Техника забора и транспортировки биологического материала для проведения микробиологического исследования

Материал	Техника забора	Примечание
Отделяемое миндалин и глотки	Отделяемое с пораженных участков собирают с помощью стерильного тампона. Материал следует доставить в лабораторию в течение 1 часа, при больших сроках следует использовать транспортные среды	Не следует полоскать рот или использовать местные дезинфекционные средства как минимум за 6 ч до забора материала
Мокрота	Мокроту собирают после сильного кашля в стерильную посуду. Забор желательно осуществлять утром до еды, перед этим следует прополоскать рот теплой кипяченой водой (без дезинфекционных средств). Мокроту следует доставить в лабораторию сразу же, но не позднее чем через 2 ч	При отсутствии адекватного кашля отделение мокроты можно стимулировать ингаляцией изотонического раствора NaCI или муколитических средств
Бронхиальный секрет	Секрет аспирируют через эндотрахеальный катетер или при бронхоскопии
Моча	Область промежности и гениталий следует тщательно вымыть теплой водой с мылом. 5-10 мл средней утренней порции мочи собирают в стерильную посуду и доставляют в лабораторию в течение 2 часов. Забор мочи с помощью катетера. Используют стерильный катетер, среднюю порцию мочи забирают в стерильную посуду. При наличии постоянного катетера следует произвести дезинфекцию собирательной трубки и собрать мочу после пункции проксимальной ее части	Предпочтительно использовать утреннюю порцию мочи; при отсутствии такой возможности — забор мочи для анализа следует осуществлять не ранее 4 ч после последнего мочеиспускания

Продолжение приложения 2
Материал	Техника забора	Примечание
Кровь	Пробы крови забирают из кубитальной вены. Кожу в месте пункции предварительно обрабатывают йодом (или йод + спирт) в течение 1 мин с помощью ватного тампона — следует использовать концентрические движения от места пункции к периферии. Непосредственно перед забором крови кожу обрабатывают 70% спиртом. При проведении венепункции используют стерильные перчатки, иглу и шприц. Путем венепункции получают как минимум 10 мл крови (у детей 2 мл). Кровь собирается а шприц и ваодится затем во флаконы с питательной средой; соотношение объемов крови и среды должно быть не более 1:10. Резиновую крышку флакона перед проколом иглой обрабатывают спиртом. Пробы крови для анализа на анаэробную флору лучше собирать в вакуумные пробирки типа Vaci/ta/ner. Пробы крови следует немедленно доставить в микробиологическую лабораторию; при невозможности немедленной транспортировки следует избегать охлаждения проб — их следует инкубировать при температуре 37° С	Следует избегать забора крови из катетеров. Кровь для анализа забирается до назначения антибиотиков, в крайнем случае — непосредственно перед введением очередной дозы препарата. Для получения оптимальных результатов следует забирать как минимум 3 пробы в течение 24 ч, а лучше 5-6 раз в течение 48 ч
Цереброспиналь­ная жидкость	После тщательной обработки кожи (см. кровь) в месте люмбальной пункции, с помощью стерильной иглы забирают 2 мл цереброспинальной жидкости и помещают ее в стерильную пробирку с завинчивающейся крышкой. Пробы в лабораторию транспортируют немедленно (в течение 5-10 мин)	Не допускать охлаждения проб !

Окончание приложения 2

Материал	Техника забора	Примечание
Плевральная, перитонеальная, синовиальная, перикардиальная жидкости	После тщательной обработки кожи в месте предполагаемой пункции (см. кровь) с помощью стерильной иглы и шприца получают пробы жидкости в количестве 5 мл. При немедленной транспортировке в лабораторию пробы жидкости доставляют непосредственно в шприце, предварительно удалив иглу и надев на наконечник шприца стерильный колпачок из резины или иного материала. При невозможности немедленной транспортировки используют специальные герметичные транспортные контейнеры	Избегать охлаждения проб до использования
Поверхностные раны	Первоначально следует удалить отделяемое раны в поверхностных слоях. Затем забирают материал из глубоких участков, а также из краев раны с помощью стерильного тампона, который помещают в транспортную среду, а при отсутствии последней — в стерильный контейнер, который маркируется. Гной следует аспирировать в шприц	Не доставлять тампоны с исследуемым материалом в лабора­торию в открытом виде, без контейнера. При подозрении на анаэробную инфек­цию следует также произвести биопсию тканей; материал для анализа следует транспортировать в герметичных контейнерах
Закрытые абсцессы	После дезинфекции кожи (см. кровь) жидкость или гной аспирируют путем пункции полости абсцесса стерильной иглой. При немедленной транспортировке в лабораторию аспират может быть оставлен в шприце после тщательного удаления из него воздуха; иглу при этом следует снять, наконечник шприца закрыть стерильным колпачком. При отсроченной транспортировке материал для анализа помещают в герметичный контейнер	При отсроченной транспортировке следует избегать охлаждения полученного материала

Рвотные массы и промывные воды желудка (50—100 мл) отбирают в стерильные баночки, добавляя в них стерильный 10% раствор соды до нейтральной реакции пробы (контроль pH осуществляют полоска­ми индикаторной бумаги).

Желчь (дуоденальное содержимое) берут с помощью стерильного дуоденального зонда, который вводят натощак в двенадцатиперстную кишку. При правильном введении выделяется желчь золотисто-жел­того цвета (порция А). Затем в зонд вводят 30 мл 30% стерильного раствора магния сульфата, подогретого до температуры 37^Q С, и через 15-20 мин извлекают пузырную желчь темного цвета (порция В). В последующем желчь будет выделяться из желчных протоков (по­рция С). Каждую порцию желчи собирают в отдельную пробирку. Нативный материал без промедления отправляют в лабораторию.

Кровь дня выделения сальмонелл берут шприцем из локтевой вены в первую неделю заболевания в количестве 10 мл (в более позд­ние сроки — 15-20 мл) и засевают у постели больного в соотношении Г. 10 в среду Раппопорта или желчный бульон. При отсутствии воз­можности посева кровь отбирают в стерильную пробирку, закрывают пробкой и направляют в лабораторию. Для серологических исследо­ваний кровь берут из локтевой вены дважды по 5—10 мл в первые дни болезни и через 7—10 сут.

В случае смерти больного с диарейным кишечным заболеванием органы трупа должны подвергаться бактериологическому исследова­нию в ближайшее время. Исследованию подлежат:

« содержимое тонкой и толстой кишки;

• отрезки тонкой и толстой кишки, желчный пузырь с желчью;

• кусочки печени и селезенки;

• кровь;

• мезентериальные лимфатические узлы, костный мозг.

Взятые пробы различных органов трупа укладывают отдельно в стерильные банки.

Пробы для бактериологического исследования отбирают в стери­льную посуду без следов дезинфицирующих растворов. Стерилиза­цию посуды проводят автоклавированием, сухим жаром или кипяче­нием в 1% растворе соды. Допускается дезинфекция суден и тарелок осветленным раствором хлорной извести (нельзя использовать лизол и карболовую кислоту) с последующим промыванием горячей водой до полного удаления дезинфектанта. Банки, пробирки с материалом должны закрываться непромокаемыми пробками и пергаментной бу­

магой, укладываться в специально подготовленную для транспорти­рования металлическую тару. Все материалы должны направляться в лабораторию с сопровождающим не позднее чем через 2 ч после их отбора (при использовании транспортных сред и сред обогащения — в течение 1—7 суток в зависимости от среды).

Правила забора материала для бактериологического исследования

Материалы для бактериологического исследования забирает от боль­ных медицинский персонал лечебного учреждения.

При исследовании на бактерионосительство сбор материала про­водит специально проинструктированный медицинский работник под руководством врача. Ответственность за организацию отбора проб и их доставку в лабораторию возлагается на начальника лечеб­ного учреждения.

Основным материалом для исследования являются испражнения. При заболеваниях, протекающих по типу острого гастроэнтерита, до­полнительно исследуют рвотные массы и промывные воды желудка. Кровь используют для выделения сальмонелл и серологических ис­следований. Желчь (дуоденальное содержимое) исследуют улиц, пе­реболевших сальмонеллезом или холерой, при диспансерном наблю­дении.

Испражнения отбирают после дефекации больного из судна, гор­шка, эмалированных или картонных тарелок (стерильных, без следов дезинфектанта) стерильным шпателем, ложкой или петлей из алюми­ниевой проволоки. Отбирают 2—3 г испражнений, обязательно вклю­чая патологические примеси (слизь, кровь, гной). Собранные порции испражнений помещают в стерильные баночки (пробирки) и сохра­няют на холоде, если срок доставки в лабораторию не превышает 2 ч. В противном случае используют транспортные среды — консерванты (глицериновая смесь, тиогликолевая среда) или среды обогащения (на сальмонеллы — селенитовый бульон, среда Мюллера, магниевая). Объем испражнений при этом должен составлять 1/3 объема консер­ванта (среды обогащения). У больных с тяжелой формой гастроэнте­рита (подозрение на холеру) испражнения обязательно направляют в лабораторию в нативном виде и в 1% щелочной пептонной воде.

Испражнения можно забирать путем введения в прямую кишку на 6-~ 10 см стерильной петли из алюминиевой проволоки или стери­льного ватного тампона. Конец тампона (петли) непосредственно пе­ред употреблением смачивают стерильным 0,9% раствором натрия хлорида или консерванта. Сразу же проводят посев на питательные среды или помещают тампон в пробирку (флакон) с консервантом или средой обогащения (на сальмонеллы — в селенитовую среду).

Для целенаправленного исследования на возбудителей кампило- бактериоза испражнения берут из судна стерильной деревянной па­лочкой немедленно после дефекации или из прямой кишки тампо­ном.

При условии незамедлительной доставки материала в лаборато­рию образцы фекалий, отобранные шпателем в количестве 0,8—1,0 г в стерильные стеклянные флаконы, транспортируются в нативном со­стоянии; допускается хранение нативных фекалий при 4° С не более 1 ч. При необходимости транспортировки материала в течение време­ни, превышающего 1 ч с момента его забора, следует применять про­бирочные транспортные среды: 0,9% раствор натрия хлорида (срок хранения фекалий при комнатной температуре 3—5 ч), 0,1% пептон­ную воду (3—48 ч), тиогликолевую среду для контроля стерильности КС (до 3 сут). В любую из этих транспортных сред, разлитую в про­бирки по 3—5 мл, исследуемый материал помещают в соотношении 1:3-1:5 (об:об). Охлаждение до 4* С позволяет значительно удлиннить сроки транспортировки образцов на транспортных средах: на 0,9% растворе натрия хлорида — до 24 ч, на 0,1% пептонной воде — до 72 ч, на среде КС — до 5—7 сут.

Ректальные мазки транспортируются только на транспортных средах: наилучшей является агаризованная среда КС, на которой кампилобактер сохраняет жизнеспособность от одних суток (без ох­лаждения) и до 3 сут (с охлаждением).

Вирусологические исследования при диарейных заболеваниях

Материалом для выделения возбудителей вирусных диарей служат фекалии больных, взятые в первые дни заболевания. Для сбора фека­лий используют стерильные флаконы с резиновой или пластмассовой пробкой. Для этой цели удобны флаконы из-под пенициллина. Фека­

лии собирают стерильной лопаточкой, заполняя 1/3—1/4 пеницилли­нового флакона, резиновую пробку закрепляют лейкопластырем. Пробы транспортируют в контейнерах, заполненных сухим льдом или другим хладагентом, при температуре не выше 0^е С. Время достав­ки не должно превышать 4—6 ч. При отсутствии хладагента материал можно транспортировать в 50% забуференном растворе глицерина (50% стерильного химически чистого глицерина, 50% стерильного изотонического раствора натрия хлорида, pH 7,4) в течение 1-2 сут.

В связи с тем, что ротавирусы, вирусы группы Norwalk, коронави­русы, калицивирусы и астровирусы плохо репродуцируются в культу­рах клеток, для их обнаружения используют электронную и иммуноэ- лектронную микроскопию. Выделение энтеровирусов и аденовирусов осуществляется на различных линиях первичных или перевиваемых культур клеток в зависимости от вида вируса. Диагностику ротавирус­ных диарей проводят по выявлению ротавирусных антигенов в фека­лиях, используя «тест-систему диагностическую иммуноферментную для обнаружения ротавирусных антигенов» отечественного производ­ства (предприятие «Аквапаст», Санкт-Петербург).

Для выявления иммунологических сдвигов, обусловленных виру­сами-возбудителями острых гастроэнтеритов, исследуют две пробы крови — раннюю, взятую в первые 2—3 дня болезни, и позднюю, взя­тую спустя 2—3 недели от начала заболевания. Можно исследовать и одну пробу сыворотки, однако диагностическая трактовка результа­тов при этом затруднена. Для серологической диагностики использу­ют реакции: нейтрализации, связывания комплемента, торможения гемагглютинации, иммунолюминесценции, радиоиммунологический и иммуноферментный методы. На этиологическую роль вируса ука­зывает четырехкратное и большее увеличение титра антител к нему.

Приложение 3