпелем. На одной половине чашки делают посев культуры аэробов, а на другой – анаэробов. Края чашки смазывают парафином для герметизации и помещают в термостат. Сначала происходит рост аэробов, когда они исчерпывают из чашки кислород, начинается рост анаэробов.